人源抗EB病毒潜伏膜蛋白1抗体Fab联合丝裂霉素C对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

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作者 毛圆 张大为 +2 位作者 陈仁杰 朱进 冯振卿 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期156-160,共5页

目的:观察联合应用人源抗EB病毒鼻咽癌潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)抗体Fab片段与丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)对LMP1阳性鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:建立LMP1阳性鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,20只成瘤裸鼠随机分成... 目的:观察联合应用人源抗EB病毒鼻咽癌潜伏膜蛋白1(latent membrane protein 1,LMP1)抗体Fab片段与丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)对LMP1阳性鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:建立LMP1阳性鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,20只成瘤裸鼠随机分成4组,即Fab组、MMC组、Fab+MMC组和对照组。腹腔注射药物,每3天1次,共5次。观察肿瘤生长、测量肿瘤体积,计算抑瘤率。免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达、流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况。结果:Fab组、MMC组和Fab+MMC组抑瘤率分别为18.90%、28.95%、49.12%。Fab组、Fab+MMC组VEGF表达量明显低于对照组(P<0.05)。MMC组VEGF表达量和对照组相比,无统计学意义(P>0.05)。MMC组、Fab+MMC组肿瘤细胞凋亡率分别为(11.84±1.50)%、(17.55±3.21)%,与对照组凋亡率(3.90±0.55)%相比,有显著差异(P<0.01);Fab组凋亡率为(7.34±2.68)%,与对照组相比,无显著差异(P>0.05)。结论:Fab及MMC均有抑瘤作用,联合使用效果优于单独使用,二者抑制肿瘤的作用途径不完全相同。Fab可能与抑制肿瘤血管生成有关,MMC可能与诱导肿瘤细胞凋亡增加有关。 展开更多

关键词 FAB 丝裂霉素 潜伏膜蛋白1 鼻咽癌移植瘤

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LMPs特异性T淋巴细胞对鼻咽癌细胞的杀伤作用

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作者 李文杰 唐小军 +5 位作者 熊四平 陈志 蒋帅 冯振卿 朱进 陈仁杰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期705-710,共6页

目的:研究树突状细胞负载EB病毒潜伏膜蛋白(latent membrane proteins,LMPs)介导生成的LMPs特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)LMPs-CTL的生物学特性,观察其对LMPs阳性鼻咽癌细胞SUNE的杀伤作用。方法:用淋巴细胞分... 目的:研究树突状细胞负载EB病毒潜伏膜蛋白(latent membrane proteins,LMPs)介导生成的LMPs特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)LMPs-CTL的生物学特性,观察其对LMPs阳性鼻咽癌细胞SUNE的杀伤作用。方法:用淋巴细胞分离液分离人外周血单核细胞,采用贴壁分离及白细胞介素(interleukin,IL)-4、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)等细胞因子诱导成熟树突状细胞(dendritic cell,DC),通过DC细胞负载LMPs多肽抗原并递呈给同源T淋巴细胞,制备LMPs-CTL。CCK8法检测LMPs-CTL对SUNE细胞的杀伤作用;ELISA和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(carboxy fluoroscein succinimidyl ester,CFSE)染色法检测LMPs-CTL分泌IFN-γ及其增殖。结果:LMPsCTL对SUNE细胞的杀伤率在12 h和24 h分别为(43.47±1.93)%和(77.15±3.18)%,显著高于对照组的(11.45±3.06)%和(24.27±13.20)%(P<0.05)。SUNE细胞刺激后,LMPs-CTL增殖能力较对照组有明显增强,IFN-γ分泌量达到(613.40±121.77)pg/ml,显著高于对照组(86.90±3.70)pg/ml(P<0.05)。结论:通过DC细胞负载LMPs混合多肽可诱导生成LMPsCTL,对LMPs阳性鼻咽癌细胞有较强的杀伤作用。 展开更多

关键词 EB病毒 潜伏膜蛋白 树突状细胞 细胞毒性T细胞 鼻咽癌 细胞免疫治疗

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人源全分子抗c-Met抗体的制备及对鼻咽癌细胞生物学特性的影响 被引量：4

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作者 白璐月 刘金荣 +6 位作者 唐奇 熊四平 陈雅 杜银娟 周荧 朱进 陈仁杰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期687-692,共6页

目的 :利用基因工程技术制备全分子人源抗c-Met抗体,分析该抗体免疫学特性,并观察该全分子抗体对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:设计引物扩增抗c-Met Fab抗体的重轻链可变区序列,将其分别克隆到真核表达载体p FUSECHIg-h G1和... 目的 :利用基因工程技术制备全分子人源抗c-Met抗体,分析该抗体免疫学特性,并观察该全分子抗体对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:设计引物扩增抗c-Met Fab抗体的重轻链可变区序列,将其分别克隆到真核表达载体p FUSECHIg-h G1和p FUSE-CLIg-hκ中。转染真核细胞,表达产物用Protein A柱纯化。通过ELISA、Western blot和免疫荧光等方法鉴定该抗体的免疫学特性。CCK-8检测抗体对人鼻咽癌细胞增殖的抑制作用,划痕实验、Transwell侵袭实验分析抗体对人鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:成功重组全分子人源抗c-Met抗体的表达载体,获得的全分子抗体保留了与抗原的特异性结合活性。CCK-8实验中结果显示全分子抗体能抑制c-Met阳性鼻咽癌细胞CNE2和HONE1的增殖。细胞划痕和Transwell侵袭实验结果显示全分子抗体能抑制c-Met阳性细胞CNE2和HONE1的迁移和侵袭能力。结论:本研究成功制备人源全分子抗c-Met抗体,该抗体有明显的中和活性,为探索鼻咽癌分子靶向治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 鼻咽癌 C-MET 人源抗体

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EB病毒潜伏膜蛋白LMP2A对人鼻咽癌细胞增殖与迁移特性的影响 被引量：2

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作者 陈志 何韶华 +5 位作者 蒋帅 刘鹏 白月璐 冯振卿 朱进 陈仁杰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期523-528,共6页

目的 :制备重组慢病毒载体p LMP2A,并检测其在人鼻咽癌细胞CNE1的表达情况及潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)对人鼻咽癌细胞CNE1增殖、迁移、侵袭的影响。方法 :利用DNA重组技术将EB病毒编码的LMP2A基因克隆到慢病毒表... 目的 :制备重组慢病毒载体p LMP2A,并检测其在人鼻咽癌细胞CNE1的表达情况及潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)对人鼻咽癌细胞CNE1增殖、迁移、侵袭的影响。方法 :利用DNA重组技术将EB病毒编码的LMP2A基因克隆到慢病毒表达载体plv-GFP中,通过酶切、测序验证,将重组慢病毒载体p LMP2A与包装质粒pdelta-8.91、p VSVG共转染人胚肾上皮细胞株293T,包装重组慢病毒LV-LMP2A,并感染人鼻咽癌细胞CNE1,经单克隆筛选后,用RT-PCR、免疫荧光和Western blot检测LMP2A在人鼻咽癌细胞CNE1的表达,CCK8法检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1增殖的影响,划痕实验、Transwell侵袭实验检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1迁移和侵袭的影响。结果:酶切及测序结果表明,成功制备了重组慢病毒载体p LMP2A;RT-PCR、Western blot、免疫荧光结果显示筛选出的细胞克隆能高表达EBV-LMP2A,CCK8结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1增殖,划痕实验结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1迁移,Transwell侵袭实验结果显示LMP2A能提高人鼻咽癌细胞CNE1侵袭能力。结论:成功制备了慢病毒载体p LMP2A,包装的慢病毒能够成功感染人鼻咽癌细胞系CNE1,使LMP2A基因得以高表达,并发现LMP2A能够促进人鼻咽癌细胞株CNE1增殖、迁移、侵袭,为进一步探讨EB病毒在鼻咽癌中的发病机制及基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 EB病毒 潜伏膜蛋白2A 鼻咽癌 慢病毒载体

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鼻咽癌的治疗进展 被引量：12

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作者 丁锴 陈仁杰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期921-926,936,共7页

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)与爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein Barr virus,EBV)密切相关,多发生在中国南部和东南亚国家。因为NPC解剖的特殊性及放疗敏感性,对早期患者行单纯放疗可取得令人满意的疗效。但大多NPC患者确诊时已属... 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)与爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein Barr virus,EBV)密切相关,多发生在中国南部和东南亚国家。因为NPC解剖的特殊性及放疗敏感性,对早期患者行单纯放疗可取得令人满意的疗效。但大多NPC患者确诊时已属于局部晚期,对于这部分患者,以放疗为基础的综合治疗逐渐成为主要手段。如何提高患者的治疗效果及生存质量仍是NPC治疗的一大挑战。文章讨论NPC放化疗的发展和方案选择,及靶向治疗、免疫治疗及鼻内镜手术等新兴技术的发展状况,就近年来NPC的综合治疗作一论述。 展开更多

关键词 鼻咽癌 诱导化疗 靶向治疗 免疫治疗

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社区卫生服务中心耳和听力保健模式的建立和初步实践 被引量：5

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作者 刘丞 徐霞 +4 位作者 王凤 杨爱玲 石帅 程颐清 卜行宽 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期252-255,共4页

目的探索初级耳和听力保健整合进社区卫生服务中心的模式及其可行性。方法选取江苏两个不同地区的社区作试点,对其工作人员进行耳和听力保健基础培训,由其对辖区内2417例高血压、糖尿病患者及居民体检者进行耳和听力筛查、建档、初步处... 目的探索初级耳和听力保健整合进社区卫生服务中心的模式及其可行性。方法选取江苏两个不同地区的社区作试点,对其工作人员进行耳和听力保健基础培训,由其对辖区内2417例高血压、糖尿病患者及居民体检者进行耳和听力筛查、建档、初步处理或转诊治疗,数据云平台输入。结果培训社区卫生工作者约100人次,筛查的2417人中,高血压和糖尿病建档患者接受耳听筛查和服务的覆盖率为17.9%,听力减退检出率为60.9%(1472/2417),听力残疾检出率为14.2%(344/2417);耳科疾病以外耳病为主(89.80%,44/49);建立了社区卫生服务中心开展耳和听力保健的模式,培训、筛查和建立数据库等,小结了实践经验和存在问题,并提出了建议。结论将初级耳和听力保健整合到国家基本公共卫生服务项目,以慢病管理为抓手,逐步有序地展开该项工作是可行的;社会重视、相关政策的制定和经费支持是关键,动员、管理和后续服务需加强。 展开更多

关键词 初级耳和听力保健 听力减退 听力残疾 老年性聋 社区卫生服务

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EB病毒潜伏膜蛋白1胞外区融合蛋白的表达及纯化 被引量：11

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作者 张大为 朱进 +1 位作者 陈仁杰 冯振卿 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期420-423,共4页

目的:在大肠杆菌中表达EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)胞外肽段与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并用该融合表达蛋白检测EB病毒相关鼻咽癌(NPC)患者血清中的特异性抗体。方法:用BamHⅠ和EcoRⅠ将含LMP1胞外区重组基因的质粒pMD18-LMP1双酶切... 目的:在大肠杆菌中表达EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)胞外肽段与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并用该融合表达蛋白检测EB病毒相关鼻咽癌(NPC)患者血清中的特异性抗体。方法:用BamHⅠ和EcoRⅠ将含LMP1胞外区重组基因的质粒pMD18-LMP1双酶切后,克隆到pGEX-4T-2中。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经谷胱甘肽S-转移酶柱亲和层析纯化,纯化的蛋白经Westernblot法检测鉴定。结果:重组表达质粒经酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot结果显示表达的重组蛋白分子质量约为32.2ku,此抗原能够与鼻咽癌患者血清中抗体特异性结合。结论:成功获得了LMP1胞外区重组基因表达的蛋白,并证明原核表达的LMP1胞外肽段保持了原有的抗原性,能够与EBV相关鼻咽癌患者血清中的抗体特异性结合。 展开更多

关键词 鼻咽癌 EB病毒 LMP1 胞外区 重组基因

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侵犯喉或颈段食管的下咽癌和颈段食管癌的诊断与治疗 被引量：2

8

作者 陈仁杰 徐其昌 周鸣 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第6期487-487,共1页

关键词 喉咽癌 颈段食管癌 诊断 治疗 活检

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PI3K基因在甲状腺腺瘤组织中的表达及其意义

9

作者 周鸣 郭锡熔 +1 位作者 张平 刘炜 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期398-400,共3页

目的:分析PI3K基因在人甲状腺腺瘤组织与瘤旁组织中mRNA的表达差异,探讨基因PI3K表达与甲状腺腺瘤疾病之间的关系。方法:外科手术中获取19例单发结节型甲状腺腺瘤组织及瘤旁组织,采用RT-PCR技术检测腺瘤及瘤旁组织中PI3K基因的表达水平... 目的:分析PI3K基因在人甲状腺腺瘤组织与瘤旁组织中mRNA的表达差异,探讨基因PI3K表达与甲状腺腺瘤疾病之间的关系。方法:外科手术中获取19例单发结节型甲状腺腺瘤组织及瘤旁组织,采用RT-PCR技术检测腺瘤及瘤旁组织中PI3K基因的表达水平。结果:甲状腺腺瘤组织中PI3K基因的表达水平为(77.69±14.17)%,瘤旁组织中表达水平为(43.84±18.14)%,甲状腺腺瘤组织中PI3K基因的表达水平显著高于瘤旁组织(P<0.001)。结论:甲状腺腺瘤组织中PI3K基因表达显著上调,PI3K信号转导途径的功能异常可能与甲状腺腺瘤发生发展的机制有关。 展开更多

关键词 PI3K基因 信号分子 甲状腺腺瘤

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甲状腺舌管囊肿及瘘21例手术治疗分析

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作者 周鸣 陈永田 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第6期452-453,共2页

目的　探讨甲状腺舌管囊肿 (thyroglossal ductcyst,TDC)及甲状腺舌管瘘 (thyroglossal duct fistula,TDF)的外科处理。方法　回顾性分析 1989年 1月～ 1999年 12月收治的 17例 TDC和 4例 TDF(3例在外院术后复发病例 )。 1例作了囊肿切... 目的　探讨甲状腺舌管囊肿 (thyroglossal ductcyst,TDC)及甲状腺舌管瘘 (thyroglossal duct fistula,TDF)的外科处理。方法　回顾性分析 1989年 1月～ 1999年 12月收治的 17例 TDC和 4例 TDF(3例在外院术后复发病例 )。 1例作了囊肿切除 ,2 0例作了 Sistrunk手术。结果　 18例获得随访 ,无 1例复发。结论　 Sistrunk手术是治疗 TDC和 TDF的有效术式 ,手术必须切除囊肿或瘘管 ,舌骨中段 1.0～ 1.5 cm和舌骨上导管 ,儿童为 3～ 5 mm,成人为 6～ 8mm。 展开更多

关键词 甲状腺舌囊肿 甲状腺舌管瘘 外科手术

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流感和副流感嗜血杆菌致慢性咽炎3例诊治分析

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作者 程颐清 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期189-189,共1页

关键词 流感嗜血杆菌 副流感嗜血杆菌 慢性咽炎

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RFTVR术、新型光纤CO2激光术对早期喉癌患者症状改善情况和QOL评分、VAS评分的影响 被引量：20

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作者 刘婷 陈仁杰 +2 位作者 庄晓玲 庄汉 刘冰 《海南医学院学报》 CAS 2020年第5期359-362,共4页

目的:研究RFTVR术、新型光纤CO2激光术对早期喉癌患者症状改善情况和QOL评分、VAS评分的影响。方法:选择2015年1月~2016年12月诊断治疗的喉癌患者120例作为研究对象,随机分为观察组和对照组各60例,观察组采取RFTVR术治疗,对照组采取新... 目的:研究RFTVR术、新型光纤CO2激光术对早期喉癌患者症状改善情况和QOL评分、VAS评分的影响。方法:选择2015年1月~2016年12月诊断治疗的喉癌患者120例作为研究对象,随机分为观察组和对照组各60例,观察组采取RFTVR术治疗,对照组采取新型光纤CO2激光术治疗。比较两组围手术期指标、吞咽功能、发音功能、生存期、QOL评分、VAS评分之间的差异。结果:两组术中出血量、手术时间以及住院时间之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组无误咽情况高于对照组,经过治疗后,两组jitter、shimmer、HNR均明显改善,且观察组jitter、shimmer低于对照组,HNR高于对照组(P<0.05);两组QOL评分、VAS评分均明显改善,且观察组的QOL评分高于对照组、VAS评分低于对照组(P<0.05);观察组的总生存期以及无瘤生存期高于对照组。结论:相比CO 2激光治疗,低温等离子射频消融手术治疗的患者吞咽功能以及发音功能明显改善,同时通过对患者生存期的延长,改善患者的生命质量。 展开更多

关键词 CO2激光治疗 低温等离子射频消融手术 喉癌 发音功能 吞咽功能

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EBV编码潜伏膜蛋白2A抗原表位的串联表达及其免疫原性分析 被引量：2

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作者 曹清 唐小军 +7 位作者 李文杰 熊四平 毛园 熊林 刘玉 王长军 冯振卿 陈仁杰 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期593-597,共5页

目的:制备具有免疫原性的EB病毒潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)的表位串联蛋白并分析其免疫学特性。方法:用DNAstar软件分析LMP2A的抗原表位,将预测的免疫原性较强的两个表位通过基因合成串联在一起,克隆到原核表达载... 目的:制备具有免疫原性的EB病毒潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)的表位串联蛋白并分析其免疫学特性。方法:用DNAstar软件分析LMP2A的抗原表位,将预测的免疫原性较强的两个表位通过基因合成串联在一起,克隆到原核表达载体pET28a中,经大肠杆菌BL21表达并纯化。制备的含LMP2A表位重组蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定后,免疫小鼠制备多克隆抗体,以ELISA检测抗体的效价,免疫组织化学法检测该抗体对天然LMP2A的特异性。结果:通过原核表达与纯化,获得高纯度的表位融合蛋白,经小鼠免疫并制备效价高且特异性的小鼠抗LMP2A的多克隆抗体,该抗体可用于ELISA和免疫组织化学分析。结论:本研究制备的表位融合蛋白,具有天然抗原的免疫原性,可制备能特异性识别天然LMP2A分子的多克隆抗体,为利用表位融合蛋白筛选全人源基因工程抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 鼻咽癌 EB病毒 潜伏膜蛋白2A 多克隆抗体 重组基因

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