人绒毛膜癌JAR/VP16多药耐药细胞株的建立及相关基因表达检测 被引量：8

1

作者 徐珊 朱利群 +2 位作者 罗莉 陈琪 徐昌芬 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期485-490,F0002,共7页

目的:建立人绒毛膜癌鬼臼乙叉甙(VP16)耐药细胞株,检测其生物学特性及耐药和凋亡相关基因的表达,探讨多药耐药性产生与凋亡基因改变之间的相关性。方法:体外采用VP16浓度梯度递增法诱导建立JAR/VP16耐药细胞株,终浓度药物维持培养4个月,... 目的:建立人绒毛膜癌鬼臼乙叉甙(VP16)耐药细胞株,检测其生物学特性及耐药和凋亡相关基因的表达,探讨多药耐药性产生与凋亡基因改变之间的相关性。方法:体外采用VP16浓度梯度递增法诱导建立JAR/VP16耐药细胞株,终浓度药物维持培养4个月,MTT法测定多药耐药谱及耐药稳定性;倒置相差显微镜观察并结合HE染色探讨耐药细胞在光镜下的形态学变化,电镜观察细胞的超微结构;基因芯片检测耐药相关基因及凋亡相关基因的表达。结果:①历经14个月、70多代耐药诱导培养,成功构建人绒毛膜癌JAR细胞耐VP16的耐药细胞株,命名为J“AR/VP16耐药细胞株,”与JAR细胞相比有显著的形态学改变,其对VP16的耐药性能稳定,耐药指数(RI)为73.67;并且对紫杉醇(TAX)、甲氨蝶呤(MTX)和更生霉素(KSM)具有显著的交叉耐药性,耐药指数分别为26.18、18.67和14.73;对5-氟尿嘧啶(5-FU)和长春新碱(VCR)的耐受性有所增加(RI∶2.88;3.45);对阿霉素(ADM)则无明显的交叉耐药(RI∶1.39)。②基因芯片结果表明,JAR/VP16细胞MRP1、MRP2、MRP6、BCRP、LRP和Rb等耐药基因表达明显高于亲本细胞,并且Bcl-2、Bcl-x、MyD88、TRAF-4、TRAF-6、Trip等凋亡抑制基因表达上调,Bax、BimL、Blk、Caspase-7-、8、-13-、14以及Fas和FasL等凋亡促进基因表达下调。结论:①JAR/VP16细胞呈现多药耐药性且耐药性能稳定,为研究耐药机制及筛选药物提供了理想的实验模型。②JAR/VP16细胞中凋亡相关基因表达的改变可能是其产生多药耐药性的一个重要机制。 展开更多

关键词 绒毛膜癌 多药耐药 耐药基因 凋亡基因 基因芯片 鬼臼乙叉甙(VP16)

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马鞭草有效成分对人绒毛膜癌耐药细胞株JAR/VP16的逆转作用研究 被引量：4

2

作者 朱利群 徐珊 +3 位作者 罗莉 李卓 仇黎丽 徐昌芬 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期419-423,F0002,共6页

目的:研究马鞭草有效成分4’-甲醚-黄芩素(4’-methylether-scutellarein,4’-M-S)对人绒毛膜癌多药耐药细胞株JAR/VP16的耐药逆转作用。方法:MTT法检测4’-M-S对JAR/VP16细胞的增殖抑制作用,确定药物逆转浓度及其对耐药细胞的逆转倍数... 目的:研究马鞭草有效成分4’-甲醚-黄芩素(4’-methylether-scutellarein,4’-M-S)对人绒毛膜癌多药耐药细胞株JAR/VP16的耐药逆转作用。方法:MTT法检测4’-M-S对JAR/VP16细胞的增殖抑制作用,确定药物逆转浓度及其对耐药细胞的逆转倍数和逆转效率;单克隆抗体酶免定量法测定耐药细胞中绒毛膜促性腺激素(hCG)分泌变化;流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡率;光镜和透射电镜观察耐药细胞形态学改变。结果:4’-M-S对JAR/VP16细胞具有明显增殖抑制作用,20μg/ml4’-M-S可显著逆转JAR/VP16细胞对鬼臼乙叉甙(VP16)、氨甲喋呤(MTX)及放线菌素D(ACTD)的耐受性,逆转倍数为:5.02、3.67、2.48;逆转效率为:81.19%、76.89%、64.08%;4’-M-S联合作用后,耐药细胞hCG分泌量明显下降;细胞周期阻滞于G0～G1期和G2～M期,细胞凋亡率达19.71%;透射电镜观察发现细胞质空泡化、内质网扩张、核物质浓缩边聚等早期凋亡现象。结论:4’-M-S对JAR/VP16细胞具有耐药逆转作用,可能的机制是抑制耐药细胞生长及诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 4'-甲醚-黄芩素 绒毛膜癌 多药耐药 逆转 细胞凋亡

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小鼠卵巢蛋白质双向凝胶电泳蛋白谱系的初步建立及其功能分析 被引量：4

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作者 马翔 钱云 +8 位作者 谢满鑫 侯振 孟艳 刘金勇 翟永宁 朱叶飞 周作民 沙家豪 刘嘉茵 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期581-586,共6页

目的：初步建立性成熟小鼠卵巢蛋白质图谱，并对其中的蛋白质功能进行研究。方法：通过双向电泳和质谱技术分析性成熟小鼠卵巢蛋白质组，并对其中的一种蛋白质进行免疫组化研究。结果：(1)获得高重复性和高分辨率小鼠卵巢蛋白图谱。软... 目的：初步建立性成熟小鼠卵巢蛋白质图谱，并对其中的蛋白质功能进行研究。方法：通过双向电泳和质谱技术分析性成熟小鼠卵巢蛋白质组，并对其中的一种蛋白质进行免疫组化研究。结果：(1)获得高重复性和高分辨率小鼠卵巢蛋白图谱。软件分析显示，3个不同卵巢样品24cm 银染蛋白凝胶上的蛋白点均有±2000点，胶重复性好，大部分蛋白点位于相对相同的位置。(2)质谱共鉴定出52种蛋白质，按功能对其进行分类：参与细胞代谢、细胞信号传导/交流、细胞结构/运动、细胞/器官防御与抗氧化作用、调节 RNA 合成、调节蛋白表达及未分类。(3)通过对其中的一种蛋白(GRP78)行免疫组化分析，发现随着卵巢由卵泡早期逐渐生长到排卵前卵泡期成熟并转向黄体期，其在颗粒细胞中的表达信号增强。结论：(1)3个不同卵巢样品蛋白质双向电泳图重复性好。我们通过质谱分析共鉴定出约52种蛋白质，初步构建了小鼠卵巢双向电泳蛋白图谱，对研究卵巢病理与生理、发育过程有着重要的参考价值。(2)行免疫组化分析结果显示，在卵巢周期变化过程中，GRP78蛋白对颗粒细胞的增生、分化、形成黄体颗粒细胞起着重要的调控作用。 展开更多

关键词 卵巢 小鼠 蛋白质 巢蛋白 免疫组化分析 颗粒细胞 双向电泳 双向凝胶电泳 银染 细胞信号传导

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质谱法分析2型糖尿病大鼠神经视网膜差异表达蛋白 被引量：5

4

作者 王亚冬 吴金道 +3 位作者 江中立 王学浩 刘超 童明庆 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2065-2072,共8页

采用二维电泳(2DE)分离了正常SD大鼠和2型糖尿病模型大鼠神经视网膜组织总蛋白,并用ImageMaster5.0软件分析比较了正常组和糖尿病组2DE图像,正常组检测到3122±37(n=3)个蛋白质点;糖尿病组检测到2702±21(n=3)个蛋白质点.约150... 采用二维电泳(2DE)分离了正常SD大鼠和2型糖尿病模型大鼠神经视网膜组织总蛋白,并用ImageMaster5.0软件分析比较了正常组和糖尿病组2DE图像,正常组检测到3122±37(n=3)个蛋白质点;糖尿病组检测到2702±21(n=3)个蛋白质点.约150个蛋白质点的表达水平在两组之间存在明显差异(P<0.05).在糖尿病组中表达上调的点68个,下调的点82个.选择20个差异表达蛋白质点进行肽质量指纹谱(PMF)或串联质谱鉴定,其中7个蛋白已有报道与糖尿病视网膜病变(DR)相关,10个蛋白尚未见有报道. 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 神经视网膜 蛋白质组学 二维凝胶电泳

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附睾蛋白RhoA参与人精子顶体反应 被引量：1

5

作者 石中华 赵纯 +2 位作者 周作民 黄小燕 沙家豪 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期827-830,835,共5页

目的:研究RhoA在男性生殖系统中的表达和功能。方法:采用RT-PCR来检测RhoA的mRNA表达,Western blot和免疫组化用来检测RhoA蛋白在人睾丸,附睾及成熟精子中的表达。免疫荧光用来观察这个蛋白在人精子上的定位。豌豆凝集素(PSA)染色用来... 目的:研究RhoA在男性生殖系统中的表达和功能。方法:采用RT-PCR来检测RhoA的mRNA表达,Western blot和免疫组化用来检测RhoA蛋白在人睾丸,附睾及成熟精子中的表达。免疫荧光用来观察这个蛋白在人精子上的定位。豌豆凝集素(PSA)染色用来确定精子顶体反应率。结果:只能在附睾中检测到RhoA的mRNA,而RhoA蛋白不仅在附睾上皮中表达,在人精子上也有表达。它位于人精子的顶体和尾部,并且随着顶体反应转移到精子的赤道部及顶体后区。同时特异的RhoA抗体能够显著地抑制精子发生顶体反应(P<0.01)。结论:结果表明RhoA可能是在附睾成熟过程中带到人精子质膜表面,从而使精子获得发生顶体反应的能力。 展开更多

关键词 附睾分泌蛋白 顶体反应 精子成熟 受精

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大型流式细胞仪质量控制方法的探讨 被引量：5

6

作者 胡凡 王玲 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期211-213,共3页

目的:探讨大型流式细胞仪在检测过程中检测结果准确性控制的方法及可行性。方法:用普通鸡血制成鸡红细胞悬液以及美国BD公司2滋m荧光微球用于校准大型流式细胞仪的光路,以达到质量控制的目的。结果:经过控制与校准,免疫检测时变异系数(C... 目的:探讨大型流式细胞仪在检测过程中检测结果准确性控制的方法及可行性。方法:用普通鸡血制成鸡红细胞悬液以及美国BD公司2滋m荧光微球用于校准大型流式细胞仪的光路,以达到质量控制的目的。结果:经过控制与校准,免疫检测时变异系数(CV)<12%,DNA倍体分析时CV<3%。完全达到荧光微球调校效果。结论:该方法用于大型流式细胞仪效果与标准试剂相当且比较经济。 展开更多

关键词 流式细胞仪 质量控制

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无标记定量方法在小鼠精子发生相关蛋白质组学研究中的应用

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作者 王黎熔 王富强 +3 位作者 郭雪江 霍然 周作民 沙家豪 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1677-1682,1740,共7页

目的:利用无标记定量蛋白质组学技术筛选在3周龄及成年小鼠睾丸中差异表达的蛋白质。方法:分别抽提3周龄及成年小鼠睾丸蛋白,酶解后所得肽段经纳升液相色谱分离,并经LTQ Obitrap质谱鉴定,在获得蛋白鉴定信息的同时根据相应肽段离子质谱... 目的:利用无标记定量蛋白质组学技术筛选在3周龄及成年小鼠睾丸中差异表达的蛋白质。方法:分别抽提3周龄及成年小鼠睾丸蛋白,酶解后所得肽段经纳升液相色谱分离,并经LTQ Obitrap质谱鉴定,在获得蛋白鉴定信息的同时根据相应肽段离子质谱峰强度对蛋白进行相对定量。结果:在3周龄及成年小鼠睾丸中共鉴定到非冗余蛋白319种,其中30种蛋白在两者之间存在显著的表达差异,这些蛋白主要参与形态发生、收缩、胞吞、受精等细胞事件,与精子变形过程及精子功能相关。结论:无标记定量蛋白质组学技术,具有方法简便、通量大、成本低廉等优点,利用其寻找睾丸发育,精子发生/功能相关蛋白具有广阔的前景。 展开更多

关键词 无标记定量 蛋白质组学 精子变形

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自然妊娠和ART妊娠早期流产绒毛细胞遗传学检查的临床应用价值 被引量：8

8

作者 张燕 张凤 +5 位作者 周亚东 丁卫 钱晓乔 王媁 冒韵东 刘嘉茵 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期937-941,共5页

目的:探讨自然妊娠和辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)妊娠时早期妊娠流产绒毛细胞遗传学检查的临床应用价值。方法:门诊107例自然妊娠和ART妊娠早期流产患者,无菌下取108份绒毛组织进行绒毛细胞培养及染色体核型分... 目的:探讨自然妊娠和辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)妊娠时早期妊娠流产绒毛细胞遗传学检查的临床应用价值。方法:门诊107例自然妊娠和ART妊娠早期流产患者,无菌下取108份绒毛组织进行绒毛细胞培养及染色体核型分析,成功培养106份,分为2组:46份自然妊娠早期流产组(N组);60份ART妊娠早期流产组(ART组),其中7份为宫腔内人工授精,53份为体外受精和胞浆内单精子注射。结果:①108份早期流产绒毛培养成功率为98.15%(106/108)。②N组正常核型为28例,异常核型18例;ART组正常核型为41例,异常核型19例。异常核型共计37例,其中数目异常检出率为33.96%(36/106),结构异常为0.94%(1/106)。③异常核型以数目异常为主97.2%(36/37),并以三体征75.68%(28/37)最常见。N组:三倍体1例,性染色体数目异常1例,常染色体异常16例。ART组:三倍体2例,四倍体2例,罗伯逊易位1例,性染色体数目异常2例,常染色体异常12例。④男性胚胎占47.17%(50/106),女性胚胎占52.83%(56/106),男女性别比例无显著性差异;染色体异常的胚胎中男性占48.65%(18/37),女性占51.35%(19/37),异常胚胎在两种性别中的比例无显著性差异。⑤N组患者平均年龄为(29.61±3.60)岁,ART组患者平均年龄为(31.98±4.38)岁,两组年龄上差异有统计学意义。结论:胚胎染色体数目异常是导致早期胚胎停育流产的重要原因;早期流产绒毛细胞进行细胞遗传学检查,可为临床病因诊断和下次妊娠治疗和评估提供重要理论依据。 展开更多

关键词 流产 绒毛细胞 染色体 辅助生殖技术

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PGE2通过cAMP-PKA信号转导通路促进肝癌细胞VEGF表达 被引量：2

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作者 王耀辉 马娟 +5 位作者 束为 彭韬 张海 白小明 张丽 冷静 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期299-303,共5页

目的:探讨PGE2对人肝癌细胞HuH7VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路。方法:用PGE2、EP1-4四种受体激动剂、SQ22536+PGE2、H89+PGE2处理HuH7细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化。结果:10μmo... 目的:探讨PGE2对人肝癌细胞HuH7VEGF表达的影响及其可能涉及的信号转导通路。方法:用PGE2、EP1-4四种受体激动剂、SQ22536+PGE2、H89+PGE2处理HuH7细胞,Real-time PCR、Western blot、ELISA等检测VEGFmRNA、蛋白表达的变化。结果:10μmol/L PGE2处理HuH7细胞24h后,VEGFmRNA的表达水平上升了264%(P<0.01)、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平上升了24%(P<0.01);10μmol/L PGE2处理HuH7细胞6、12、24h后,胞浆中VEGF蛋白的表达水平分别上升了13.6%、25.7%、39.6%(P<0.01);10μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞24h后,胞浆、细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平与对照组相比分别上升了32.3%、20.1%(P<0.01),而10μmol/L EP1、EP3、EP4受体激动剂处理HuH7细胞24h后,VEGF的表达水平无明显改变;30μmol/L PKA抑制剂(H89)、500μmol/L腺苷酸环化酶抑制剂(SQ22536)处理HuH7细胞24h后,胞浆VEGF的表达水平分别为对照组的91.6%、89.6%,细胞培养上清中VEGF的表达水平分别为对照组的98.3%、91.9%,与PGE2组相比均有统计学差异(P<0.01)。结论:PGE2可上调HuH7细胞VEGF的表达,其作用机制可能是通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路所致。 展开更多

关键词 肝细胞癌 PGE2 EP受体 VEGF cAMP—PKA

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钙网蛋白calreticulin在小鼠睾丸中的表达及意义 被引量：1

10

作者 卢秀真 吴亦波 +1 位作者 周作民 黄晓燕 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1219-1222,共4页

目的:研究钙网蛋白(calreticulin,CRT)在成年小鼠睾丸组织中的表达及分布,探讨CRT在小鼠睾丸发育及其精子发生过程的功能。方法:运用免疫印迹法和免疫组织化学术,检测CRT在小鼠睾丸组织中的表达和分布。结果:免疫印记法证实CRT在成年小... 目的:研究钙网蛋白(calreticulin,CRT)在成年小鼠睾丸组织中的表达及分布,探讨CRT在小鼠睾丸发育及其精子发生过程的功能。方法:运用免疫印迹法和免疫组织化学术,检测CRT在小鼠睾丸组织中的表达和分布。结果:免疫印记法证实CRT在成年小鼠睾丸高表达,同时免疫组织化学显示阳性信号主要集中在小鼠睾丸精原细胞和间质细胞。结论:CRT在小鼠睾丸中的定位提示其可能与精原细胞更新和分化以及雄激素分泌密切相关。 展开更多

关键词 钙网蛋白 小鼠睾丸 免疫印记法 免疫组织化学

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PGE2对HuH7细胞Survivin表达影响的研究

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作者 蒋慧 白小明 冷静 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期589-593,共5页

目的:研究前列腺素E2(PGE2)对人肝癌细胞HuH7Survivin表达的影响及其与PI3K/AKT信号转导通路的相关性。方法:用PGE2、EP受体激动剂、EP受体抑制剂、PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞,用Westernblot检测Survivin蛋白表达。结果:5μmol/L... 目的:研究前列腺素E2(PGE2)对人肝癌细胞HuH7Survivin表达的影响及其与PI3K/AKT信号转导通路的相关性。方法:用PGE2、EP受体激动剂、EP受体抑制剂、PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞,用Westernblot检测Survivin蛋白表达。结果:5μmol/LPGE2处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与对照组相比上升了63.59%(P<0.01);5μmol/LEP1、5μmol/LEP3、5μmol/LEP4受体激动剂分别处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与对照组相比分别上升了114.76%(P<0.01),76.68%(P<0.01),70.01%(P<0.01),而5μmol/LEP2受体激动剂处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与对照组相比无明显改变(P>0.05);10μmol/LEP1,10μmol/LEP4受体抑制剂分别处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比分别下降了32.95%(P<0.01),28.36%(P<0.05),而10μmol/LEP2受体抑制剂处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比无明显改变(P>0.05);10μmol/LPI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞8h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比下降了28.05%(P<0.01)。结论:PGE2可能通过EP1、EP3、EP4这3种受体影响HuH7细胞中Survivin的表达,且这种调节作用可能与PI3K/Akt信号转导通路有关。 展开更多

关键词 肝细胞癌 PGE2 EP受体 SURVIVIN PI3K/AKT

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