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EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
陈云
周锋
+3 位作者
孙倍成
刘根焰
王冰
姚堃
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第11期1013-1015,1019,共4页
目的:克隆EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)全长基因,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A,转染真核细胞后获得稳定表达LMP2A的细胞株。方法:采用RT-PCR技术从B95.8细胞中获得EB病毒LMP2A全长基因,克隆到测序载体pMD18-T...
目的:克隆EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)全长基因,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A,转染真核细胞后获得稳定表达LMP2A的细胞株。方法:采用RT-PCR技术从B95.8细胞中获得EB病毒LMP2A全长基因,克隆到测序载体pMD18-T中,经测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pGEZ-Term中,与两辅助病毒载体PHIT456、PHIT60通过Lipofectamine2000共转染包装细胞293T,测定产生的重组逆转录病毒滴度并感染小鼠成纤维细胞L929,经Zeocine筛选后得到稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western blot法检测细胞中LMP2A mRNA和蛋白表达情况。结果:重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A经测序鉴定正确;转染后上清中病毒的滴度为5×108cfu/L,感染L929细胞后用Zeocine筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Westernblot检测结果表明筛选出的细胞克隆能稳定表达EBV-LMP2A。结论:表达EBV-LMP2A细胞株的构建为蛋白制备与纯化奠定了物质基础,也为后续的EBV相关性疾病疫苗的研究提供了新思路。
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关键词
EB病毒
LMP2A
逆转录病毒
重组
在线阅读
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职称材料
勘误:EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定
2
作者
陈云
周锋
+3 位作者
孙倍成
刘根焰
王冰
姚堃
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期274-274,共1页
因本文作者失误,发表在《细胞与分子免疫学杂志》2009年第25卷第11期第1013-1015页的“EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定”论文中,图2A及图3用错了荧光显微镜和流式细胞术的图像。
关键词
重组逆转录病毒载体
流式细胞术
稳定表达细胞株
荧光显微镜
A基因
《细胞与分子免疫学杂志》
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职称材料
题名
EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
陈云
周锋
孙倍成
刘根焰
王冰
姚堃
机构
南京医科大学微生物与免疫学系江苏省病原重点实验室
南京医科大学
第一附属医院肝脏外科卫生部活体肝移植
重点
实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第11期1013-1015,1019,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30170880
30772003)
+2 种基金
江苏省"九五"攻关课题(BJ98100)
江苏省重点人才资助项目(RC2007057)
南京医科大学科技发展基金重点项目(NMUZ009)
文摘
目的:克隆EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)全长基因,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A,转染真核细胞后获得稳定表达LMP2A的细胞株。方法:采用RT-PCR技术从B95.8细胞中获得EB病毒LMP2A全长基因,克隆到测序载体pMD18-T中,经测序后再亚克隆到逆转录病毒载体pGEZ-Term中,与两辅助病毒载体PHIT456、PHIT60通过Lipofectamine2000共转染包装细胞293T,测定产生的重组逆转录病毒滴度并感染小鼠成纤维细胞L929,经Zeocine筛选后得到稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western blot法检测细胞中LMP2A mRNA和蛋白表达情况。结果:重组逆转录病毒载体pGEZ-LMP2A经测序鉴定正确;转染后上清中病毒的滴度为5×108cfu/L,感染L929细胞后用Zeocine筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Westernblot检测结果表明筛选出的细胞克隆能稳定表达EBV-LMP2A。结论:表达EBV-LMP2A细胞株的构建为蛋白制备与纯化奠定了物质基础,也为后续的EBV相关性疾病疫苗的研究提供了新思路。
关键词
EB病毒
LMP2A
逆转录病毒
重组
Keywords
Epstein-Barr virus
LMP2A
retrovirus
recombinant
分类号
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
R730.3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
勘误:EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定
2
作者
陈云
周锋
孙倍成
刘根焰
王冰
姚堃
机构
南京医科大学微生物与免疫学系江苏省病原重点实验室
南京医科大学
第一附属医院肝脏外科卫生部活体肝移植
重点
实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期274-274,共1页
文摘
因本文作者失误,发表在《细胞与分子免疫学杂志》2009年第25卷第11期第1013-1015页的“EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定”论文中,图2A及图3用错了荧光显微镜和流式细胞术的图像。
关键词
重组逆转录病毒载体
流式细胞术
稳定表达细胞株
荧光显微镜
A基因
《细胞与分子免疫学杂志》
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
G23 [文化科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定
陈云
周锋
孙倍成
刘根焰
王冰
姚堃
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
勘误:EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定
陈云
周锋
孙倍成
刘根焰
王冰
姚堃
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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