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Vasohibin-2慢病毒过表达载体的构建及相关增殖功能研究 被引量:1
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作者 孙杰 涂敏 +2 位作者 卫积书 高文涛 苗毅 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期732-737,共6页
目的:构建Vasohibin-2(VASH2)慢病毒过表达载体,获得稳定表达的肝癌细胞株HepG2,并观察其对HepG2增殖的影响。方法:通过逆转录、PCR技术从细胞总RNA中获得VASH2目的基因,引入NheⅠ和PstⅠ酶切位点,连接到pTA2 vector中,经NheⅠ和PstⅠ... 目的:构建Vasohibin-2(VASH2)慢病毒过表达载体,获得稳定表达的肝癌细胞株HepG2,并观察其对HepG2增殖的影响。方法:通过逆转录、PCR技术从细胞总RNA中获得VASH2目的基因,引入NheⅠ和PstⅠ酶切位点,连接到pTA2 vector中,经NheⅠ和PstⅠ双酶切后再连接到Lv-CMV-EGFP vector中,并对重组后的质粒进行双酶切和测序分析;VASH2过表达载体、pVSV-G及delta8.91 3个质粒共转染293T细胞,获得慢病毒感染肝癌细胞株HepG2,经流式细胞仪分选阳性细胞;提取细胞总RNA和总蛋白,利用real-time PCR和Western blot鉴定稳转细胞株中VASH2的表达,用MTT法和细胞周期法检测各组HepG2的增殖能力。结果:成功构建VASH2慢病毒过表达载体,感染肝癌细胞株HepG2后能够稳定高表达VASH2;稳定高表达VASH2的HepG2增殖能力明显增强(P<0.05)。结论:成功构建了VASH2慢病毒过表达载体,并发现VASH2可以促进HepG2的增殖能力,这为进一步研究VASH2在肝癌中的功能及作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 Vasohibin-2 慢病毒过表达载体 细胞增殖
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消化道肿瘤血清CA19-9的检测及其意义
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作者 俞悦 王萱仪 姚冬明 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1997年第4期397-398,共2页
消化道肿瘤血清CA19-9的检测及其意义俞悦王萱仪姚冬明(南京医科大学第一附属医院普外科实验室,南京210029)关键词消化道肿瘤;CA19-9糖类抗原19-9(CA19-9)是应用抗结肠癌单克隆抗体发现的一种胃肠道... 消化道肿瘤血清CA19-9的检测及其意义俞悦王萱仪姚冬明(南京医科大学第一附属医院普外科实验室,南京210029)关键词消化道肿瘤;CA19-9糖类抗原19-9(CA19-9)是应用抗结肠癌单克隆抗体发现的一种胃肠道碳水化合物抗原,是一种较好的肿瘤标... 展开更多
关键词 消化道肿瘤 CA19-9 血清抗原 ELISA
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缺氧微环境中胰腺星状细胞通过CCL7/CCR5轴促进胰腺癌侵袭 被引量:5
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作者 吴飏 刘东方 +11 位作者 张纯 陆子鹏 彭云鹏 蔡宝宝 吴鹏飞 田蕾 钱栋 袁昊 时国东 朱毅 张静静 蒋奎荣 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第5期521-525,543,共6页
目的:探讨缺氧状态下胰腺星状细胞的单核细胞趋化因子7(C-C motif chemokine ligand 7,CCL7)表达情况及其对胰腺癌侵袭的影响。方法:通过组织块外植法获得人肿瘤相关胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs),于常氧(20%O_2)、缺氧... 目的:探讨缺氧状态下胰腺星状细胞的单核细胞趋化因子7(C-C motif chemokine ligand 7,CCL7)表达情况及其对胰腺癌侵袭的影响。方法:通过组织块外植法获得人肿瘤相关胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs),于常氧(20%O_2)、缺氧(1%O_2)下培养,并通过人趋化因子抗体芯片技术分析其上清液中多种趋化因子的表达差异;通过加入不同浓度外源性人重组蛋白CCL7(0、1、10、100 ng/mL)研究趋化因子CCL7与胰腺癌细胞侵袭之间的浓度依赖关系;使用慢病毒转染、Transwell等技术着重分析缺氧PSCs过表达的CCL7促胰腺癌侵袭的作用。结果:相较于常氧培养PSCs,缺氧培养PSCs的条件培养基可显著增强胰腺癌侵袭能力(P<0.05);缺氧培养下PSCs上清液中CCL7相较于常氧培养显著高表达(fold change=2.38);外源性重组CCL7蛋白(0、1、10、100 ng/mL)可显著增加胰腺癌细胞(Miapaca-2、Colo357)侵袭能力,且呈浓度依赖关系。流式细胞术检测CCL7受体(CCR1、CCR2、CCR3、CCR5)表达,显示胰腺癌细胞(Miapaca-2、Colo357)仅有CCR5高表达。Western blot印迹显示,缺氧诱导PSCs高表达CCL7并促胰腺癌侵袭的过程中存在EMT改变,即E-cadherin表达下降,Vimentin、N-cadherin表达上升。结论:缺氧可诱导PSCs高表达CCL7,并通过CCL7/CCR5轴促进胰腺癌细胞迁移和侵袭,其机制可能与诱导胰腺癌上皮间质化有关。 展开更多
关键词 缺氧 胰腺星状细胞 胰腺癌 CCL7 CCR5 上皮间质化
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巢式RT-PCR检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的临床价值 被引量:1
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作者 傅卫 王水 +3 位作者 杜青 肇毅 查小明 刘晓安 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期818-821,858,共5页
目的:联合采用细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)及乳腺上皮黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)指标,探讨通过巢式RT-PCR(nested RT-PCR)方法检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的临床价值。方法... 目的:联合采用细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)及乳腺上皮黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)指标,探讨通过巢式RT-PCR(nested RT-PCR)方法检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的临床价值。方法:采用MCF-7RNA与健康志愿者外周血单核细胞(peripheral mononuclear cell,PMNC)RNA进行梯度混合后的反转录产物,检测优化后巢式RT-PCR体系的敏感性,再选择10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血检测其特异性后,对56例乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA及SBEM mRNA表达情况进行检测。结果:优化后的检测体系能够在3ml外周血PMNCs中检测到1个MCF-7细胞,10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血中未检测到CK19 mRNA与SBEM mRNA的表达;两者的表达与原发肿瘤大小,腋窝淋巴结状况及TNM分期相关(P<0.05),而与原发肿瘤病理类型,激素受体以及C-erbB-2的表达无明显相关性(P>0.05)。结论:经过优化的巢式RT-PCR体系联合检测乳腺癌患者外周血CK19 mRNA及SBEM mRNA的表达敏感性和特异性较高,能用于检测外周血CTC,对进一步精确评估预后及指导治疗可能有较高的临床价值。 展开更多
关键词 乳腺癌 循环肿瘤细胞 巢式RT—PCR 细胞角蛋白19 乳腺上皮黏蛋白
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