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多重PCR结合毛细管电泳检测儿童呼吸道病原体方法的建立及应用 被引量：3
1
作者 马菁菁 陶桂香 陈倩 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期133-136,共4页
目的:建立肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.au)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.Ae)、阴沟杆菌(Enterobacter cloacae,Ecl)、白色假... 目的:建立肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.au)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.Ae)、阴沟杆菌(Enterobacter cloacae,Ecl)、白色假丝酵母菌(Candida albicans,Cal)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,Aba)7种儿童呼吸道病原体多重PCR结合毛细管电泳法检测体系。方法:随机收集南京市儿童医院2020年11—12月266例儿童呼吸道病原体样本,针对MP、S.au、KP、P.Ae、Ecl、Cal、Aba保守序列设计特异性引物,设计并优化多重PCR结合毛细管电泳检测体系;将该检测结果与细菌培养以及荧光定量PCR比对,评估该方法的检测性能(灵敏度、特异度)。结果:所设计引物可以特异性扩增出呼吸道病原体;多重PCR结合毛细管电泳检测体系检出敏感性高;与其他呼吸道感染病原体未出现交叉反应,无明显的非特异峰,特异性较好。结论:成功建立一种能够快速筛查7种常见儿童呼吸道病原体的多重PCR结合毛细管电泳的检测方法。 展开更多
关键词 儿童 呼吸道病原体 多重PCR 毛细管电泳
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Caspase依赖的氧化应激对脓毒症肾小管上皮细胞损伤的作用及机制 被引量：7
2
作者 孙林春 刘建璟 张利 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期23-29,70,共8页
目的:观察不同活性氧(reactive oxygen species,ROS)及氧化应激水平对脓毒症肾小管上皮细胞增殖、凋亡、周期等生物学效应的影响,探索氧化应激水平和线粒体-Caspase途径能否作为脓毒症肾小管上皮损伤的治疗靶点。方法:用终浓度为10μg/m... 目的:观察不同活性氧(reactive oxygen species,ROS)及氧化应激水平对脓毒症肾小管上皮细胞增殖、凋亡、周期等生物学效应的影响,探索氧化应激水平和线粒体-Caspase途径能否作为脓毒症肾小管上皮损伤的治疗靶点。方法:用终浓度为10μg/mL的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理人肾小管上皮HK-2细胞12 h建立脓毒症细胞模型,将细胞模型随机分为H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2),300μmol/L)、Caspase抑制剂组(Ac-DEVD-CHO,15μmol/L)、Caspase抑制剂+H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2),300μmol/L+Ac-DEVDCHO,15μmol/L)和阴性对照组(不处理);另以正常培养的HK-2细胞为空白对照组。Western blot检测Cleaved-Caspase 3和Cleaved-多聚ADP核糖多聚酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)蛋白表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞ROS水平、细胞凋亡和细胞周期。结果:阴性对照组细胞ROS水平、凋亡率、凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase 3和Cleaved-PARP水平以及G1期细胞比例均较空白对照组升高(P均<0.05),增殖率较空白对照组降低(P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved-Caspase 3和Cleaved-PARP水平以及G1期细胞比例均较阴性对照组升高(P均<0.05),而增殖率较阴性对照组降低(P<0.05)。Caspase抑制剂+H_(2)O_(2)组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved-Caspase 3和Cleaved-PARP水平以及G1期细胞比例均较H_(2)O_(2)组降低(P均<0.05),但均高于阴性对照组(P均<0.05));增殖率较H_(2)O_(2)组升高(P<0.05),但仍低于阴性对照组(P<0.05)。结论:脓毒症细胞模型中存在异常升高的氧化应激反应。ROS能通过线粒体-Caspase凋亡途径抑制脓毒症肾小管上皮细胞增殖,促进细胞凋亡和引起细胞周期G1期阻滞。抑制Caspase对ROS引起的脓毒症肾小管上皮细胞损伤有一定保护作用。 展开更多
关键词 脓毒症 肾损伤 氧化应激 线粒体 凋亡
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Caspase-3抑制剂所致氧化应激状态下肾小管上皮细胞差异表达基因的筛选及功能验证
3
作者 骆长亮 张秋红 孙林春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第1期17-26,共10页
目的:研究caspase-3抑制剂引起的氧化应激状态下肾小管上皮细胞基因表达特点,筛选潜在的候选基因,为揭示caspase-3调控活性氧(reactive oxygen species,ROS)损伤肾小管上皮细胞的机制奠定基础。方法:将人肾小管上皮细胞HK-2用H2O2(300μ... 目的:研究caspase-3抑制剂引起的氧化应激状态下肾小管上皮细胞基因表达特点,筛选潜在的候选基因,为揭示caspase-3调控活性氧(reactive oxygen species,ROS)损伤肾小管上皮细胞的机制奠定基础。方法:将人肾小管上皮细胞HK-2用H2O2(300μmol/L)处理6 h后,随机分为对照组和caspase-3抑制剂组(Ac-DEVD-CHO,15μmol/L),运用Illumina Hiseq 2500测序平台完成基因测序,筛选差异基因并进行相关富集分析,用定量PCR对筛选到的前10位差异表达基因(differentially expressed gene,DEG)进行验证。将H2O2(300μmol/L)处理6 h后的HK-2细胞随机分为对照组、caspase-3抑制剂组(Ac-DEVDCHO,15μmol/L)、CTNNB1组[pcDNA3.1(+)-CTNNB1]、caspase-3抑制剂+CTNNB1组[Ac-DEVD-CHO,15μmol/L+pcDNA3.1(+)-CTNNB1]以及caspase-3抑制剂+CTNNB1 NC组[Ac-DEVD-CHO,15μmol/L+pcDNA3.1(+)-CTNNB1 NC],MTT法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡和ROS水平,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达。结果:芯片共筛选出185个DEG,经定量PCR验证,显著性差异排名前10的基因中FIS1、EZR、COL7A1、RPL5、MAP4、CEBPB和CTNNB1 mRNA在caspase-3抑制剂组细胞中低表达(P均<0.05),SNRPB mRNA高表达(P<0.05)。Caspase-3抑制剂组增殖率高于对照组(P<0.05),CTNNB1组增殖率低于对照组(P<0.05),caspase-3抑制剂+CTNNB1组增殖率低于caspase-3抑制剂组(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。Caspase-3抑制剂组细胞凋亡率、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白水平低于对照组(P均<0.05),CTNNB1组细胞凋亡率、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白水平高于对照组(P均<0.05),caspase-3抑制剂+CTNNB1组细胞凋亡率、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白水平均较caspase-3抑制剂组高(P<0.05),但仍低于对照组(P<0.05)。caspase-3抑制剂组ROS较对照组降低(P<0.05),CTNNB1组ROS较对照组升高(P<0.05),caspase-3抑制剂+CTNNB1组ROS较caspase-3抑制剂组高(P<0.05),但仍低于对照组(P<0.05)。结论:Caspase-3抑制剂引起的肾小管上皮基因异常表达与氧化应激状态下的肾损伤有关;氧化应激对肾小管上皮细胞的损伤具有caspase-3依赖性,抑制caspase-3对肾损伤有保护作用,CTNNB1参与了这一过程。 展开更多
关键词 肾损伤 氧化应激 线粒体 生物信息学 Β-连环蛋白
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