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人源抗H7N9血凝素中和抗体IgG的制备及鉴定 被引量：4
1
作者 陈雅 熊四平 +8 位作者 唐奇 王怡雯 耿以如 顾慧 徐亚如 周荧 仇镇宁 冯振卿 朱进 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期874-879,892,共7页
目的 :将从全人源Fab噬菌体抗体库筛选获得的抗H7N9血凝素Fab抗体基因进行基因工程改造,以表达全分子抗H7N9血凝素中和抗体Ig G,并验证其对H7N9型禽流感病毒的中和活性。方法:用H7N9型禽流感病毒血凝素筛选全人源Fab噬菌体抗体库,构建... 目的 :将从全人源Fab噬菌体抗体库筛选获得的抗H7N9血凝素Fab抗体基因进行基因工程改造,以表达全分子抗H7N9血凝素中和抗体Ig G,并验证其对H7N9型禽流感病毒的中和活性。方法:用H7N9型禽流感病毒血凝素筛选全人源Fab噬菌体抗体库,构建全分子Ig G抗体重、轻链表达载体,共转染293 Free Style(293F)细胞,表达并纯化Ig G抗体。应用ELISA及Western blot实验检测抗体免疫学活性,微量中和实验及鸡胚预防保护实验检测其中和活性,血凝抑制试验判断其结合血凝素亚基。结果:成功筛选出1株全人源抗H7N9血凝素Fab抗体基因并构建Ig G真核表达载体。获得的全分子Ig G抗体重、轻链序列正确,并可特异性结合H7N9血凝素。微量中和实验证明其对H7N9型禽流感病毒有良好中和活性,中和滴度为15.6μg/m L。鸡胚预防保护实验显示抗体用量为200μg时可达100%保护率。血凝抑制试验表明其结合血凝素HA2亚基。结论:制备的重组全人源全分子抗H7N9血凝素Ig G抗体可特异性识别H7N9型禽流感病毒血凝素,对H7N9型禽流病毒有显著的中和作用,为进一步研发用于禽流感防治的抗体药物奠定基础。 展开更多
关键词 H7N9 全分子抗体 血凝素 中和抗体
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婴儿听脑干反应与胎儿期铅暴露状况初探 被引量：4
2
作者 周鸣 鲍红琴 +1 位作者 秦锐 梁沂 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期511-512,共2页
目的 :观察孕期低水平铅暴露对婴儿期听力发育的影响。方法 :测定 5 4例 6月龄婴儿的听脑干反应 ( ABR) ,并与母产时血铅、脐血铅及婴儿血铅进行相关分析。结果 :6月龄婴儿 ABR的 、 、 波潜伏期左、右耳差异显著 ,右耳明显短于左耳 ;... 目的 :观察孕期低水平铅暴露对婴儿期听力发育的影响。方法 :测定 5 4例 6月龄婴儿的听脑干反应 ( ABR) ,并与母产时血铅、脐血铅及婴儿血铅进行相关分析。结果 :6月龄婴儿 ABR的 、 、 波潜伏期左、右耳差异显著 ,右耳明显短于左耳 ;脐血铅水平与右耳的 、 、 波潜伏期明显相关 ,相关系数分别为 0 .62 4、0 .5 92、0 .60 2 ,P值均小于 0 .0 5。结论 :胎儿期低水平的铅暴露也可能对婴儿期的听觉神经发育产生不良影响 ; 展开更多
关键词 听脑干反应 铅中毒 婴儿 胎儿期
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功能性鼻内镜鼻窦手术联合鼻中隔矫正术治疗鼻息肉的临床效果分析 被引量：2
3
作者 陈剑 张勇 《中国医学前沿杂志（电子版）》 2014年第11期64-66,共3页
目的分析功能性鼻内镜鼻窦手术及鼻中隔矫正术治疗鼻息肉的临床疗效。方法选取本院2012年1月至2013年12月收治的慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者100例为研究对象,随机分为试验组和对照组,每组各50例。试验组患者予以功能性鼻内镜鼻窦手术+鼻中... 目的分析功能性鼻内镜鼻窦手术及鼻中隔矫正术治疗鼻息肉的临床疗效。方法选取本院2012年1月至2013年12月收治的慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者100例为研究对象,随机分为试验组和对照组,每组各50例。试验组患者予以功能性鼻内镜鼻窦手术+鼻中隔矫正术,对照组患者予以功能性鼻内镜鼻窦手术。对比两组患者手术一般情况、术后3个月功能评价和临床疗效。结果试验组患者的手术时间和住院时间长于对照组,术中出血量多于对照组,差异极其显著(P<0.01);试验组患者术后3个月的视觉模拟评分(VAS)、鼻腔鼻窦结局测试-20(SNOT-20)和CT Lund-Mackay评分均显著低于对照组,医学结局研究简表36项健康调查(SF-36)评分和中鼻道黏液纤毛清除速率(MTR)均显著高于对照组,差异极其显著(P<0.01);试验组患者的临床治疗总有效率为94%,显著高于对照组(74%),差异显著(P<0.05)。结论功能性鼻内镜鼻窦手术+鼻中隔矫正术治疗鼻息肉可显著改善患者症状,疗效显著,值得临床推广应用。 展开更多
关键词 功能性鼻内镜鼻窦手术 鼻息肉 鼻中隔矫正术
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舌骨综合征的回顾与分析
4
作者 张勇 郭桂帮 陈剑 《世界中医药》 CAS 2015年第A01期172-172,共1页
29 例舌骨综合征病例,临床表现为舌骨周围区域的不适或疼痛及一侧颈部疼痛并放射至耳部、面部和下颌等处,吞咽时加重.检查要点是伴有上述症状且舌骨大角处有触痛.用醋酸泼尼松龙＋2%利多卡因作触痛点注射,效果颇佳.
关键词 疼痛 舌骨 肌腱 综合征
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全人源抗Trop-2 IgG的制备及对卵巢癌细胞生物特性的影响 被引量：4
5
作者 刘金荣 白璐月 +7 位作者 唐奇 王一荃 叶春萍 殷郑娜 朱进 冯振卿 童华 张慧林 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期280-286,共7页
目的 :构建全人源抗人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)抗体Ig G真核表达系统,表达并纯化该抗体,并检测其对卵巢癌细胞生物特性的影响。方法:构建全人源抗Trop-2抗体Ig G的重组表达载体;在293Free... 目的 :构建全人源抗人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)抗体Ig G真核表达系统,表达并纯化该抗体,并检测其对卵巢癌细胞生物特性的影响。方法:构建全人源抗Trop-2抗体Ig G的重组表达载体;在293Free Style(293F)真核表达体系中表达并纯化该抗体。使用SDS-PAGE、ELISA、亲和力测定、免疫荧光等方法鉴定该抗体并分析其免疫学活性;使用cell counting kit-8(CCK-8)法、划痕实验、Transwell实验和细胞凋亡实验分析其对卵巢癌细胞特性的影响。结果:成功制备出全人源抗Trop-2 Ig G;经多种方法检测,该抗体能与Trop-2蛋白特异性结合;对表达Trop-2的卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡有明显影响。当抗体浓度为400μg/m L时,卵巢癌细胞HO8910的生存率仅为55.95%(P<0.01),划痕愈合率仅为24.71%(对照组为70.80%,P<0.01),侵袭细胞数是对照组的32.11%(P<0.05),细胞凋亡率是对照组的2倍(P<0.05)。结论 :全人源抗Trop-2 Ig G可特异性识别卵巢癌细胞表面的Trop-2蛋白,对卵巢癌细胞的恶性行为具有明显的抑制作用。因此,全人源抗Trop-2 Ig G在卵巢癌的靶向治疗中有潜在应用价值。 展开更多
关键词 Trop-2 全人源IgG 卵巢癌
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Trop2对胃癌细胞耐药性的影响及机制研究 被引量：4
6
作者 蒯兴旺 黄骁辰 +8 位作者 唐奇 赵薇 章明炯 陈渊 贾立周 杨婷婷 仇镇宁 朱进 冯振卿 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期885-891,共7页
目的:探讨滋养层细胞表面抗原2(Trop2)对胃癌细胞化疗耐药的影响及机制。方法:应用慢病毒转染技术将Trop2 sh RNA转染至BGC823细胞株,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染质粒的细胞株;q RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测质粒干扰效率;CC... 目的:探讨滋养层细胞表面抗原2(Trop2)对胃癌细胞化疗耐药的影响及机制。方法:应用慢病毒转染技术将Trop2 sh RNA转染至BGC823细胞株,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染质粒的细胞株;q RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测质粒干扰效率;CCK-8细胞增殖试验和流式细胞术检测柔红霉素对BGC823细胞株增殖能力和细胞凋亡的影响;q RT-PCR、Western blot检测耐药相关基因TopoⅡα的m RNA和蛋白表达变化。结果:在稳定转染Trop2 sh RNA质粒的sh Trop2组中,Trop2 m RNA及蛋白表达水平较对照组(未处理)和sh NC组(转染空载体质粒)明显下调;在相同药物浓度下,柔红霉素对shTrop2组的增殖抑制率明显高于对照组和sh NC组,sh Trop2组半数抑制浓度低于对照组和sh NC组(P<0.05),sh Trop2组中柔红霉素诱导的细胞凋亡率显著高于对照组和sh NC组(P<0.05);稳定干扰Trop2表达后耐药相关基因TopoⅡα的表达显著上调。结论:Trop2通过抑制TopoⅡα的表达,可增强胃癌细胞对柔红霉素的耐药性。 展开更多
关键词 Trop2 胃癌 耐药 柔红霉素 TopoⅡα
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靶向Trop-2 CAR-T细胞的制备及其体外对卵巢癌细胞杀伤作用的研究 被引量：3
7
作者 徐亚如 周荧 +9 位作者 唐奇 刘振云 黄骁辰 杨婷婷 张慧林 赵薇 蒯兴旺 仇镇宁 朱进 冯振卿 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第6期653-658,共6页
目的:制备靶向人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:运用分子克隆及基因... 目的:制备靶向人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:运用分子克隆及基因重组技术构建Trop-2 CAR;采用Western blot检测Trop-2 CAR在293T细胞中的表达;CCK-8法检测Trop-2 CAR-T细胞对卵巢癌细胞增殖的影响;ELISA检测细胞因子分泌的变化。结果:酶切鉴定及测序分析结果表明,Trop-2 CAR各基因片段连接正确;Western blot检测结果显示,该质粒能够在293T细胞中有效表达;CCK-8结果显示,制备的Trop-2 CAR-T细胞在体外能明显抑制表达Trop-2的卵巢癌细胞的增殖(P<0.05);ELISA检测结果表明Trop-2 CAR-T细胞与表达Trop-2的卵巢癌细胞共培养后,干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukin-2,IL-2)细胞因子分泌增加(P<0.01)。结论:该研究成功制备了Trop-2 CAR-T细胞,可有效抑制Trop-2表达阳性的卵巢癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体 Trop-2 卵巢癌
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荧光定量PCR检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率 被引量：2
8
作者 黄骁辰 蒯兴旺 +9 位作者 杨婷婷 唐奇 李涛 季国忠 赵薇 刘振云 陈渊 仇镇宁 冯振卿 朱进 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期903-908,共6页
目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c-Met CAR病毒与c-Met CAR(GFP)病毒,感染T细胞制备c-Met CAR-T细胞与c... 目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c-Met CAR病毒与c-Met CAR(GFP)病毒,感染T细胞制备c-Met CAR-T细胞与c-Met CAR-T(GFP)细胞。Western blot检测c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)在293T细胞中表达的外源性CD3ζ蛋白。设计特异性引物应用荧光定量PCR检测CAR病毒对T细胞的感染效率,并与流式细胞术的检测结果进行比较。结果:构建c-Met CAR(GFP)质粒,荧光显微镜可观察到c-Met CAR(GFP)质粒在293T细胞上表达绿色荧光蛋白。c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)病毒感染的293T细胞可表达外源性CD3ζ蛋白。荧光定量PCR检测c-Met CAR与c-Met CAR(GFP)的感染效率分别为(52.1±1.7)%、(55.9±2.3)%。流式细胞术检测c-Met CAR(GFP)病毒感染效率为(50.7±3.6)%,两种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法能够特异性检测CAR病毒对T细胞的感染效率,该检测方法结果准确、安全,对CAR-T细胞的临床应用具有实用价值。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体 C-MET 荧光定量PCR
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人源特异性抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体的制备及鉴定
9
作者 耿以如 熊四平 +7 位作者 唐奇 张晓 陈雅 徐亚如 周荧 仇镇宁 冯振卿 朱进 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期693-699,共7页
目的 :利用蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)调节亚基(R亚基)的二聚体化功能结构域(DDD)的二聚化功能,制备具有中和活性的人源特异性抗狂犬病毒二价抗体。方法:优化合成linker-C-DDD序列,设计引物扩增抗狂犬病毒抗体Fab094的Fd段和轻链... 目的 :利用蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)调节亚基(R亚基)的二聚体化功能结构域(DDD)的二聚化功能,制备具有中和活性的人源特异性抗狂犬病毒二价抗体。方法:优化合成linker-C-DDD序列,设计引物扩增抗狂犬病毒抗体Fab094的Fd段和轻链可变区序列(Vκ),通过overlap PCR将Fab094的Fd段和linker-C-DDD基因重组为Fd-DDD,将其和Vκ分别克隆到真核表达载体中,共转染293Free style细胞,表达纯化该抗体。应用SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫共沉淀、亲和力测定及免疫荧光试验检测该抗体的免疫学特性,用荧光抗体病毒中和试验检测其中和活性。结果:成功构建了全人源抗狂犬病毒二价抗体Fab094-DDD的真核表达载体,获得的二价Fab094-DDD抗体与抗原保持着较好的亲和力,能特异性结合狂犬病毒,中和效价为213.2 U/mg。结论:成功制备了抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体,具有较高的中和活性,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础,对于其他疾病双表位人源特异性抗体的制备也具有借鉴作用。 展开更多
关键词 狂犬病毒 二价抗体 中和活性 双表位抗体
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