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miR-19b转基因小鼠的构建及表型分析 被引量:2
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作者 胡晓山 余章斌 +3 位作者 李萌萌 朱金改 朱春 韩树萍 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期579-585,共7页
目的:构建心肌细胞特异性过表达miR-19b的转基因小鼠,并对其进行表型分析。方法:先确定载体插入的酶切位点,根据CloneEZRPCR Cloning Kit重组原理设计相应引物,以小鼠基因组为模板克隆出带有miR-19b前体序列(pre-miR-19b)的目的片段,... 目的:构建心肌细胞特异性过表达miR-19b的转基因小鼠,并对其进行表型分析。方法:先确定载体插入的酶切位点,根据CloneEZRPCR Cloning Kit重组原理设计相应引物,以小鼠基因组为模板克隆出带有miR-19b前体序列(pre-miR-19b)的目的片段,利用重组酶连接到带有alpha-MHC启动子的载体上。将所得载体线性化后,采用显微注射方法注射到小鼠胚胎干细胞内。再将所得的重组胚胎干细胞移植入假孕的C57BL/6J雌鼠子宫内,在所得的子代,即Founder小鼠中采用特异的引物鉴定出转基因小鼠,并选出相应的品系,进行表型分析。结果:成功构建miR-19b转基因小鼠,且miR-19b转基因小鼠舒张期室间隔厚度、舒张期左室游离壁厚度以及射血分数均有升高。结论:心肌特异性过表达miR-19b可以导致心脏肥大。 展开更多
关键词 转基因小鼠 心脏肥大 miR-19b 心血管疾病
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多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响 被引量:2
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作者 王瑛 朱春 +5 位作者 余章斌 王薛洁 潘亚 彭宇竹 郭锡熔 韩树萍 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期638-641,共4页
目的探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响。方法在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5μmol/L,同时设立阴性对照组。显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第... 目的探讨多氯联苯对P19细胞向心肌分化进程的影响。方法在P19细胞向心肌细胞分化的培养液中加入多氯联苯(Aroclor 1254)2.5μmol/L,同时设立阴性对照组。显微镜下连续观察P19细胞形态的变化,并采用实时荧光定量RT-PCR技术对分化过程的第0、4、10天中GATA4及Nkx2.5基因mRNA的表达水平进行检测。结果在分化全程(0~10天),实验组与对照组无细胞形态上的差别;而GATA4、Nkx2.5基因的表达量除在分化开始前(第0天)差异无统计学意义外,在分化中期(第4天)及末期(第10天),实验组中GATA4、Nkx2.5基因的相对表达量均显著低于对照组。结论多氯联苯可通过对早期心脏发育相关重要基因的表达影响心肌分化进程。 展开更多
关键词 多氯联苯 P19细胞 GATA4基因 NKX2.5基因 心肌分化
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脑源性促红细胞生成素在新生鼠脑缺氧缺血后海马的表达变化 被引量:2
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作者 卢俊杰 蒋犁 +2 位作者 朱欢 韩树萍 余章斌 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期576-579,596,共5页
目的探讨新生鼠脑缺氧缺血后海马CA1区脑源性促红细胞生成素(EPO)的表达,揭示脑缺氧缺血后内源性因素启动海马神经发生的可能机制。方法7日龄SD新生大鼠结扎左侧颈总动脉并暴露在低氧环境造成新生大鼠缺氧缺血性脑损伤。选用192只大鼠,9... 目的探讨新生鼠脑缺氧缺血后海马CA1区脑源性促红细胞生成素(EPO)的表达,揭示脑缺氧缺血后内源性因素启动海马神经发生的可能机制。方法7日龄SD新生大鼠结扎左侧颈总动脉并暴露在低氧环境造成新生大鼠缺氧缺血性脑损伤。选用192只大鼠,96只做免疫组织化学染色,96只做免疫印迹Western blot分析。分别随机分为3组,即正常对照组、单纯缺氧组、缺氧缺血组,每组又分为1h、6h、16h、1d、3d和7d共6个时间点。应用免疫组织化学法和免疫印迹观察海马CA1区脑源性EPO的表达变化。结果单纯缺氧、缺氧缺血EPO的表达与正常对照组比较,差异均有统计学意义;正常对照组各时间点EPO的表达差异无统计学意义,单纯缺氧、缺氧缺血后16h,脑源性EPO表达达到较高水平,与其余时间点比较差异有统计学意义,以后随时间延长逐渐下调。结论脑源性EPO表达在新生鼠脑缺氧缺血后早期即增加,推测低氧、EPO早期高表达可能是参与海马神经发生的内源性因素之一。 展开更多
关键词 促红细胞生成素 神经发生 新生鼠 免疫组织化学 免疫印迹
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shRNA沉默芳香烃受体表达对心肌细胞分化过程中WNT信号通路的影响
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作者 范志刚 朱春 +5 位作者 余章斌 胡晓山 李萌萌 朱金改 朱莎莎 韩树萍 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期666-669,共4页
目的观察芳香烃受体(AHR)基因沉默后对P19细胞向心肌分化进程中WNT信号通路的影响。方法根据小鼠AHR基因序列设计并构建AHR基因的shRNA真核表达载体,将AHR干扰质粒转染至P19细胞,通过G418筛选出稳定的AHR基因沉默表达的阳性细胞株,应用... 目的观察芳香烃受体(AHR)基因沉默后对P19细胞向心肌分化进程中WNT信号通路的影响。方法根据小鼠AHR基因序列设计并构建AHR基因的shRNA真核表达载体,将AHR干扰质粒转染至P19细胞,通过G418筛选出稳定的AHR基因沉默表达的阳性细胞株,应用实时荧光定量RT-PCR技术检测P19细胞分化过程中WNT信号通路中关键基因GSK3β、β-catenin mRNA的表达水平。结果构建的AHR-shRNA表达质粒能显著抑制AHR基因的表达;随着P19细胞向心肌细胞分化,实验组β-catenin基因的相对表达量低于对照组,而GSK3β基因的相对表达量则高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论干扰AHR基因表达对心脏发育过程中WNT信号通路产生调节作用。 展开更多
关键词 芳香烃受体 心肌细胞分化 WNT信号通路 小鼠
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