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卫氏肺吸虫成虫cDNA文库的多抗筛选 被引量:7
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作者 凌家俭 章子豪 张耀娟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期473-475,F002,共4页
目的 :从卫氏肺吸虫成虫 c DNA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法 :采用预吸收成虫抗原免疫兔血清 ( IRS,多抗 )筛选阳性克隆 ,经 PCR扩增后测定其插入片段的大小。用辅助噬菌体做体内剪切 ,以抗生素平板筛选... 目的 :从卫氏肺吸虫成虫 c DNA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法 :采用预吸收成虫抗原免疫兔血清 ( IRS,多抗 )筛选阳性克隆 ,经 PCR扩增后测定其插入片段的大小。用辅助噬菌体做体内剪切 ,以抗生素平板筛选含重组质粒的阳性菌落。选取插入片段不同的两个克隆测定其 DNA序列 ,用 BL AST软件对所得 DNA序列进行同源性比较。结果 :得到 P.w- 2 ,P.w- 4两个阳性克隆 ,长度分别为 80 1bp和 10 5 3 bp,分别与卫氏肺吸虫原组织蛋白酶 L和卫氏肺吸虫半胱氨酸蛋白酶基因同源 ,同源程度分别为 99%、86%。结论 :用卫氏肺吸虫成虫多抗筛选成虫 c DNA文库 ,所获 P.w- 2和 P.w- 展开更多
关键词 卫氏肺吸虫 CDNA文库 免疫学筛选 并殖吸虫 肺吸虫病 诊断 预防
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卫氏并殖吸虫基因片段的亚克隆及其表达的研究 被引量:3
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作者 凌家俭 侯敏 +2 位作者 刘剑南 章子豪 张耀娟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期357-359,共3页
目的:获得诊断肺吸虫病的特异性重组抗原,以了解其作为免疫诊断抗原的价值。方法:将免疫筛选获得的卫氏并殖吸虫基因克隆双酶切,所得cDNA片段亚克隆入表达载体pRESETB,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以聚丙烯凝胶电泳(SDS-P... 目的:获得诊断肺吸虫病的特异性重组抗原,以了解其作为免疫诊断抗原的价值。方法:将免疫筛选获得的卫氏并殖吸虫基因克隆双酶切,所得cDNA片段亚克隆入表达载体pRESETB,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Westernblotting)对表达产物进行鉴定。结果:成功地将文库中2个大小不同的卫氏并殖吸虫基因片段连接到载体中。其中Pw-2重组子特异性表达产物是分子质量约为32ku的蛋白带,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异性识别。结论:成功构建了编码卫氏并殖吸虫特异性抗原的重组克隆Pw-2。 展开更多
关键词 卫氏并殖吸虫 重组抗原 亚克隆 CDNA文库
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用核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性
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作者 马磊 李秀兰 +4 位作者 田海生 沈波 郑仕中 周大虎 朱昌亮 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第4期58-60,共3页
目的 用淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关胰蛋白酶核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性。方法 用逆Northern鉴定抗药性品系和敏感品系中胰蛋白酶的表达差异 ,用随机引物法标记鉴定后的胰蛋白酶cDNA片段为探针Northernblot检测淡色库蚊的抗药性... 目的 用淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关胰蛋白酶核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性。方法 用逆Northern鉴定抗药性品系和敏感品系中胰蛋白酶的表达差异 ,用随机引物法标记鉴定后的胰蛋白酶cDNA片段为探针Northernblot检测淡色库蚊的抗药性。结果 逆Northern显示胰蛋白酶在抗药性品系中的表达量是敏感品系的 4 33倍。以其为探针Northernblot检测显示 ,胰蛋白酶基因在抗药性品系中高表达 ,抗药性品系中胰蛋白酶的表达量是敏感品系的 3 90倍。结论 作为一种新的抗药性检测的分子生物学方法 。 展开更多
关键词 核酸探针 淡色库蚊 抗药性 逆Northern
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M-CSF、IL-10对单核细胞IL-12、IL-18产生及HLA-DR和CD80表达的影响 被引量:10
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作者 姚婷 王书奎 +3 位作者 陈军 姚堃 秦浚川 季晓辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期67-69,共3页
目的 :探讨巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)和白细胞介素 10(IL 10 )对人外周血单核细胞分泌IL 12、IL 18及细胞表面HLA DR和CD80表达的影响。方法 :从健康献血员血液中分离单核细胞并进行体外培养 ,分别以M CSF和IL 10单独及共同作用 ,... 目的 :探讨巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)和白细胞介素 10(IL 10 )对人外周血单核细胞分泌IL 12、IL 18及细胞表面HLA DR和CD80表达的影响。方法 :从健康献血员血液中分离单核细胞并进行体外培养 ,分别以M CSF和IL 10单独及共同作用 ,收集上清 ,用ELISA法检测单核细胞IL 12和IL 18的分泌 ,用流式细胞术检测细胞表面HLA DR及CD80的表达。结果 :①M CSF能诱导单核细胞分泌IL 18(P <0 .0 5 ) ;IL 10则能抑制IL 18的产生 (P <0 .0 5 ) ,并拮抗M CSF增强LPS诱生IL 18的作用 (P <0 .0 5 )。M CSF和IL 10均能抑制单核细胞分泌IL 12 p4 0 (P <0 .0 5 ) ,并具有协同效应 (P <0 .0 5 )。②M CSF能诱导单核细胞表面HLA DR的表达 (P <0 .0 5 ) ;IL 10则可抑制HLA DR的表达 ,并拮抗M CSF对HLA DR的诱导作用。M CSF对CD80表达的影响不大 ,IL 10能促进CD80的表达。结论 :M CSF和IL - 10可通过对单核细胞分泌IL 12、IL 18及HLA DR和CD80表达的调节 ,影响T细胞的活化。 展开更多
关键词 巨噬细胞集落刺激因子 IL-10 HLA-DR CD80 单核细胞
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巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-10对人外周血单核巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-8的相互作用 被引量:5
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作者 姚婷 王慧娟 +2 位作者 秦浚川 孙路虹 季晓辉 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期360-362,共3页
目的:研究巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和白细胞介素(IL)-10对人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-8的诱生作用及相互影响。方法:自健康献血员血液中分离单核细胞进行体外培养,并以M-CSF、IL-10单独及共同作用,然后收集上清,... 目的:研究巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和白细胞介素(IL)-10对人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-8的诱生作用及相互影响。方法:自健康献血员血液中分离单核细胞进行体外培养,并以M-CSF、IL-10单独及共同作用,然后收集上清,以双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法和生物活性法测TNF-α,以ELISA法检测IL-8。结果:①M-CSF能诱导单核细胞分泌TNF-α(P<0.05),与脂多糖(LPS)具有诱生TNF-α的协同效应(P<0.05);IL-10则能抑制TNF-α的产生(P<0.05),并拮抗M-CSF增强LPS诱生TNF-α的作用(P<0.05);②M-CSF能诱导单核细胞分泌IL-8(P<0.05),IL-10则能抑制IL-8的分泌(P<0.01),并拮抗M-CSF对IL-8的诱生效应(P<0.05)。结论:M-CSF可以促进单核细胞释放炎性细胞因子,是体内重要的炎症性因子之一,而IL-10则是体内重要的炎症抑制因子,能拮抗M-CSF的致炎作用。 展开更多
关键词 巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素-10 肿瘤坏死因子-Α 白细胞介素-8 单核细胞
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抗肝吸虫成虫单抗的制备及其在感染豚鼠血、尿循环抗原检测中的初步应用
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作者 曾毅 侯敏 +2 位作者 俞雷 张耀娟 章子豪 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期484-487,F003,共5页
目的 :制备抗肝吸虫成虫单抗 ,用于检测肝吸虫宿主血、尿中肝吸虫循环抗原 ( CAg)。方法 :采用杂交瘤技术 ,制备抗肝吸虫成虫单抗 ,经鉴定、筛选后 ,以特异性、敏感性均高的单抗做双抗体夹心 EL ISA,检测肝吸虫动物宿主——感染豚鼠血... 目的 :制备抗肝吸虫成虫单抗 ,用于检测肝吸虫宿主血、尿中肝吸虫循环抗原 ( CAg)。方法 :采用杂交瘤技术 ,制备抗肝吸虫成虫单抗 ,经鉴定、筛选后 ,以特异性、敏感性均高的单抗做双抗体夹心 EL ISA,检测肝吸虫动物宿主——感染豚鼠血、尿中的肝吸虫CAg。结果 :获得 4株稳定分泌抗肝吸虫成虫单抗的杂交瘤细胞株 D2 G8、D2 E1 1 、E1 1 H8和 H3B4 ,其 Ig类型鉴定结果均为 Ig G1,κ( kappa)型 ;其腹水单抗效价分别为 1∶ 640 0 0、1∶ 12 80 0 0、1∶ 3 2 0 0 0及 1∶ 2 0 0 0 ;其中 D2 G8、D2 E1 1 和 E1 1 H8的免疫组化显示均定位于肝吸虫成虫的皮层。其中 ,D2 G8、D2 E1 1 和 E1 1 H8与血吸虫、肺吸虫、姜片虫、牛丝虫成虫抗原和棘球蚴囊液、囊虫抗原均无交叉反应 ,H3B4 则仅与血吸虫成虫抗原有弱阳性交叉反应。以混合 D2 E1 1 、E1 1 H8株单抗作包被抗体 ,以 D2 G8株单抗作酶标抗体 ,建立 EL ISA夹心法进行检测。感染豚鼠血、尿中肝吸虫 CAg检出率分别为 95 .4 %和 90 .9% ,CAg平均检出量分别为 0 .3 3 7μg/ml和 0 .13 4 μg/ml。血、尿 CAg联合检测检出率则可达 10 0 %。结论 :抗肝吸虫单抗 D2 E1 1 、E1 1 H8及酶标 D2 G8联合 EL ISA检测肝吸虫宿主血、尿中肝吸虫CAg具有高度的敏感性和特异性 ,对? 展开更多
关键词 循环抗原 酶联免疫吸附试验 尿 肝吸虫 抗肝吸虫成虫单抗 制备
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