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口腔鳞状细胞癌组织中差异微小RNA/mRNA表达谱的对接研究 被引量:14
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作者 刘思玉 谢龙 +3 位作者 祁兵 马长艳 桑磊 李宏卫 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期400-403,共4页
目的构建分析口腔鳞状细胞癌(OSCC)中差异表达的微小RNA(miRNA)和mRNA表达谱,初步预测与OSCC发生和发展相关的miRNA和mRNA。方法运用高通量深度测序技术构建miRNA和mRNA表达谱,通过Gene Ontology功能显著性富集分析预测与OSCC细胞周期... 目的构建分析口腔鳞状细胞癌(OSCC)中差异表达的微小RNA(miRNA)和mRNA表达谱,初步预测与OSCC发生和发展相关的miRNA和mRNA。方法运用高通量深度测序技术构建miRNA和mRNA表达谱,通过Gene Ontology功能显著性富集分析预测与OSCC细胞周期、增殖、分化和凋亡相关的miRNA和mRNA。结果共发现77个miRNA和1 298个mRNA显著性差异表达,富集分析显示与OSCC细胞周期、增殖、分化和凋亡相关的miRNA共73个,且一个miRNA可调控多个mRNA。结论 OSCC中差异表达的miRNA和mRNA对OSCC的发生和发展有潜在的作用。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 微小RNA MRNA 高通量测序
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氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体基因突变的分析 被引量:1
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作者 魏钦俊 曹新 +2 位作者 邢光前 卜行宽 王登元 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期626-629,共4页
目的:探讨线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)突变与非综合征性遗传性耳聋的关系,并且建立相应的基因诊断方法。方法:调查并收集2个非综合征性耳聋家系、6个散发病例及25例正常个体的外周静脉血样本,从白细胞中提取DNA,聚合酶链反应扩增... 目的:探讨线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)突变与非综合征性遗传性耳聋的关系,并且建立相应的基因诊断方法。方法:调查并收集2个非综合征性耳聋家系、6个散发病例及25例正常个体的外周静脉血样本,从白细胞中提取DNA,聚合酶链反应扩增mtDNA目的片段,分别用BsmAⅠ、ApaⅠ及XbaⅠ限制性内切酶检测1555G、3243G、7445G和del961Cn点突变,对相关的扩增片段进行基因测序。结果:酶切检测,两家系中全部12例的耳聋患者均为1555G点突变阳性。家系中的其他成员、6例散发病例及25例正常人均为阴性,调查的所有个体(包括患者)3243G、7445G和del961Cn点突变均为阴性。mtDNA测序:酶切显示,1555G突变阳性病例均发现(nt)1555A→G转换,3243G、7445G及del961Cn点突变阴性。结论:1555G点突变呈母系遗传;1555G点突变在母系遗传非综合征型耳聋家系中有较高的发生率,在散发型病例中发生率较低;提示1555G点突变是该类耳聋分子诊断的有用指标。 展开更多
关键词 线粒体 基因突变 耳聋 抗生素
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乳腺癌MCF-7细胞Alu甲基化水平的MSRE-qPCR法检测 被引量:1
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作者 徐酩 吕京澴 孙玉洁 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期951-956,共6页
目的:寻找简单、可靠、经济并适合大批量检测肿瘤组织标本和肿瘤细胞系中Alu甲基化水平的实验方法。方法:用对甲基化敏感的限制性内切酶联合定量PCR(methylation-sensitive restriction endonuclease digestion and quantitative PCR,MS... 目的:寻找简单、可靠、经济并适合大批量检测肿瘤组织标本和肿瘤细胞系中Alu甲基化水平的实验方法。方法:用对甲基化敏感的限制性内切酶联合定量PCR(methylation-sensitive restriction endonuclease digestion and quantitative PCR,MSRE-qPCR)法检测乳腺癌细胞系MCF-7中Alu序列的甲基化水平,并与常用的亚硫酸氢盐修饰结合测序法(bisulfite-sequencing PCR,BSP)进行比较。结果:MSRE-qPCR显示Alu甲基化水平在BstUⅠ酶切位点约为33.7%,在HpaⅡ酶切位点约为56.1%,与BSP法比较,两种方法都显示BstUⅠ位点甲基化水平较低,而HpaⅡ位点甲基化水平较高,趋势一致,并提示MCF-7细胞的Alu甲基化水平明显低于正常细胞(84.6%或者更高)。结论:MSRE-qPCR法简单、可靠、经济,适合用于大批量检测Alu甲基化水平。 展开更多
关键词 MCF-7 Alu甲基化 MSRE-qPCR
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微丝骨架动态参与花粉萌发的研究 被引量:4
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作者 徐霞 任海云 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2005年第3期7-11,共5页
利用改进的Alexphalloidin活细胞染色方法和激光共聚焦显微镜技术,观察川百合(LiliumdavidiiDuch)花粉原生质体极性形成及萌发过程中微丝骨架的列阵变化。结果表明,花粉原生质体从贮存状态,经过水合、极性形成至萌发花粉管,其微丝结构... 利用改进的Alexphalloidin活细胞染色方法和激光共聚焦显微镜技术,观察川百合(LiliumdavidiiDuch)花粉原生质体极性形成及萌发过程中微丝骨架的列阵变化。结果表明,花粉原生质体从贮存状态,经过水合、极性形成至萌发花粉管,其微丝结构从短小的梭形体,经过形成均匀的网状结构、向细胞边缘汇集的平行排列的束状结构,逐渐变成多层连续环绕细胞的微丝束结构。用酪氨酸磷酸酶抑制剂苯胂化氧(PAO)处理花粉原生质体,在微丝的汇合处,肌动蛋白聚集成小的团块,花粉的萌发受到抑制;而利用酪氨酸磷酸激酶抑制剂genistein处理细胞,微丝结构的列阵变化与对照相似。结果说明,在川百合花粉萌发过程中,有某种酪氨酸磷酸酶参与了反应。 展开更多
关键词 微丝骨架 花粉原生质体 PAO 酪氨酸磷酸化
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血管生成素与绿色荧光蛋白融合蛋白的表达及纯化
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作者 李凌云 许正平 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期437-442,共6页
目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能。方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS鄄ANG鄄EGFP。该质粒转化大肠杆... 目的:表达并纯化血管生成素(ANG)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白,以进一步探讨血管生成素的生物学功能。方法:PCR扩增人ANG基因,将其与EGFP基因融合后克隆到高表达载体pMFHT,构建了原核表达质粒pHIS鄄ANG鄄EGFP。该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用金属螯合亲和层析纯化目的蛋白。激光共聚焦显微镜和Westernblot鉴定融合蛋白的表达情况。结果:重组蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并从破菌上清中一步纯化目的蛋白,纯度可达95%以上。Westernblot分析表明表达产物具有良好的抗原性和特异性。诱导表达的菌体在激光共聚焦显微镜下可发射明亮的绿色荧光。结论:成功的表达并纯化了ANG鄄EGFP融合蛋白,利用EGFP的荧光示踪作用,该融合蛋白可用于血管生成素核转位和胞内共定位蛋白质研究。 展开更多
关键词 血管生成素 增强型绿色荧光蛋白 免疫印迹分析 金属螯合亲和层析 融合表达
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Lims E:一个新的LIM同源域基因的克隆和初步分析 被引量:1
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作者 程立波 陈洁 +2 位作者 赵沐子 刘庆淮 李建民 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期550-554,共5页
目的:克隆与分析小鼠不同剪切的Lims基因。方法:应用巢式RT-PCR,以小鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTM Xa-1T质粒,测序鉴定。结果:测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims E,该变异剪切体编码区为1164bp,编码387... 目的:克隆与分析小鼠不同剪切的Lims基因。方法:应用巢式RT-PCR,以小鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTM Xa-1T质粒,测序鉴定。结果:测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims E,该变异剪切体编码区为1164bp,编码387个氨基酸。结论:比较基因组学分析显示,成功地克隆了一新的小鼠Lims基因剪切子Lims E,为进一步研究Lims基因在细胞发育中的功能打下了基础。 展开更多
关键词 Lims基因 基因表达 基因剪切
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