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小鼠adam10基因启动子克隆和双荧光素酶报告基因系统构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
陈伟
陈翀
+7 位作者
张焕新
曹江
桑威
吴庆运
赵恺
藏宇
曾令宇
徐开林
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期740-743,共4页
本研究旨在克隆小鼠adam10基因启动子,构建以adam10基因启动子为启动序列的双荧光素酶报告基因系统并分析其活性,为研究adam10基因转录调控提供有效工具。以BALB/c小鼠脑组织为模板,采用PCR方法克隆小鼠adam10基因启动子序列至pCR-Blun...
本研究旨在克隆小鼠adam10基因启动子,构建以adam10基因启动子为启动序列的双荧光素酶报告基因系统并分析其活性,为研究adam10基因转录调控提供有效工具。以BALB/c小鼠脑组织为模板,采用PCR方法克隆小鼠adam10基因启动子序列至pCR-Blunt载体,酶切后连接至荧光素酶报告质粒pGL4.10启动子区域,构建重组荧光素酶报告质粒pGL4.10-adam10,采用阳离子脂质体法与阳性对照质粒pGL4.74共转染真核细胞293FT,以离子霉素刺激为刺激组、DMSO为未加干预组,同时以不含启动子的pGL4.10与阳性对照质粒pGL4.74共转染组为阴性对照组,化学发光仪检测荧光强度及比例。结果表明,酶切及测序验证克隆的adam10启动子序列正确且无突变,构建的重组荧光素酶报告质粒pGL4.10-adam10与阳性对照质粒pGL4.74载体成功共转染293FT细胞,pGL4.10-adam10转染细胞后具有转录活性。离子霉素刺激组活性明显高于DMSO组,荧光比值约为DMSO组2倍(P<0.05),阴性对照组不具备转录活性。结论:成功克隆了adam10启动子并构建了重组荧光素酶报告质粒pGL4.10-adam10,离子霉素可增强adam10基因启动子转录活性。
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关键词
解聚素金属蛋白酶
聚合酶链反应
报告质粒
293FT细胞
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职称材料
题名
小鼠adam10基因启动子克隆和双荧光素酶报告基因系统构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
陈伟
陈翀
张焕新
曹江
桑威
吴庆运
赵恺
藏宇
曾令宇
徐开林
机构
徐州医
学院
附属医院
血液
科
南京医科大学第一临床学院血液科
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期740-743,共4页
基金
国家自然科学基金(编号30770915)
文摘
本研究旨在克隆小鼠adam10基因启动子,构建以adam10基因启动子为启动序列的双荧光素酶报告基因系统并分析其活性,为研究adam10基因转录调控提供有效工具。以BALB/c小鼠脑组织为模板,采用PCR方法克隆小鼠adam10基因启动子序列至pCR-Blunt载体,酶切后连接至荧光素酶报告质粒pGL4.10启动子区域,构建重组荧光素酶报告质粒pGL4.10-adam10,采用阳离子脂质体法与阳性对照质粒pGL4.74共转染真核细胞293FT,以离子霉素刺激为刺激组、DMSO为未加干预组,同时以不含启动子的pGL4.10与阳性对照质粒pGL4.74共转染组为阴性对照组,化学发光仪检测荧光强度及比例。结果表明,酶切及测序验证克隆的adam10启动子序列正确且无突变,构建的重组荧光素酶报告质粒pGL4.10-adam10与阳性对照质粒pGL4.74载体成功共转染293FT细胞,pGL4.10-adam10转染细胞后具有转录活性。离子霉素刺激组活性明显高于DMSO组,荧光比值约为DMSO组2倍(P<0.05),阴性对照组不具备转录活性。结论:成功克隆了adam10启动子并构建了重组荧光素酶报告质粒pGL4.10-adam10,离子霉素可增强adam10基因启动子转录活性。
关键词
解聚素金属蛋白酶
聚合酶链反应
报告质粒
293FT细胞
Keywords
a disintegrin and metalloprotease
polymerase chain reaction
reporter plasmid
293FT cell
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
R733.1 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠adam10基因启动子克隆和双荧光素酶报告基因系统构建及鉴定
陈伟
陈翀
张焕新
曹江
桑威
吴庆运
赵恺
藏宇
曾令宇
徐开林
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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