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人CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及初步功能研究
被引量：
5
1
作者
孙杰
刘玉华
+7 位作者
陈永井
郭静雅
陈昌友
胡玲玲
陈明心
杜阳阳
徐耀瑜
邱玉华
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期387-391,共5页
目的:构建含有人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3,研究CXCR3与其配体Mig、IP-10及I-TAC相互作用引起的L929-CXCR3的迁移效应。方法:TRIzol一步法从经PHA和IL-2活化的人PBMC中抽提总RN...
目的:构建含有人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3,研究CXCR3与其配体Mig、IP-10及I-TAC相互作用引起的L929-CXCR3的迁移效应。方法:TRIzol一步法从经PHA和IL-2活化的人PBMC中抽提总RNA,RT-PCR扩增人CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集培养上清感染L929细胞,500μg/mlzeocin加压筛选获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3。采用流式细胞术和RT-PCR分别从蛋白及基因水平对CXCR3的表达进行鉴定。Transwell分析L929-CXCR3细胞在Mig、IP-10及I-TAC作用下的迁移率。结果:构建了含人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了人CXCR3基因转染细胞株L929-CXCR3,其膜表面CXCR3分子的阳性表达率为98.4%;趋化L929-CXCR3发生迁移的最小配体浓度分别为Mig10ng/ml、IP-105ng/ml及I-TAC1ng/ml,相应迁移率分别为2.46%、2.34%及2.24%。结论:L929-CXCR3细胞株的建立为研究CXCR3信号转导与生物学功能及制备相应的单克隆抗体奠定了基础。
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关键词
CXCR3
趋化因子
基因转染
逆转录病毒
稳定表达
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职称材料
小鼠CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究
被引量：
3
2
作者
孙杰
刘玉华
+5 位作者
陈永井
郭静雅
陈昌友
胡玲玲
陈明心
邱玉华
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期627-630,共4页
目的：构建含有小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体，获得稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3，研究CXCR3与其配IP-10相互作用引起的L929-mCXCR3的迁移效应。方法：取1只雌性BALB／c小鼠（7周龄），尾静脉注射0．5mgCon...
目的：构建含有小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体，获得稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3，研究CXCR3与其配IP-10相互作用引起的L929-mCXCR3的迁移效应。方法：取1只雌性BALB／c小鼠（7周龄），尾静脉注射0．5mgConA／只，12h后取其脾脏，研磨成细胞悬液后，分离获得脾脏细胞；用含5万U／L人IL-2的RPMll640培养基培养3d；收集细胞，TRIzol一步法抽提总RNA，RT—PCR扩增小鼠CXCR3全长基因，装入逆转录病毒载体pEGZ—term，与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T，收集含完整逆转录病毒颗粒的293T培养上清感染L929细胞，重复感染3次，筛选获得含Zeocin抗性的稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株。采用流式细胞术（FCM）和RT—PCR对CXCR3分子的表达进行鉴定。Transwell分析基因转染细胞株L929-mCXCR3在IP．10作用下的迁移能力。结果：构建了含小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体，建立了稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3，其膜表面CXCR3分子阳性表达率为97．0％；该基因转染细胞株在IP-10的介导下可定向迁移，迁移率为4．356％。结论：L929-mCXCR3细胞株为研究CXCR3信号通路的生物学特性、肿瘤转移模型的建立和抗小鼠CXCR3单克隆抗体的研制奠定了基础。
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关键词
CXCR3
趋化因子
基因转染
逆转录病毒
稳定表达
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职称材料
题名
人CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及初步功能研究
被引量：
5
1
作者
孙杰
刘玉华
陈永井
郭静雅
陈昌友
胡玲玲
陈明心
杜阳阳
徐耀瑜
邱玉华
机构
苏州
大学
医学部免疫学系
杭州师范
大学
附属
医院
检验
科
南京医科大学附属第二医院检验科
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期387-391,共5页
基金
科技部科技重大专项资助(No.2009ZX09103-705)
文摘
目的:构建含有人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3,研究CXCR3与其配体Mig、IP-10及I-TAC相互作用引起的L929-CXCR3的迁移效应。方法:TRIzol一步法从经PHA和IL-2活化的人PBMC中抽提总RNA,RT-PCR扩增人CXCR3全长基因,装入逆转录病毒载体pEGZ-term,与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,收集培养上清感染L929细胞,500μg/mlzeocin加压筛选获得稳定表达人CXCR3分子的基因转染细胞株L929-CXCR3。采用流式细胞术和RT-PCR分别从蛋白及基因水平对CXCR3的表达进行鉴定。Transwell分析L929-CXCR3细胞在Mig、IP-10及I-TAC作用下的迁移率。结果:构建了含人CXCR3基因的重组逆转录病毒载体,建立了人CXCR3基因转染细胞株L929-CXCR3,其膜表面CXCR3分子的阳性表达率为98.4%;趋化L929-CXCR3发生迁移的最小配体浓度分别为Mig10ng/ml、IP-105ng/ml及I-TAC1ng/ml,相应迁移率分别为2.46%、2.34%及2.24%。结论:L929-CXCR3细胞株的建立为研究CXCR3信号转导与生物学功能及制备相应的单克隆抗体奠定了基础。
关键词
CXCR3
趋化因子
基因转染
逆转录病毒
稳定表达
Keywords
CXCR3
Chemokine
Gene transfection
Retrovirus
Stably expression
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
小鼠CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究
被引量：
3
2
作者
孙杰
刘玉华
陈永井
郭静雅
陈昌友
胡玲玲
陈明心
邱玉华
机构
苏州
大学
医学部免疫学系
杭州师范
大学
附属
医院
检验
科
南京医科大学附属第二医院检验科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期627-630,共4页
基金
国家科技重大专项资助项目(2009ZX09103-705)
文摘
目的：构建含有小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体，获得稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3，研究CXCR3与其配IP-10相互作用引起的L929-mCXCR3的迁移效应。方法：取1只雌性BALB／c小鼠（7周龄），尾静脉注射0．5mgConA／只，12h后取其脾脏，研磨成细胞悬液后，分离获得脾脏细胞；用含5万U／L人IL-2的RPMll640培养基培养3d；收集细胞，TRIzol一步法抽提总RNA，RT—PCR扩增小鼠CXCR3全长基因，装入逆转录病毒载体pEGZ—term，与两辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T，收集含完整逆转录病毒颗粒的293T培养上清感染L929细胞，重复感染3次，筛选获得含Zeocin抗性的稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株。采用流式细胞术（FCM）和RT—PCR对CXCR3分子的表达进行鉴定。Transwell分析基因转染细胞株L929-mCXCR3在IP．10作用下的迁移能力。结果：构建了含小鼠CXCR3基因的重组逆转录病毒载体，建立了稳定表达小鼠CXCR3分子的基因转染细胞株L929-mCXCR3，其膜表面CXCR3分子阳性表达率为97．0％；该基因转染细胞株在IP-10的介导下可定向迁移，迁移率为4．356％。结论：L929-mCXCR3细胞株为研究CXCR3信号通路的生物学特性、肿瘤转移模型的建立和抗小鼠CXCR3单克隆抗体的研制奠定了基础。
关键词
CXCR3
趋化因子
基因转染
逆转录病毒
稳定表达
Keywords
CXCR3
chemokine
gene transfection
retrovirus
stably expression
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及初步功能研究
孙杰
刘玉华
陈永井
郭静雅
陈昌友
胡玲玲
陈明心
杜阳阳
徐耀瑜
邱玉华
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
5
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职称材料
2
小鼠CXCR3基因转染细胞株的构建、鉴定及生物学功能研究
孙杰
刘玉华
陈永井
郭静雅
陈昌友
胡玲玲
陈明心
邱玉华
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
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