目的建立优化SD大鼠神经视网膜双向电泳（two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）图像技术方法，并对正常视网膜蛋白质组图像进行初步分析。方法雄性SD大鼠，断颈处死取眼球。在解剖显微镜下分离神经视网膜组织，液氮速冻，提取...目的建立优化SD大鼠神经视网膜双向电泳（two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）图像技术方法，并对正常视网膜蛋白质组图像进行初步分析。方法雄性SD大鼠，断颈处死取眼球。在解剖显微镜下分离神经视网膜组织，液氮速冻，提取总蛋白质组份，-70℃保存。部分视网膜标本立即固定后做光镜或电镜分析。应用2-DE技术，对提取的蛋白质进行分离。在一维等点聚焦、垂直SDS凝胶电泳、银染（考染）等关键技术上进行优化和重复实验，建立分辨率高和重复性良好的2-DE图像；联合图像扫描和图像分析软件，对正常SD大鼠神经视网膜组织蛋白质组图像进行初步分析。结果成功获得了分辨率和重复性良好的视网膜蛋白质2-DE图谱。每张电泳图谱可获得约3000个左右可辨认的蛋白质斑点。其中大部分蛋白质点分布在pH4～8范围内，其相对分子质量主要集中在25～100区域。结论2-DE技术可用于对神经视网膜蛋白质组份的分离和鉴定。本实验建立的技术为进一步进行视网膜蛋白质组学研究奠定了基础。展开更多
文摘目的建立优化SD大鼠神经视网膜双向电泳（two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）图像技术方法，并对正常视网膜蛋白质组图像进行初步分析。方法雄性SD大鼠，断颈处死取眼球。在解剖显微镜下分离神经视网膜组织，液氮速冻，提取总蛋白质组份，-70℃保存。部分视网膜标本立即固定后做光镜或电镜分析。应用2-DE技术，对提取的蛋白质进行分离。在一维等点聚焦、垂直SDS凝胶电泳、银染（考染）等关键技术上进行优化和重复实验，建立分辨率高和重复性良好的2-DE图像；联合图像扫描和图像分析软件，对正常SD大鼠神经视网膜组织蛋白质组图像进行初步分析。结果成功获得了分辨率和重复性良好的视网膜蛋白质2-DE图谱。每张电泳图谱可获得约3000个左右可辨认的蛋白质斑点。其中大部分蛋白质点分布在pH4～8范围内，其相对分子质量主要集中在25～100区域。结论2-DE技术可用于对神经视网膜蛋白质组份的分离和鉴定。本实验建立的技术为进一步进行视网膜蛋白质组学研究奠定了基础。
