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2002~2003年南京地区流感病毒的分离与分子生物学鉴定 被引量:3
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作者 周锋 孙华 +1 位作者 姚堃 朱建中 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期952-954,共3页
目的:从南京流感样患者中分离流感病毒并通过分子生物学方法鉴定,为研究南京地区流感病毒基因变异特点提供基础。方法:将流感样患者咽拭子接种狗肾传带细胞,筛选血凝阳性细胞培养上清,以甲、乙型流感病毒型及甲1、甲3亚型特异性引物通过... 目的:从南京流感样患者中分离流感病毒并通过分子生物学方法鉴定,为研究南京地区流感病毒基因变异特点提供基础。方法:将流感样患者咽拭子接种狗肾传带细胞,筛选血凝阳性细胞培养上清,以甲、乙型流感病毒型及甲1、甲3亚型特异性引物通过RT-PCR方法鉴定并分型和亚型,用血凝抑制试验证实。结果:13份标本中血凝阳性为8份,甲型流感病毒型特异性引物RT-PCR扩增结果4株为阳性,且均为甲3型;乙型流感病毒型特异性引物RT-PCR结果2株为阳性。血凝抑制试验支持此结果。结论:从南京地区流感样患者中成功地分离并鉴定了6株流感病毒。 展开更多
关键词 流行性感冒病毒 病毒分离 逆转录聚合酶链式反应
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340例儿童急性呼吸道感染常见病毒病原的检测 被引量:10
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作者 陈小琴 冯东举 姚堃 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1756-1759,共4页
目的:了解小儿急性呼吸道感染(acute respiratory tract infection ARTI)中病毒感染状况,为预防和治疗疾病提供依据。方法:收集2009年5月~2010年4月期间340例确诊为ARTI住院患儿的深部鼻咽分泌物(NPS)临床标本,采用逆转录聚合酶链反应(... 目的:了解小儿急性呼吸道感染(acute respiratory tract infection ARTI)中病毒感染状况,为预防和治疗疾病提供依据。方法:收集2009年5月~2010年4月期间340例确诊为ARTI住院患儿的深部鼻咽分泌物(NPS)临床标本,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测常见的7种呼吸道病毒:呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒(IFV)、副流感病毒(PIV)、人类偏肺病毒(HMPV)、腺病毒(ADV)、鼻病毒(HRV)和肠道病毒(EV)。统计分析各种病毒所致ARTI的临床特点及流行特征。结果:340例标本中共检出212例阳性,阳性率为62.35%。其中RSV感染为132例,阳性率为62.3%;IFV感染为45例、阳性率为21.3%;PIV感染为13例,阳性率为6.1%;HMPV感染为13例,阳性率为6.1%;ADV感染为4例,阳性率为1.9%;HRV感染为2例,阳性率为0.9%;EV感染为7例,阳性率为3.3%。结论:本地区诊断为ARTI住院儿童中病毒感染率为62.35%,其中以RSV为主。 展开更多
关键词 急性呼吸道感染 呼吸道病毒 RT-PCR
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含EB病毒LMP2A毕氏酵母表达载体的构建与表达LMP2A蛋白的检测 被引量:1
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作者 陈云 姚堃 +4 位作者 孙华 彭光勇 丁传林 谢芳艺 周峰 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期297-300,共4页
目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体,并在真核生物毕氏酵母细胞中表达。方法:用EcoR I和Not I将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后,克隆到毕氏酵母载体PICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-LMP2A。pICZαA-LMP2A经Sac I酶切... 目的:构建EB病毒潜伏膜蛋白2A的表达载体,并在真核生物毕氏酵母细胞中表达。方法:用EcoR I和Not I将含LMP2A全长编码基因的质粒PCIcc双酶切后,克隆到毕氏酵母载体PICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-LMP2A。pICZαA-LMP2A经Sac I酶切线性化,采用氯化锂的方法转化毕氏酵母GS115,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得LMP2A阳性克隆的菌株,用PCR鉴定阳性酵母转化子,并分别将阳性的酵母转化子在BMGY和BMMY培养基中进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳和western-blotting分析。结果:重组质粒pPICZαA-LMP2A经PCR和酶切鉴定为阳性。SDS-PAGE电泳和western-blotting结果显示表达蛋白的相对分子量为54 Kda,与预计值相同。结论:构建了LMP2A毕氏酵母表达载体,并在酵母细胞中成功表达。 展开更多
关键词 EB病毒 LMP2A基因 毕氏酵母 氯化锂 酵母细胞 肿瘤免疫疗法
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表达EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)的小鼠移植瘤模型的建立
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作者 孙华 姚堃 +3 位作者 丁传林 陈云 徐江英 彭光勇 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期301-304,F003,共5页
目的:建立表达EB病毒LMP2A小鼠移植瘤模型,为树突状细胞治疗EB病毒相关肿瘤的动物试验奠定基础。方法:将EB病毒LMP2A基因克隆至逆转录质粒pLXSN中,重组质粒用脂质体Clonfectin转入BALB/c小鼠来源的骨髓瘤细胞SP2/0,经G418筛选获得阳性克... 目的:建立表达EB病毒LMP2A小鼠移植瘤模型,为树突状细胞治疗EB病毒相关肿瘤的动物试验奠定基础。方法:将EB病毒LMP2A基因克隆至逆转录质粒pLXSN中,重组质粒用脂质体Clonfectin转入BALB/c小鼠来源的骨髓瘤细胞SP2/0,经G418筛选获得阳性克隆,亚克隆得到EB病毒LMP2A表达株并经PCR、RT-PCR、IFA、流式细胞仪鉴定。腹股沟皮下接种该细胞入BALB/c小鼠得到移植瘤模型,两周后切除肿瘤组织并作苏木精-伊红(H-E)染色切片。结果:构建出含EB病毒LMP2A基因的重组逆转录质粒,获得表达EB病毒LMP2A的SP2/0细胞,该细胞在BALB/c小鼠可生长成肿块。结论:成功地构建表达EB病毒潜伏膜蛋白2A(LMP2A)的小鼠移植瘤模型。 展开更多
关键词 LMP2A 重组质粒 肿瘤 动物模型
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