人血管内皮生长因子shRNA真核表达载体对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖影响 被引量：3

1

作者 陆彬彬 殷咏梅 +3 位作者 王朝霞 王腾 德伟 束永前 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期403-406,共4页

目的:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,观察对其增殖影响。方法:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,ELISA法检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达量,检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的... 目的:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,观察对其增殖影响。方法:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,ELISA法检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达量,检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的增殖及细胞的克隆形成能力的变化。结果:VEGF shRNA真核表达载体大部分阻断肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达,转染后细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;MTT法观察细胞生长速度变慢,单个细胞的克隆形成能力明显下降。结论:VEGF shRNA真核表达载体可明显抑制SMMC-7721细胞增殖能力,为将VEGF shRNA真核表达载体应用于肝癌的基因治疗提供依据。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 RNA干扰 肝肿瘤

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酵母蔗糖酶K_m值的测定 被引量：6

2

作者 徐桦 陆珊华 孙爱民 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1999年第4期329-331,共3页

Ｋｍ值是酶的特征性常数，测定Ｋｍ值是研究酶动力学的一种重要方法。故“Ｋｍ值的测定”是医学院校本科生、研究生生物化学实验课的重要内容。多年来，在给学生开设碱性磷酸酶Ｋｍ值的测定或酵母蔗糖酶Ｋｍ值的测定中，我们发现原实验... Ｋｍ值是酶的特征性常数，测定Ｋｍ值是研究酶动力学的一种重要方法。故“Ｋｍ值的测定”是医学院校本科生、研究生生物化学实验课的重要内容。多年来，在给学生开设碱性磷酸酶Ｋｍ值的测定或酵母蔗糖酶Ｋｍ值的测定中，我们发现原实验［１］存在一些问题。对此，我们作了... 展开更多

关键词 酵母蔗糖酶 KM值 底物浓度 比色测定 酶动力学

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服用肌酸对肌肉运动能力的影响 被引量：6

3

作者 张一鸣 王若宁 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第6期431-432,共2页

目的　研究增加肌酸摄入量后肌肉组织中肌酸和肌酸激酶 (creatine kinase,CK)含量的变化 ,探讨补充肌酸对肌肉工作能力的影响。方法　小鼠饲养 1周后 ,取得肌肉提取液 ,用联乙酰 -α奈酚反应测定法和逆向反应肌酸比色法分别测定肌酸和 C... 目的　研究增加肌酸摄入量后肌肉组织中肌酸和肌酸激酶 (creatine kinase,CK)含量的变化 ,探讨补充肌酸对肌肉工作能力的影响。方法　小鼠饲养 1周后 ,取得肌肉提取液 ,用联乙酰 -α奈酚反应测定法和逆向反应肌酸比色法分别测定肌酸和 CK的含量。结果　实验组和对照组肌酸和 CK含量经 t检验 (P<0 .0 1) ,差异显著。结论　增加肌酸摄入量 ,能改善肌肉生化基础 。 展开更多

关键词 肌酸 肌肉运动能力 磷酸肌酸 肌酸激酶

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野生型p53cDNA真核表达载体的构建 被引量：1

4

作者 李艳利 王若宁 +3 位作者 李崇勇 徐桦 朱自路 陈丙莺 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期169-170,共2页

关键词 野生型p53cDNA 真核表达载体 基因突变 构建 肿瘤 基因治疗

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离子交换柱层析分离霍乱类毒素 被引量：1

5

作者 林厚怡 宋兰珍 佘雪轩 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1994年第3期304-306,共3页

用超滤、离子交换层析等方法从霍乱弧菌培养液中提取霍乱类毒素,经免疫电泳、SDS-凝胶电泳、等电点聚焦电泳等方法检测表明此法纯化的霍乱类毒素是纯的,家兔蓝斑试验与杀弧菌抗体均为阴性。

关键词 霍乱弧菌 类毒素 纯化

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日本血吸虫中国大陆株安徽品系基因组文库的构建

6

作者 陈丙莺 黄钦田 +3 位作者 徐桦 王以薇 陈淑贞 张兆松 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1997年第6期631-633,共3页

以日本血吸虫中国大陆株安徽品系为材料，采用酚－氯仿抽提，纯化基因组ＤＮＡ。经ＢａｍＨＩ酶切后，与质粒ＰＵＣ１８重组，转化入大肠杆菌ＪＭ１０３，转化率为１０４。并对重组质粒ＤＮＡ进行酶切鉴定。

关键词 日本血吸虫 中国大陆株 安徽品系 基因组文库

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血小板衍化内皮细胞生长因子原核表达载体的构建

7

作者 王若宁 刘玲玲 +3 位作者 张一鸣 李崇勇 徐桦 陈丙莺 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第6期417-419,共3页

目的　构建血小板衍化内皮细胞生长因子 (PD- ECGF)的原核表达载体。方法　设计引物扩增 PD- ECGF的 c D-NA,然后亚克隆入原核表达载体 p QE和 p ET- 32 a,并转化入大肠杆菌 JM10 9。结果　通过菌落原位杂交、PCR和重组质粒酶切分析等方... 目的　构建血小板衍化内皮细胞生长因子 (PD- ECGF)的原核表达载体。方法　设计引物扩增 PD- ECGF的 c D-NA,然后亚克隆入原核表达载体 p QE和 p ET- 32 a,并转化入大肠杆菌 JM10 9。结果　通过菌落原位杂交、PCR和重组质粒酶切分析等方法 ,筛选出重组阳性克隆。结论　此重组质粒可用于原核表达等进一步研究。 展开更多

关键词 生长因子 原核表达载体 构建 PD-ECGF

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含野生型p53cDNA重组逆转录病毒的制备

8

作者 李艳利 王若宁 +1 位作者 张一鸣 陈丙莺 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期299-300,共2页

目的:制备含野生型p53cDNA重组体的复制缺陷型逆转录病毒。方法:设计引物PCR扩增野生型p53cDNA,用T-A克隆的方法克隆入质粒载体pGEM-T,转化JM109,提取pGEM-T/p53重组体,双酶切得到野生型p53cDNA,然后再克隆入逆转录病毒表达载体pLXSN,... 目的:制备含野生型p53cDNA重组体的复制缺陷型逆转录病毒。方法:设计引物PCR扩增野生型p53cDNA,用T-A克隆的方法克隆入质粒载体pGEM-T,转化JM109,提取pGEM-T/p53重组体,双酶切得到野生型p53cDNA,然后再克隆入逆转录病毒表达载体pLXSN,转化感受态大肠杆菌JM109,筛选pL(p53cDNA)SN重组体,脂质体法转染包装细胞AM12,G-418(geneticin)筛选,收集病毒液。结果:通过PCR和重组质粒酶切筛选出重组阳性克隆,收集含pL(p53cDNA)SN重组体的逆转录病毒。结论:含pL(p53cDNA)SN重组体的复制缺陷逆转录病毒可用于转染真核细胞等进一步研究。 展开更多

关键词 野生型P53 CDNA 逆转录病毒表达载体

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幽门螺杆菌cagA基因的克隆

9

作者 李崇勇 张一鸣 徐顺福 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第6期423-424,共2页

目的　为在大肠杆菌表达幽门螺杆菌 Cag A蛋白 ,建立 EL ISA法检测 Cag A抗体 ,克隆幽门螺杆菌 cag A基因片段。方法　根据 cag A基因序列 ,设计引物 PCR扩增 cag A基因片段 ,用 T- A克隆的方法将 PCR产物克隆入质粒载体 p GEM- T,并转... 目的　为在大肠杆菌表达幽门螺杆菌 Cag A蛋白 ,建立 EL ISA法检测 Cag A抗体 ,克隆幽门螺杆菌 cag A基因片段。方法　根据 cag A基因序列 ,设计引物 PCR扩增 cag A基因片段 ,用 T- A克隆的方法将 PCR产物克隆入质粒载体 p GEM- T,并转化大肠杆菌 JM10 9。结果　经蓝白斑筛选 ,PCR及限制性内切酶酶切分析 ,获得 cag A基因片段的克隆 ,序列测定结果与文献报道一致。结论　 PCR产物可采用 T- A法克隆 ,获得的阳性重组体可用于进一步的表达等研究。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 基因克降 cag基因 胃疾病

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用人血红蛋白结晶和牛血红蛋白作N-末端氨基酸测定实验的对比

10

作者 陆珊华 徐桦 孙爱民 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1999年第4期328-328,共1页

实验用牛血红蛋白（Ｈｂ）结晶的两条肽链的末端氨基酸分别为蛋氨酸和缬氨酸，缬氨酸很少，而此实验的主要目的是测定缬氨酸。故用牛Ｈｂ作层析分析鉴定［１，２］结果欠理想，缬氨酸几乎看不清，这样的实验结果学生不满意。而Ｎ－末端... 实验用牛血红蛋白（Ｈｂ）结晶的两条肽链的末端氨基酸分别为蛋氨酸和缬氨酸，缬氨酸很少，而此实验的主要目的是测定缬氨酸。故用牛Ｈｂ作层析分析鉴定［１，２］结果欠理想，缬氨酸几乎看不清，这样的实验结果学生不满意。而Ｎ－末端氨基酸的测定是生物化学实验的重要内... 展开更多

关键词 人血红蛋白 牛血红蛋白 N-末端氨基酸层析 鉴定

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重组腺辅助病毒载体的制备、纯化及其介导的基因转移 被引量：1

11

作者 王立峰 范乐明 陈丙莺 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期182-185,共4页

目的 :探讨一种制备、纯化重组腺辅助病毒 (r AAV)载体的有效方法。方法 :以质粒 PDG和含有人 apo AIc DNA的AAV载体共转染 2 93T细胞 ,继以 Iodixanol密度梯度离心结合肝素亲和层析法分离、纯化 ,斑点杂交鉴定 r AAV病毒颗粒数 ;并以含... 目的 :探讨一种制备、纯化重组腺辅助病毒 (r AAV)载体的有效方法。方法 :以质粒 PDG和含有人 apo AIc DNA的AAV载体共转染 2 93T细胞 ,继以 Iodixanol密度梯度离心结合肝素亲和层析法分离、纯化 ,斑点杂交鉴定 r AAV病毒颗粒数 ;并以含人 apo AIc DNA的 r AAV感染 C2 C12细胞。结果 :r AAV颗粒数为 7× 10 1 0 / ml;r AAV成功介导了人 apo AIc DNA在 C2 C12细胞中的表达并持续了 30天 ,在分化为肌管细胞后仍有此表达能力。结论 :本实验采取的制备、纯化 r AAV的方法简便、高效 ,r AAV成功介导 apo AI基因在肌源性细胞 C2 C12中的表达。 展开更多

关键词 重组腺辅助病毒 载体制备 载体纯化 基因转移

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叠氮钠对ELISA的影向 被引量：1

12

作者 潘芝芳 徐桦 刘锵 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1995年第1期40-44,共5页

在抗原、抗体和酶标记抗体中加入不同量的叠氮钠(NaN_3),用不加NaN_3的组作对照,观察NaN_3在酶标记免疫吸附测定法(ELISA)中的影响,用斜率比值法计算相对抑制率,经两标本直线回归方程比较,用t检验,结果证明NaN_3对酶标记抗体的抑制作用... 在抗原、抗体和酶标记抗体中加入不同量的叠氮钠(NaN_3),用不加NaN_3的组作对照,观察NaN_3在酶标记免疫吸附测定法(ELISA)中的影响,用斜率比值法计算相对抑制率,经两标本直线回归方程比较,用t检验,结果证明NaN_3对酶标记抗体的抑制作用最强,含0.02%NaN_3的酶标记抗体即丧失47.9%的活性(P<0.01);其次是对抗原的抑制作用,含0.1%NaN_3时抗原活性被抑制18.3%(0.05>P>0.02);而0.2%NaN_3,对包被包抗体活性无明显的影响(P>0.5). 展开更多

关键词 叠氮钠 酶标记抗体 抗原 抗体

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霍乱弧菌可溶性血凝素免疫保护作用的初步探讨

13

作者 宋兰珍 林厚怡 +1 位作者 佘雪轩 李焕娣 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1994年第3期307-309,共3页

用本室分离纯化的霍乱弧菌可溶性血凝素及吸附霍乱菌苗免疫小鼠,用Wg_2(E1-Tor生物型)弧菌灌胃攻击,运用霍乱弧菌小鼠小肠粘附免疫抑制试验对可溶性血凝素的免疫保护作用进行了初步探讨。结果表明,可溶性血凝素对霍乱弧菌粘附小鼠肠粘... 用本室分离纯化的霍乱弧菌可溶性血凝素及吸附霍乱菌苗免疫小鼠,用Wg_2(E1-Tor生物型)弧菌灌胃攻击,运用霍乱弧菌小鼠小肠粘附免疫抑制试验对可溶性血凝素的免疫保护作用进行了初步探讨。结果表明,可溶性血凝素对霍乱弧菌粘附小鼠肠粘膜细胞具有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 可溶性血凝素 免疫

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鼠脾中DNA的提取及含量测定

14

作者 王招梯 李鸣 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1996年第1期62-63,71,共3页

从生物组织中提取 DNA,一般都是选用肝组织,但本文选用小鼠的脾脏,通过粉碎组织、裂解细胞膜与核膜,使核蛋白释放。然后用酚抽提,再经7.5 mol/m^3乙酸钠-异丙醇混合液沉淀,得到白色絮状 DNA,通过O.D_(260)nm/O.D_(280)nm 的比值以及琼... 从生物组织中提取 DNA,一般都是选用肝组织,但本文选用小鼠的脾脏,通过粉碎组织、裂解细胞膜与核膜,使核蛋白释放。然后用酚抽提,再经7.5 mol/m^3乙酸钠-异丙醇混合液沉淀,得到白色絮状 DNA,通过O.D_(260)nm/O.D_(280)nm 的比值以及琼脂糖凝胶电泳证实 DNA 是纯的。紫外分光光度计可测定 DNA 含量。 展开更多

关键词 鼠 脾脏 脱氧核糖核酸 DNA

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兔抗人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X抗血清的制备纯化及免疫性质探讨

15

作者 谭委民 丘志昌 +1 位作者 朱雯 苗秉 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1994年第3期300-303,共4页

以纯化的人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X(简称人LDH-X)为抗原免疫家免,制备了兔抗人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X抗血清(简称人LDH-X抗体)。用辛酸法纯化该抗体。以双扩及免疫电泳鉴定,均呈现单一沉淀线。经免疫交叉反应试验证明人LDH-X与人LDH_(1... 以纯化的人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X(简称人LDH-X)为抗原免疫家免,制备了兔抗人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X抗血清(简称人LDH-X抗体)。用辛酸法纯化该抗体。以双扩及免疫电泳鉴定,均呈现单一沉淀线。经免疫交叉反应试验证明人LDH-X与人LDH_(1-5)同工酶有不同的免疫决定簇;纯化的人LDH-K抗体只与人睾丸匀浆、人精液呈现单一沉淀线,而与鼠睾丸LDH-X、兔及牛睾丸匀浆均无交叉反应。从而显示纯化的人LDH-X抗体具有较强的种属特异性。 展开更多

关键词 睾丸 乳酸脱氢酶 同工酶 免疫

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