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铁过载对斑马鱼成骨影响的机制 被引量:5
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作者 姜宇 阎一林 +1 位作者 朱国兴 徐又佳 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期713-717,共5页
目的通过高通量转录组的方法测序高铁环境生存的斑马鱼与和野生型的斑马鱼,通过比较筛选出铁过载对于成骨影响的通道,通过在体以及离体的一系列实验证实铁过载对这些通道的作用。方法通过在斑马鱼高铁环境下生存,造成斑马鱼铁过载,在4... 目的通过高通量转录组的方法测序高铁环境生存的斑马鱼与和野生型的斑马鱼,通过比较筛选出铁过载对于成骨影响的通道,通过在体以及离体的一系列实验证实铁过载对这些通道的作用。方法通过在斑马鱼高铁环境下生存,造成斑马鱼铁过载,在4天后提取其RNA和野生型斑马鱼提取的RNA进行高通量转录组测序比较,筛选出成骨Bmp2通道,并用定量QPCR验证。在体实验中将Runx2a标记的转基因斑马鱼在高铁环境下与正常环境在第九天进行比较,观察其荧光的变化;离体实验中,用Bmp2a带标签的c DNA和Runx2a带标签的c DNA的细胞进行转染,进行荧光素酶报告基因实验,然后用铁干预,观察其变化。结果通过高通量转录组测序发现高铁对于Bmp2抑制,并用定量验证发现铁过载后Runx2a,Runx2b,sp7等成骨基因均下调,观察发现Runx2a标记的转基因斑马鱼高铁环境下与正常环境相比基因表达明显下调,在细胞转染实验中,荧光素酶报告基因Runx2a在Bmp2a转染下大幅升高,转染铁后Runx2a下降。结论通过高通量转录组测序,我们发现铁过载对于BMP2的抑制影响,运用在体以及离体的一系列实验证实铁过载对Bmp2的抑制作用从而导致成骨代谢的异常。 展开更多
关键词 高通量转录组测序 成骨基因 转基因鱼 骨形态发生蛋白2通道
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斑马鱼中骨形态发生蛋白2a敲降对骨代谢的影响 被引量:1
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作者 姜宇 王亮 +1 位作者 朱国兴 徐又佳 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期165-171,共7页
目的通过显微注射吗啉环反义寡核苷酸(morpholino oligo,MO),使斑马鱼骨形态发生蛋白2a (bone morphgenetic protein 2a,BMP2a)基因敲降,观察BMP2a基因表达抑制后对斑马鱼骨代谢的影响。方法以受精后半小时斑马鱼受精卵为模型,将MO显微... 目的通过显微注射吗啉环反义寡核苷酸(morpholino oligo,MO),使斑马鱼骨形态发生蛋白2a (bone morphgenetic protein 2a,BMP2a)基因敲降,观察BMP2a基因表达抑制后对斑马鱼骨代谢的影响。方法以受精后半小时斑马鱼受精卵为模型,将MO显微注射到受精卵(20个,对照组相同处理),对注射MO后及野生型(wild type,WT)的幼鱼于第9天分别进行茜素红染色,比较硬骨的形态差异,同时运用Image J软件对染色体积进行统计,比较差异。对注射MO后的幼鱼于第4天提取的c DNA采用实时荧光定量PCR(QPCR)方法检测Runx2a、Runx2b、Sp7、Alp骨形成相关基因和WT基因组的成骨下游基因表达的差异。对注射MO后第4天的斑马鱼予以成骨代表性的两个基因Runx2a进行原位杂交,比较WT幼鱼相关成骨基因表达部位的差异和信号强弱。结果与WT染色相比,注射抑制BMP2a的MO后第9天斑马鱼硬骨茜素红染色变浅,体积更小(MO vs. WT:3 276±153 vs. 4 768±231,P<0. 05)。QPCR检测显示,注射MO后第4天的斑马鱼成骨代谢基因表达量与WT斑马鱼对应基因相比均下调(Runx2a:0. 348±0. 002 vs. 1. 007±0. 032;Runx2b:0. 525±0. 021 vs. 1. 013±0. 021; Sp7:0. 483±0. 026 vs. 1. 124±0. 173; Alp:0. 136±0. 012 vs. 1. 233±0. 237; P<0. 05)。就Runx2a原位杂交而言,注射MO后第4天斑马鱼信号表达弱于同期WT斑马鱼。结论通过基因敲降技术使得斑马鱼BMP2下调,直观地观察到斑马鱼的骨发育迟缓,运用分子手段发现其基因下调造成一系列的成骨基因降低,用原位半定量方法靶向定位到斑马鱼蝶骨上,基因下调后造成斑马鱼的蝶骨信号消失。 展开更多
关键词 斑马鱼 吗啉环反义寡核苷酸 骨形态发生蛋白2a 骨形成
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铁蓄积对斑马鱼幼鱼骨发育的影响 被引量:1
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作者 姜宇 荣晓旭 朱国兴 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 2017年第4期362-366,共5页
目的通过对斑马鱼受精卵进行高铁环境干预,观察铁积蓄对斑马鱼幼鱼骨代谢的影响,探讨铁蓄积对于骨代谢的影响。方法不同浓度的枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)(25、50、100、200 mg/L)干预野生斑马鱼交配,收集鱼卵置于4个含相... 目的通过对斑马鱼受精卵进行高铁环境干预,观察铁积蓄对斑马鱼幼鱼骨代谢的影响,探讨铁蓄积对于骨代谢的影响。方法不同浓度的枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)(25、50、100、200 mg/L)干预野生斑马鱼交配,收集鱼卵置于4个含相应FAC浓度的水环境中,每24小时予以更换含同样浓度FAC的水1次,同时设不含FAC为对照组,观察斑马鱼在不同铁环境下生存的情况。于第4天采用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantification-polymerase chain reaction,FQ-PCR)法检测相关成骨代谢的基因表达,比较和对照组基因组的成骨下游基因的差异,并测量幼鱼的铁含量及铁染色,观察铁含量变化;于第9天进行茜素红染色,比较与对照组的硬骨形态差异。结果不同浓度FAC处理后,斑马鱼骨矿化面积成剂量依赖性降低,其中200 mg/L FAC组与对照组对比T值为40.567(P<0.01);FQ-PCT结果显示:相关早期表达成骨代谢的基因表达量与对照组斑马鱼成骨基因表达相比显著下调,差异有统计学意义(P<0.05);铁染色结果显示:FAC组斑马鱼色素沉着变深,与对照组相比,100和200 mg/L两组的幼鱼铁含量升高[(21.5±3.4)μg/L vs.(12.5±3.6)μg/L,(22.8±2.9)μg/L vs.(12.5±3.6)μg/L],差异有统计学意义(P<0.05);茜素红染色结果显示:与对照组相比,FAC组硬骨染色变浅且肋骨及尾鳍未发育。结论高铁环境下造成斑马鱼体内铁蓄积,使斑马鱼成骨基因降低,造成骨发育迟缓,矿化障碍。 展开更多
关键词 斑马鱼 铁蓄积 成骨代谢
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广场舞对绝经期后骨质疏松患者的骨密度和骨转换指标影响的研究 被引量:22
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作者 秦晋泽 荣晓旭 +1 位作者 朱国兴 姜宇 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期43-46,50,共5页
目的观察广场舞对绝经后骨质疏松患者的骨密度、骨转换指标的影响。方法研究组:口服钙尔奇D600 mg每日1次的同时,联合广场舞运动方法干预,每周5次,每次平均0.5~1.0小时;对照组:单纯采用口服钙尔奇D600 mg每日1次,观察两组实验前及实验干... 目的观察广场舞对绝经后骨质疏松患者的骨密度、骨转换指标的影响。方法研究组:口服钙尔奇D600 mg每日1次的同时,联合广场舞运动方法干预,每周5次,每次平均0.5~1.0小时;对照组:单纯采用口服钙尔奇D600 mg每日1次,观察两组实验前及实验干预6个月后受试者骨密度、骨转换指标变化、骨痛。结果 (1)骨密度变化:研究组治疗6个月后,腰椎L2-4、股骨颈部的骨密度较治疗前明显升高(P<0.05),Ward’s区骨密度无显著性改变。而对照组各部位骨密度较前无明显改变(P>0.05)。(2)血生化中血钙、血磷及碱性磷酸酶指标值:两组生化指标在治疗前后无统计学差异(P>0.05);治疗6个月后P1NP的水平明显升高(P<0.05),β-CTX水平未有明显改变(P>0.05)。(3)疼痛程度改善情况:两组治疗前后疼痛分级比较,研究组疼痛明显改善。结论广场舞运动能部分改善绝经后妇女骨密度,并且可以缓解骨质疏松引起的疼痛,是一种切实可行的预防和治疗骨质疏松症的临床方案。 展开更多
关键词 广场舞 绝经后骨质疏松症 骨密度 骨转换指标
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糖皮质激素在受体介导下抑制胶原编码基因表达引发软骨成骨损伤机制
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作者 冯武兵 姜宇 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2023年第4期354-361,共8页
目的研究糖皮质激素诱导软骨损伤的内在机制。方法选用3种不同浓度的经典糖皮质激素泼尼松龙处理斑马鱼幼鱼,用同样量的二甲基亚砜(0.01%)处理同胞幼鱼作为对照组。在第4、5和6天采集处理后的样本进行软骨染色实验;采集6 d后的样本进行q... 目的研究糖皮质激素诱导软骨损伤的内在机制。方法选用3种不同浓度的经典糖皮质激素泼尼松龙处理斑马鱼幼鱼,用同样量的二甲基亚砜(0.01%)处理同胞幼鱼作为对照组。在第4、5和6天采集处理后的样本进行软骨染色实验;采集6 d后的样本进行qRT-PCR分析;使用JASPAR在线软件预测和分析6个胶原编码基因的糖皮质激素反应元件,并构建由6个胶原编码基因组成的启动子驱动的荧光素酶报告载体,将其与糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)和/或糖皮质激素泼尼松(prednisone,PN)转染到细胞中,测量荧光素酶活性。结果PN 25μmol/L浓度对斑马鱼软骨造成明显损伤。随着PN处理浓度的增加,胶原蛋白编码基因相对mRNA水平显著降低。单次转染GR后,除col10a1a外,所有胶原编码基因的荧光素酶活性均降低;单次添加PN后,6个基因的荧光素酶活性均降低;当GR和PN同时添加时,荧光素酶活性显著降低。结论PN可引起明显的斑马鱼软骨发育损伤,胶原蛋白编码基因表达降低是PN引起斑马鱼软骨损伤的原因,而PN通过GR抑制胶原编码基因的表达。 展开更多
关键词 糖皮质激素 糖皮质激素性骨质疏松 软骨 糖皮质激素受体 胶原蛋白编码基因
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