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GCS通过MEK/ERK通路调控白血病多药耐药细胞凋亡相关基因bcl-2的表达 被引量:5
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作者 王倩 邹健 +3 位作者 张秀芬 穆会君 殷莹 谢平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期114-118,共5页
目的:探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)是否通过MEK/ERK信号通路调控凋亡相关基因bcl-2的表达,从而诱导人白血病K562/A02细胞多药耐药。方法:用小干扰RNA(siRNA)靶向干扰K562/A02细胞中GCS的表达,real-time PCR、Western blotting检测Bcl-... 目的:探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)是否通过MEK/ERK信号通路调控凋亡相关基因bcl-2的表达,从而诱导人白血病K562/A02细胞多药耐药。方法:用小干扰RNA(siRNA)靶向干扰K562/A02细胞中GCS的表达,real-time PCR、Western blotting检测Bcl-2、磷酸化及总ERK水平;用MEK特异性化学抑制剂U0126抑制MEK/ERK信号通路的活化,real-time PCR与Western blotting技术分别检测Bcl-2 mRNA与蛋白水平;CCK-8试剂盒检测细胞存活情况。结果:与阴性对照组比较,GCS siRNA明显抑制K562/A02细胞GCS和Bcl-2的表达,并抑制MEK/ERK信号通路的活化;U0126使Bcl-2 mRNA及蛋白水平呈浓度依赖性下降,并使K562/A02细胞ADM敏感性增加。结论:GCS通过MEK/ERK信号通路调控K562/A02细胞株中凋亡相关基因bcl-2的表达,从而诱导白血病细胞多药耐药。 展开更多
关键词 葡萄糖神经酰胺合成酶 MEK/ERK信号通路 基因 BCL-2 抗药性 多药
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硫酸酯化米糠多糖结构分析及其抗肿瘤活性研究 被引量:5
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作者 王莉 朱丽丹 +1 位作者 盛慧明 陈正行 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期18-22,共5页
采用氯磺酸-吡啶法对米糠多糖(RBPS2 a)进行硫酸酯化修饰得到硫酸酯化米糠多糖(SRBPS2 a),使用HPGPC测定SRBPS2 a的分子质量,利用红外光谱和13CNMR进行结构分析,应用体内、外抗肿瘤试验对SRBPS2 a抗肿瘤活性进行评价。结果发现:SRBPS2 ... 采用氯磺酸-吡啶法对米糠多糖(RBPS2 a)进行硫酸酯化修饰得到硫酸酯化米糠多糖(SRBPS2 a),使用HPGPC测定SRBPS2 a的分子质量,利用红外光谱和13CNMR进行结构分析,应用体内、外抗肿瘤试验对SRBPS2 a抗肿瘤活性进行评价。结果发现:SRBPS2 a的取代度为1.29,分子质量为3.5×105u,在体内和体外对小鼠乳腺癌细胞EMT-6有显著的抑制作用。RBPS2 a经硫酸酯化修饰后,SRBPS2 a主链结构保持-β(1→3)-D-甘露糖不变,侧链被切除,硫酸基团的取代发生在C-2和C-4位上,C-6氧化形成糖醛酸甲酯。 展开更多
关键词 脱脂米糠 酯化多糖 抗肿瘤活性 取代度 结构特性
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大鼠原发性脑干损伤延脑淀粉样β蛋白及其蛋白前体的表达 被引量:3
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作者 杨树东 孙荣超 +3 位作者 梁加贝 周志毅 穆会君 芮俊 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期411-414,共4页
目的探讨早期诊断原发性脑干损伤(PBSI)中弥散性轴索损伤(DAI)的敏感标记。方法应用免疫组织化学SP法及RT—PCR技术研究在大鼠原发性脑干损伤模型中,延脑DAI与淀粉样β蛋白(Aβ蛋白)的表达及淀粉样β前体蛋白(β—APP)mRNA的... 目的探讨早期诊断原发性脑干损伤(PBSI)中弥散性轴索损伤(DAI)的敏感标记。方法应用免疫组织化学SP法及RT—PCR技术研究在大鼠原发性脑干损伤模型中,延脑DAI与淀粉样β蛋白(Aβ蛋白)的表达及淀粉样β前体蛋白(β—APP)mRNA的半定量分析,以此来评估进行DAI早期诊断的有效性。结果免疫组化Aβ染色神经轴突测量3~24h损伤组,轴突明显增粗,并且稳步增加,与对照组相比差异均有统计学意义,并且与时间呈正相关,β—APP mRNA表达增加最早从1h损伤组开始,并于3h达到高峰。结论β—APP是DAI的敏感性和特异性标记,RT—PCR技术是一种快速的和敏感的方法,再结合免疫组化技术检测Aβ蛋白,可能对早期诊断DAI是非常有效的。 展开更多
关键词 轴索损伤 淀粉样Β蛋白 淀粉样β前体蛋白 逆转录-多聚酶链反应 免疫组织化学
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毛囊角化病患者ATP2A2基因新剪切位点突变的检测研究 被引量:2
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作者 杜旭峰 施和建 +4 位作者 顾永 穆会君 胡君 杨树东 张国龙 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期583-586,共4页
目的:检测1例严重表型毛囊角化病患者ATP2A2基因的突变。方法:采用聚合酶链反应及直接测序法对该患者进行ATP2A2基因的突变位点检测,运用反转录技术检测突变导致的RNA水平的变化,同时对120名无血缘关系健康者作为对照进行测序验证。结果... 目的:检测1例严重表型毛囊角化病患者ATP2A2基因的突变。方法:采用聚合酶链反应及直接测序法对该患者进行ATP2A2基因的突变位点检测,运用反转录技术检测突变导致的RNA水平的变化,同时对120名无血缘关系健康者作为对照进行测序验证。结果:通过筛查在患者ATP2A2基因中发现一个新的剪切位点突变IVS18+5G>C,反转录分析证实该突变的发生导致ATP2A2基因转录后在其突变等位基因的18号和19号外显子之间插入了27个核苷酸。结论:该例毛囊角化病患者的检测结果进一步扩充了ATP2A2基因的突变库,并为阐明ATP2A2基因的突变导致该病发生的分子机制提供了帮助。 展开更多
关键词 毛囊角化病 ATP2A2基因 突变
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与胶原纤维的作用是Mller细胞黏附于玻璃体的主要机制 被引量:2
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作者 陆融 姚勇 +1 位作者 乔伟振 赵伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期58-60,75,共4页
目的:观察Mller细胞在玻璃体凝胶上的黏附并分析其机制。方法:猪视网膜Mller细胞提取培养并以酸性纤维蛋白、波形蛋白和谷氨酰胺合成酶免疫荧光染色确认,分别与抗细胞表面胶原受体整联蛋白α2β1抗体、抗透明质酸受体CD44抗体培养后... 目的:观察Mller细胞在玻璃体凝胶上的黏附并分析其机制。方法:猪视网膜Mller细胞提取培养并以酸性纤维蛋白、波形蛋白和谷氨酰胺合成酶免疫荧光染色确认,分别与抗细胞表面胶原受体整联蛋白α2β1抗体、抗透明质酸受体CD44抗体培养后,播于新鲜玻璃体上培养2 h,以PBS冲洗3次后计数剩余细胞数目,并与未用抗体培养的对照组相比较。结果:所提取细胞97.7%胶质纤维酸性蛋白染色阳性,94.6%波形蛋白染色阳性,86.0%谷氨酰胺合成酶染色阳性。细胞在玻璃体上培养2 h后开始附着于玻璃体,培养72 h以后细胞增殖形成网状结构并进入玻璃体凝胶中;抗整联蛋白α2β1抗体可使剩余细胞较对照组显著减少,抗CD44抗体不产生明显差异。结论:Mller细胞可黏附于玻璃体上,增殖并进入玻璃体凝胶,其表面胶原受体与玻璃体Ⅱ型胶原纤维的作用是其附着于玻璃体的主要机制。 展开更多
关键词 MÜLLER细胞 玻璃体 整联蛋白α2β1 CD44
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尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒感染3年分析 被引量:2
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作者 浦洁 杨挺 张滨 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1305-1307,共3页
目的:对本院2010-2012年尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒(HPV)感染现状进行分析,探讨HPV亚型的分布特点。方法:采用基因芯片检测法,对尖锐湿疣的皮损组织进行HPV检测和分型。结果:773例标本检出率为95.1%,依次为低危型HPV6、11、43、42和高危... 目的:对本院2010-2012年尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒(HPV)感染现状进行分析,探讨HPV亚型的分布特点。方法:采用基因芯片检测法,对尖锐湿疣的皮损组织进行HPV检测和分型。结果:773例标本检出率为95.1%,依次为低危型HPV6、11、43、42和高危型HPV16、18、52、66、33。各年度HPV亚型分布变化不大。高危型占24.0%,混合感染占37.8%。30岁以内的患者发生高危型、混合感染显著增加。女性患者发生高危型HPV16、66高于男性。结论:HPV6、11、16型感染是尖锐湿疣发病的主要基因型,高危型感染和混合感染趋于年轻化。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒 基因型 基因芯片
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HCV不同编码区重组基因的蛋白表达丰度分析 被引量:1
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作者 乔伟振 孟继鸿 +3 位作者 董晨 谢平 杨燕 李小雯 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期722-725,766,共5页
目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)不同基因片段重组载体在pET大肠杆菌系统中的蛋白表达情况。方法:分别将构建好的含有HCVC、NS3、NS5片段基因的pET重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,通过卡那霉素抗性筛选转化子。经过IPTG诱导表达相应的... 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)不同基因片段重组载体在pET大肠杆菌系统中的蛋白表达情况。方法:分别将构建好的含有HCVC、NS3、NS5片段基因的pET重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,通过卡那霉素抗性筛选转化子。经过IPTG诱导表达相应的重组蛋白,通过Ni-NTA凝胶亲和层析纯化各目标蛋白,并分别计算各重组蛋白的浓度。结果:分别诱导表达含有HCVC、NS3、NS5片段基因的重组蛋白,各蛋白的浓度分别为:3.557(1型NS3)、4.238(6型NS3)、2.087(NS5)、1.490g/L(C)。结论:在相同条件下,诱导表达含有HCV不同基因片段的重组载体,所得到的蛋白丰度存在差异。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 pET系统 大肠杆菌 蛋白表达
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遗传性对称性色素异常症两家系基因突变检测研究 被引量:1
8
作者 张国龙 施和建 +4 位作者 邵敏华 李明 穆会君 顾永 杜旭峰 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期129-131,共3页
目的:检测遗传性对称性色素异常症患者家系中腺苷脱氨酶(ADAR)基因的突变。方法:收集2个遗传性对称性色素异常症患者家系的临床资料,采用聚合酶链反应及直接测序法对家系内成员ADAR基因突变位点进行检测,同时对50名无血缘关系健康对照... 目的:检测遗传性对称性色素异常症患者家系中腺苷脱氨酶(ADAR)基因的突变。方法:收集2个遗传性对称性色素异常症患者家系的临床资料,采用聚合酶链反应及直接测序法对家系内成员ADAR基因突变位点进行检测,同时对50名无血缘关系健康对照者的该位点进行直接测序。结果:在2个家系的患者中分别检测到2个不同的ADAR基因移码突变位点c.633insT和c.2742delC,而在家系内非患者及正常对照者中均未发现该2个突变。结论:该研究中2个遗传性对称性色素异常症家系中的患者存在ADAR基因的移码突变,且皆为首次报道。 展开更多
关键词 色素异常症 对称性 遗传性 ADAR基因 突变
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肾透明细胞癌中转化生长因子-β1、基质金属蛋白酶2表达及其临床意义的相关性研究 被引量:1
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作者 杨树东 孙荣超 +7 位作者 穆会君 徐卓群 范钦和 张丽华 吴光斌 梁加贝 陈瑛 芮俊 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1037-1042,1060,共7页
目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法测定80例RCCC及30例癌周组织中TGF-β1与MMP... 目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases 2,MMP2)在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法测定80例RCCC及30例癌周组织中TGF-β1与MMP2的表达,同时采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)测定43例RCCC及43例癌周组织中TGF-β1与MMP2基因的表达。结果:RCCC中TGF-β1、MMP2表达强度均明显高于癌周组织,TGF-β1、MMP2表达与RCCC病理分级、临床分期相关;RCCC中TGF-β1与MMP2表达强度具有相关性;单因素生存分析显示TGF-β1、MMP2高表达与患者预后不良有关(P均<0.05)。结论:TGF-β1、MMP2基因的表达参与了RCCC的发展,并且二者之间具有一定的相关性,提示可以作为判断RCCC预后的二个有效的联合分子指标。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 转化生长因子-Β1 基质金属蛋白酶-2 逆转录-多聚酶链反应 免疫组织化学
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视网膜Müller细胞透明质酸酶功能分析 被引量:1
10
作者 陆融 乔伟振 赵伟 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第6期538-540,共3页
目的分析离体培养的视网膜Müller细胞对透明质酸的降解功能。方法提取的Mller细胞来自酶降解的猪后极部视网膜,并以3种不同细胞标记:胶质纤维酸性蛋白、波形蛋白、谷氨酰胺合成酶进行免疫荧光确认。细胞分为4组,其中1组培养液中... 目的分析离体培养的视网膜Müller细胞对透明质酸的降解功能。方法提取的Mller细胞来自酶降解的猪后极部视网膜,并以3种不同细胞标记:胶质纤维酸性蛋白、波形蛋白、谷氨酰胺合成酶进行免疫荧光确认。细胞分为4组,其中1组培养液中加入透明质酸,2组培养液中加入透明质酸和抗integrinα2β1抗体,3组培养液中加入透明质酸和抗CD44抗体,4组培养液中未加入其他试剂。细胞预培养后,收集上清液。按配置聚丙烯酰胺凝胶的方法 ,加入透明质酸,不加入十二烷基硫酸钠制作底物胶。样品在底物胶电泳后,凝胶在酶降解缓冲液中培养24h,淋洗后以5g.L-1亮蓝染色、体积分数7%醋酸脱色,观察有无透明质酸降解后形成的脱色条带。结果 93.8%细胞胶质纤维酸性蛋白抗体染色阳性,94.6%细胞波形蛋白抗体染色阳性,88.6%细胞谷氨酰胺合成酶抗体染色阳性。培养的Mller细胞有降解透明质酸的功能,(4组)表现为蓝色背景(透明质酸染色)下的淡白色双条带(透明质酸降解后脱色);将细胞和透明质酸预培养可使脱色条带明显增厚,表现为明亮的白色条块(1组),同时加入透明质酸和integrinα2β1抗体产生相似的白色条块(2组),同时加入透明质酸和CD44抗体使脱色恢复为淡白色双条带(3组)。结论培养的Mller细胞有降解透明质酸的功能,细胞与透明质酸的相互作用明显加强细胞降解透明质酸的功能,CD44抗体可能减弱这种加强作用,integrinα2β1抗体无明显作用。 展开更多
关键词 MÜLLER细胞 透明质酸酶 底物胶
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Maspin基因在乳腺癌骨髓和外周血微小转移检测中的应用价值
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作者 刘晓 郭榆江 +3 位作者 唐建英 张滨 谢平 黄燮民 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期488-491,共4页
目的:研究Maspin基因在乳腺癌患者骨髓和外周血微小转移检测中的应用价值以及骨髓和外周血Maspin mRNA表达与乳腺癌临床病理因素之间的相关性。方法:采用巢式逆转录-聚合酶链反应检测10例良性乳腺疾病患者和41例乳腺癌患者骨髓及外周血... 目的:研究Maspin基因在乳腺癌患者骨髓和外周血微小转移检测中的应用价值以及骨髓和外周血Maspin mRNA表达与乳腺癌临床病理因素之间的相关性。方法:采用巢式逆转录-聚合酶链反应检测10例良性乳腺疾病患者和41例乳腺癌患者骨髓及外周血中Maspin mRNA的表达。结果:在10例对照组骨髓和外周血中均未检测出Maspin mRNA,而在乳腺癌患者骨髓和外周血中分别有15例(36.6%)和16例(39%)检测到Maspin mRNA。骨髓和外周血中Maspin mRNA检测结果的符合率为87.8%,检测结果有相关性(χ2=22.563,P=0.000,R=0.742)。乳腺癌患者骨髓和外周血中Maspin mRNA表达率随病理分期升高、淋巴结转移、临床分期进展而升高,但均无显著性差异。如将患者按复发风险分组,高危组患者骨髓和外周血中Maspin mRNA表达率明显升高,但仅在骨髓中显示有显著性差异(χ2=6.621,P=0.037),而在外周血中无显著性差异(χ2=5.904,P=0.052)。结论:Maspin基因用于乳腺癌患者骨髓和外周血微小转移的检测具有很高的特异性,乳腺癌患者骨髓和外周血中Maspin mRNA表达可能与高危复发风险相关。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 MASPIN基因 骨髓 外周血 微小转移 逆转录-聚合酶链反应
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乳腺癌组织中microRNA-145表达情况及预后价值
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作者 刘晓 秦安 +2 位作者 储春强 张广林 穆会君 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期239-241,246,共4页
目的:探讨microRNA-145(miR-145)在乳腺癌组织中表达的预后价值。方法:采用定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测60例乳腺癌患者癌组织和邻近正常组织中miR-145、胰岛... 目的:探讨microRNA-145(miR-145)在乳腺癌组织中表达的预后价值。方法:采用定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测60例乳腺癌患者癌组织和邻近正常组织中miR-145、胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF1R)m RNA、胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)mRNA水平。采用Spearman等级相关分析法检验miR-145与患者临床病理特征之间相关性,采用Kaplan-Meier曲线法分析乳腺癌患者无病生存期(disease-free survival,DFS),并用Log-rank法和Cox回归分析法进行检验。结果:乳腺癌组织中miR-145水平为4.15±1.37,低于邻近正常组织(5.66±1.59,P<0.001)。乳腺癌组织中miR-145水平与患者临床病理特征之间无相关性(P>0.05)。乳腺癌组织中miR-145水平与IGF1R m RNA(r=-0.455,P=0.003)、IRS-1 mRNA(r=-0.357,P=0.005)水平呈负相关。Kaplan-Meier曲线显示miR-145低表达组患者DFS低于高表达组患者(P=0.011)。单变量、多变量Cox回归分析显示肿瘤大小(P=0.015)、肿瘤分期(P=0.001)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)(P=0.050)、miR-145(P=0.001)是独立预后因素。结论:乳腺癌组织中miR-145水平下调,且是乳腺癌独立的正性预后因子。 展开更多
关键词 乳腺癌 MICRORNA 145 预后因子
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GRβ shRNA稳定表达胶质瘤细胞株的构建及功能初探
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作者 王倩 邹健 谢平 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期883-888,共6页
目的:构建并鉴定糖皮质激素受体β(GRβ)RNA干扰稳定表达胶质瘤细胞株,研究GRβ对胶质瘤细胞周期及增殖的影响。方法:根据GRβmRNA序列设计特异性小干扰RNA(siRNA),以LipofectamineTM 2000转染人胶质瘤细胞,RT-PCR及Western blot鉴定其... 目的:构建并鉴定糖皮质激素受体β(GRβ)RNA干扰稳定表达胶质瘤细胞株,研究GRβ对胶质瘤细胞周期及增殖的影响。方法:根据GRβmRNA序列设计特异性小干扰RNA(siRNA),以LipofectamineTM 2000转染人胶质瘤细胞,RT-PCR及Western blot鉴定其有效性;体外合成该siRNA插入序列小发卡RNA(shRNA)并定向克隆至真核表达载体pGPH1/GFP/Neo,转染后,通过G418筛选稳定表达细胞株(G0306),Western blot检测GRβ表达、MTS和流式细胞术检测GRβ干扰对胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。结果:GRβsiRNA能有效抑制GRβ的表达,DNA测序证实合成并克隆入真核表达载体pGPH1/GFP/Neo的shRNA序列完全正确;GRβshRNA稳定表达人胶质瘤细胞株阻滞于G1期、细胞增殖能力显著下降。结论:成功构建人GRβshRNA稳定表达胶质瘤细胞株(G0306),初步表明GRβ影响胶质瘤细胞的增殖,为后期研究GRβ在中枢神经系统肿瘤中的作用及机制奠定了基础。 展开更多
关键词 糖皮质激素受体Β 小干扰RNA 稳定表达 增殖 胶质瘤
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Vinculin和α-平滑肌肌动蛋白在视网膜前膜细胞及其迁出传代细胞中的表达
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作者 陆融 乔伟振 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第12期1130-1132,共3页
目的分析vinculin和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在视网膜前膜细胞及其迁出传代细胞中的表达。方法手术中取得视网膜前膜共17例,选取倒置相差显微镜下易于展开和辨别细胞形态的组织5例,清洗展开固定后,以单克隆抗v... 目的分析vinculin和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在视网膜前膜细胞及其迁出传代细胞中的表达。方法手术中取得视网膜前膜共17例,选取倒置相差显微镜下易于展开和辨别细胞形态的组织5例,清洗展开固定后,以单克隆抗vin-于明胶涂层的盖玻片上培养,将迁出的细胞培养传代,免疫荧光染色后在荧光显微镜下观察。结果术中取得的视网膜前膜细胞抗vinculin和α-SMA抗体染色阳性。12例视网膜前膜组织中,7例培养24h后细胞从组织迁移至明胶涂层的盖玻片上并增殖,其中4例可培养至第2代,4例中2例可培养至第3代,这些细胞抗vinculin和抗α-SMA抗体染色均呈阳性。结论术中剥离的视网膜前膜细胞及其迁出传代细胞均表达vinculin和α-SMA,提示这些细胞具有较强且较恒定的收缩能力。 展开更多
关键词 VINCULIN Α-平滑肌肌动蛋白 视网膜前膜
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大鼠谷氨酰胺合成酶RNA干扰表达载体的构建及其影响星形胶质细胞黏附的初探 被引量:1
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作者 刘春兴 张滨 邹健 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1397-1401,共5页
目的:构建并鉴定大鼠谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)RNA干扰表达载体,并检测GS对星形胶质细胞黏附的影响。方法:利用软件根据GS mRNA序列设计特异性siRNA序列,与GS真核表达载体GS-EGFP以LipofectamineTM2000试剂联合转染Hela-... 目的:构建并鉴定大鼠谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)RNA干扰表达载体,并检测GS对星形胶质细胞黏附的影响。方法:利用软件根据GS mRNA序列设计特异性siRNA序列,与GS真核表达载体GS-EGFP以LipofectamineTM2000试剂联合转染Hela-G细胞,以GFP为指标鉴定其有效性;体外合成该siRNA插入序列,将其定向克隆至真核表达载体pRNATH1.l/Neo中并转染至大鼠星形胶质细胞中,以免疫细胞化学方法鉴定GS的表达;通过免疫化学法对actin特异性染色分析GSRNA干扰后对星形胶质细胞黏附的影响。结果:GS siRNA能有效抑制GS-EGFP在Hela-G细胞中的表达;DNA测序证实合成并被克隆入真核表达载体pRNAT HI.1/Neo的siRNA插入序列完全正确,GS siRNA表达载体可特异性抑制星形胶质细胞中GS的表达;GS RNA干扰导致细胞黏附力显著降低。结论:成功构建大鼠GS siRNA真核表达载体,初步表明GS影响星形胶质细胞的黏附,为后期研究GS在中枢神经系统损伤后反应性星形胶质细胞中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 反应性星形胶质细胞 谷氨酰胺合成酶 真核表达载体 RNA干扰 细胞黏附 SIRNA表达载体 大鼠 免疫细胞化学方法
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糖尿病与肝外胆管癌发病关系的Meta分析 被引量:3
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作者 刘春兴 邹健 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期834-837,共4页
目的:用Meta分析法探讨糖尿病是否增加肝外胆管癌发病风险。方法:利用中国学术期刊全文数据库、万方全文数据库及Medline,EMBASE数据库检索国内外公开发表的从建库至2010年9月的所有关于糖尿病与肝外胆管癌发病关系的中英文文献;利用随... 目的:用Meta分析法探讨糖尿病是否增加肝外胆管癌发病风险。方法:利用中国学术期刊全文数据库、万方全文数据库及Medline,EMBASE数据库检索国内外公开发表的从建库至2010年9月的所有关于糖尿病与肝外胆管癌发病关系的中英文文献;利用随机效应模型计算纳入文献的合并RR值及其95%CI值;进行亚组分析以探究异质性来源并分析出版偏倚。结果:纳入分析的文献共7篇(病例对照研究4篇,队列研究3篇)。经Meta分析,与未患糖尿病者相比,糖尿病患者肝外胆管癌发病的风险增加,相对风险值分别为OR=1.62(95%C1=1.05~2.49)(病例对照研究);RR=1.54(95%C1=1.06~2.23)(队列研究);亚组资料分析显示研究有显著异质性,但无明显发表偏倚(Egger检验,P=0.798;Begg检验,P=0.548)。结论:本研究提示糖尿病可能是肝外胆管癌的致病危险因素。 展开更多
关键词 糖尿病 肝外胆管癌 病例对照研究 队列研究 META分析
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甲状腺细针穿刺细胞学检查联合BRAF^(V600E)基因检测在TI-RADS 5微小结节术前诊断中的应用 被引量:11
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作者 周锋盛 张雨 +5 位作者 丁炎 朱晓巍 秦安 邹健 常艳华 吴鹏西 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1227-1231,共5页
目的:评估甲状腺结节细针穿刺(fine-needle aspiration,FNA)细胞学检查联合BRAF^(V600E)基因检测对直径≤5 mm、美国放射学会甲状腺超声影像数据报告系统(TI-RADS)评分为5的甲状腺微小结节良恶性的术前诊断价值及意义。方法:回顾性分析7... 目的:评估甲状腺结节细针穿刺(fine-needle aspiration,FNA)细胞学检查联合BRAF^(V600E)基因检测对直径≤5 mm、美国放射学会甲状腺超声影像数据报告系统(TI-RADS)评分为5的甲状腺微小结节良恶性的术前诊断价值及意义。方法:回顾性分析75例患者的96枚直径≤5 mm、TI-RADS 5的甲状腺微小结节术前FNA细胞学检查和BRAF^(V600E)基因检测结果,以手术病理为金标准,分析FNA细胞学检查、BRAF^(V600E)基因突变检测以及两者联合对甲状腺微小结节良恶性的诊断价值。结果:FNA细胞学检查联合BRAF^(V600E)基因突变检测的敏感性、准确性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为95.0%、93.8%、91.7%、95.0%、91.7%,受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积为0.933。联合检测的敏感性、准确性和ROC曲线下面积均高于单一的FNA细胞学检查及BRAF^(V600E)基因突变检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FNA细胞学检查联合BRAF^(V600E)基因突变检测可以提高直径≤5 mm且评分为TI-RADS 5的甲状腺微小结节的术前诊断效能,减少漏诊的发生。同时对于直径≤5 mm的特殊位置以及多灶性的甲状腺微小结节,可以在提高穿刺准确性的基础上,帮助患者确定最佳的手术方案。 展开更多
关键词 甲状腺结节细针穿刺活检 BRAFV600E基因 TI-RADS 甲状腺癌
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