目的:制备过敏原Der p 23重组蛋白并建立其特异性IgE化学发光免疫检测方法。方法:以屋尘螨Total RNA为模板,依据GenBank公布的序列(No.EU414751)设计并合成引物,RT-PCR扩增Der p 23编码基因,构建原核表达质粒pET28a(+)-Der p 23,转化大...目的:制备过敏原Der p 23重组蛋白并建立其特异性IgE化学发光免疫检测方法。方法:以屋尘螨Total RNA为模板,依据GenBank公布的序列(No.EU414751)设计并合成引物,RT-PCR扩增Der p 23编码基因,构建原核表达质粒pET28a(+)-Der p 23,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,柱层析纯化收集目的蛋白并采用SDS-PAGE、Western blot鉴定。以此重组蛋白包被化学发光板,建立化学发光免疫分析法检测经ImmunoCAP检测的过敏性鼻炎或/和过敏性哮喘患者血清。结果:纯化后的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定可见单一条带,定量分析呈现0.5 ml、0.25 mg/ml、纯度>95%的重组蛋白纯化成功。以该重组蛋白建立化学发光方法检测屋尘螨过敏性哮喘或/和过敏性鼻炎患者血清,阳性率为89.8%,以国际金标准ImmunoCAP方法同步检测Der p 23单组分特异IgE阳性率为95.92%,两种方法检测结果差异无统计学意义(χ^2=0.237,P=0.626)。结论:获得了屋尘螨过敏原重组蛋白Der p 23,成功建立了其化学发光免疫检测方法,为过敏原单组分分辨诊断方法建立提供了技术平台。展开更多
文摘目的:制备过敏原Der p 23重组蛋白并建立其特异性IgE化学发光免疫检测方法。方法:以屋尘螨Total RNA为模板,依据GenBank公布的序列(No.EU414751)设计并合成引物,RT-PCR扩增Der p 23编码基因,构建原核表达质粒pET28a(+)-Der p 23,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,柱层析纯化收集目的蛋白并采用SDS-PAGE、Western blot鉴定。以此重组蛋白包被化学发光板,建立化学发光免疫分析法检测经ImmunoCAP检测的过敏性鼻炎或/和过敏性哮喘患者血清。结果:纯化后的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定可见单一条带,定量分析呈现0.5 ml、0.25 mg/ml、纯度>95%的重组蛋白纯化成功。以该重组蛋白建立化学发光方法检测屋尘螨过敏性哮喘或/和过敏性鼻炎患者血清,阳性率为89.8%,以国际金标准ImmunoCAP方法同步检测Der p 23单组分特异IgE阳性率为95.92%,两种方法检测结果差异无统计学意义(χ^2=0.237,P=0.626)。结论:获得了屋尘螨过敏原重组蛋白Der p 23,成功建立了其化学发光免疫检测方法,为过敏原单组分分辨诊断方法建立提供了技术平台。
