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毕赤酵母高效合成甜味蛋白Brazzein
1
作者
高鹏
张胜梦
+5 位作者
孙元伟
黄巍巍
邱益彬
徐虹
张琦
李莎
《食品科学》
北大核心
2025年第17期111-119,共9页
通过优化毕赤酵母Komagataella phaffii GS115表达系统,显著提升高倍甜味蛋白Brazzein的分泌表达水平。首先成功获得重组菌株K.phaffii Bra-1,经摇瓶发酵优化,在甲醇诱导体积分数2%、生物素体积分数0.08%、温度30℃、初始pH 6.0的条件下...
通过优化毕赤酵母Komagataella phaffii GS115表达系统,显著提升高倍甜味蛋白Brazzein的分泌表达水平。首先成功获得重组菌株K.phaffii Bra-1,经摇瓶发酵优化,在甲醇诱导体积分数2%、生物素体积分数0.08%、温度30℃、初始pH 6.0的条件下,表达量达到90.2 mg/L。进一步表达元件筛选优化实验表明内源醇氧化酶1启动子(PAOX1)具有最优表达性能;αΔ57-70信号肽(SαΔ57-70)通过增强信号肽柔性使Brazzein表达量达到183.2 mg/L;共表达调控元件蛋白二硫键异构酶进一步将产量提高至209.3 mg/L。在5 L生物反应器中,调控诱导起始OD600为100、pH值恒定在5.0,通过分批补料策略使得Brazzein产量达到1.4 g/L。本研究为甜味蛋白Brazzein的规模化生产与应用奠定了基础。
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关键词
甜味蛋白
BRAZZEIN
毕赤酵母
启动子
信号肽
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职称材料
邻氯苯甲醛与乙酰氯联产反应机制解析及工艺优化
2
作者
王菲
陈献
+2 位作者
崔咪芬
汤吉海
乔旭
《南京工业大学学报(自然科学版)》
北大核心
2025年第2期168-177,共10页
以邻氯苄叉二氯为原料,与乙酸发生酸解反应联产邻氯苯甲醛与乙酰氯,采用气相色谱质谱联用技术,对酸解反应产物进行了鉴别与分析,剖析了酸解反应历程,并优化了酸解反应工艺。根据产物鉴别分析结果,酸解反应的产物除了包括邻氯苯甲醛与乙...
以邻氯苄叉二氯为原料,与乙酸发生酸解反应联产邻氯苯甲醛与乙酰氯,采用气相色谱质谱联用技术,对酸解反应产物进行了鉴别与分析,剖析了酸解反应历程,并优化了酸解反应工艺。根据产物鉴别分析结果,酸解反应的产物除了包括邻氯苯甲醛与乙酰氯两个主产物以外,还包括乙酸酐、邻氯苯乙烯、邻氯苯甲酰氯、2,2二氯甲苯乙酸酯、(2氯苯基)甲二乙酸酯及2氯肉桂酸等副产物。由此推断出邻氯苄叉二氯与乙酸的酸解反应是一个包含平行、连串的复杂反应网络,其中主要副产物为乙酸酐与邻氯苯乙烯,其形成机制为:乙酸与乙酰氯缩合得到乙酸酐;邻氯苯甲醛与乙酸酐先发生Perkin反应生成2氯肉桂酸,再由2氯肉桂酸脱去1分子CO _(2)而形成邻氯苯乙烯。反应机制分析结果表明,两种主要副产物的形成均由系统中具有较高反应活性的乙酰氯产物所贡献,因此,在反应过程将产物乙酰氯及时移出反应系统是工艺优化的方向之一。反应工艺优化结果如下:在反应温度为110℃、乙酸滴加速率为15.8 mL/h、催化剂质量分数为0.2%、酸苄摩尔比值为0.8、反应时间为3 h的条件下,在反应的同时,将产物乙酰氯从体系中分离出来,最终邻氯苄叉二氯与乙酸的转化率分别达到70.66%、82.37%,邻氯苯甲醛与乙酰氯的选择性分别达到98.11%、91.1%。通过反应分离工艺,邻氯苯甲醛与乙酰氯的选择性分别提高了1.53%、9.55%。
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关键词
邻氯苄叉二氯
乙酰氯
酸解
反应网络
PERKIN反应
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职称材料
题名
毕赤酵母高效合成甜味蛋白Brazzein
1
作者
高鹏
张胜梦
孙元伟
黄巍巍
邱益彬
徐虹
张琦
李莎
机构
南京工业大学材料化学工程全国重点实验室
南京工业大学
食品与轻工学院
出处
《食品科学》
北大核心
2025年第17期111-119,共9页
基金
“十四五”国家重点研发计划重点专项(2023YFF1103400)。
文摘
通过优化毕赤酵母Komagataella phaffii GS115表达系统,显著提升高倍甜味蛋白Brazzein的分泌表达水平。首先成功获得重组菌株K.phaffii Bra-1,经摇瓶发酵优化,在甲醇诱导体积分数2%、生物素体积分数0.08%、温度30℃、初始pH 6.0的条件下,表达量达到90.2 mg/L。进一步表达元件筛选优化实验表明内源醇氧化酶1启动子(PAOX1)具有最优表达性能;αΔ57-70信号肽(SαΔ57-70)通过增强信号肽柔性使Brazzein表达量达到183.2 mg/L;共表达调控元件蛋白二硫键异构酶进一步将产量提高至209.3 mg/L。在5 L生物反应器中,调控诱导起始OD600为100、pH值恒定在5.0,通过分批补料策略使得Brazzein产量达到1.4 g/L。本研究为甜味蛋白Brazzein的规模化生产与应用奠定了基础。
关键词
甜味蛋白
BRAZZEIN
毕赤酵母
启动子
信号肽
Keywords
sweet protein
Brazzein
Komagataella phaffii
promoter
signal peptide
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
邻氯苯甲醛与乙酰氯联产反应机制解析及工艺优化
2
作者
王菲
陈献
崔咪芬
汤吉海
乔旭
机构
南京工业大学
化工学院
南京工业大学材料化学工程全国重点实验室
出处
《南京工业大学学报(自然科学版)》
北大核心
2025年第2期168-177,共10页
文摘
以邻氯苄叉二氯为原料,与乙酸发生酸解反应联产邻氯苯甲醛与乙酰氯,采用气相色谱质谱联用技术,对酸解反应产物进行了鉴别与分析,剖析了酸解反应历程,并优化了酸解反应工艺。根据产物鉴别分析结果,酸解反应的产物除了包括邻氯苯甲醛与乙酰氯两个主产物以外,还包括乙酸酐、邻氯苯乙烯、邻氯苯甲酰氯、2,2二氯甲苯乙酸酯、(2氯苯基)甲二乙酸酯及2氯肉桂酸等副产物。由此推断出邻氯苄叉二氯与乙酸的酸解反应是一个包含平行、连串的复杂反应网络,其中主要副产物为乙酸酐与邻氯苯乙烯,其形成机制为:乙酸与乙酰氯缩合得到乙酸酐;邻氯苯甲醛与乙酸酐先发生Perkin反应生成2氯肉桂酸,再由2氯肉桂酸脱去1分子CO _(2)而形成邻氯苯乙烯。反应机制分析结果表明,两种主要副产物的形成均由系统中具有较高反应活性的乙酰氯产物所贡献,因此,在反应过程将产物乙酰氯及时移出反应系统是工艺优化的方向之一。反应工艺优化结果如下:在反应温度为110℃、乙酸滴加速率为15.8 mL/h、催化剂质量分数为0.2%、酸苄摩尔比值为0.8、反应时间为3 h的条件下,在反应的同时,将产物乙酰氯从体系中分离出来,最终邻氯苄叉二氯与乙酸的转化率分别达到70.66%、82.37%,邻氯苯甲醛与乙酰氯的选择性分别达到98.11%、91.1%。通过反应分离工艺,邻氯苯甲醛与乙酰氯的选择性分别提高了1.53%、9.55%。
关键词
邻氯苄叉二氯
乙酰氯
酸解
反应网络
PERKIN反应
Keywords
o-chlorobenzal chloride
acetyl chloride
acidolysis
reaction networks
Perkin reaction
分类号
TQ213 [化学工程—有机化工]
TQ215 [化学工程—有机化工]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
毕赤酵母高效合成甜味蛋白Brazzein
高鹏
张胜梦
孙元伟
黄巍巍
邱益彬
徐虹
张琦
李莎
《食品科学》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
邻氯苯甲醛与乙酰氯联产反应机制解析及工艺优化
王菲
陈献
崔咪芬
汤吉海
乔旭
《南京工业大学学报(自然科学版)》
北大核心
2025
0
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职称材料
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