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刚地弓形虫P30两个不同片段的克隆、表达及鉴定
被引量：
2
1
作者
褚宏亮
姚永伟
+5 位作者
芦王英
刘剑南
陈玲
侯敏
章子豪
张耀娟
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第3期275-279,共5页
目的:构建刚地弓形虫(简称弓形虫)主要表面抗原P30基因的2个不同片段的克隆并进行表达、鉴定。方法:根据已发表的弓形虫P30基因序列,参考有关文献设计合成两对引物,用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出P30基因的两个不同片段,分别构建T-...
目的:构建刚地弓形虫(简称弓形虫)主要表面抗原P30基因的2个不同片段的克隆并进行表达、鉴定。方法:根据已发表的弓形虫P30基因序列,参考有关文献设计合成两对引物,用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出P30基因的两个不同片段,分别构建T-A克隆,经PCR扩增及酶切鉴定后,进行测序,再亚克隆入pMAL-p2质粒并转化DH5α感受态细胞,于氨苄青霉素LB平板上初步筛选阳性克隆,再经酶切及PCR扩增鉴定重组子。将重组子转入表达菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并对所表达的蛋白以western blot鉴定。结果:成功构建相应的T-A克隆及pMAL-p2亚克隆,经诱导、表达和鉴定,证实2个表达产物均为目的蛋白,其分子量分别为70和73Ku。结论:成功获得弓形虫主要表面抗原P30的2个表达产物,为其进一步的纯化及应用奠定了基础。
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关键词
刚地弓形虫
P30
克隆
表达
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题名
刚地弓形虫P30两个不同片段的克隆、表达及鉴定
被引量：
2
1
作者
褚宏亮
姚永伟
芦王英
刘剑南
陈玲
侯敏
章子豪
张耀娟
机构
南京医科大学病原生物学教研室
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第3期275-279,共5页
基金
江苏省2003年血地寄防应用性科学课题(X200331)
文摘
目的:构建刚地弓形虫(简称弓形虫)主要表面抗原P30基因的2个不同片段的克隆并进行表达、鉴定。方法:根据已发表的弓形虫P30基因序列,参考有关文献设计合成两对引物,用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出P30基因的两个不同片段,分别构建T-A克隆,经PCR扩增及酶切鉴定后,进行测序,再亚克隆入pMAL-p2质粒并转化DH5α感受态细胞,于氨苄青霉素LB平板上初步筛选阳性克隆,再经酶切及PCR扩增鉴定重组子。将重组子转入表达菌BL21,用IPTG进行诱导表达,并对所表达的蛋白以western blot鉴定。结果:成功构建相应的T-A克隆及pMAL-p2亚克隆,经诱导、表达和鉴定,证实2个表达产物均为目的蛋白,其分子量分别为70和73Ku。结论:成功获得弓形虫主要表面抗原P30的2个表达产物,为其进一步的纯化及应用奠定了基础。
关键词
刚地弓形虫
P30
克隆
表达
Keywords
toxoplasma gondii
P30
clone
expression
分类号
R382.5 [医药卫生—医学寄生虫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
刚地弓形虫P30两个不同片段的克隆、表达及鉴定
褚宏亮
姚永伟
芦王英
刘剑南
陈玲
侯敏
章子豪
张耀娟
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2004
2
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