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广谱铜绿假单胞菌噬菌体PAPX的生物学特性及生物膜清除能力的研究
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作者 谢萧屹 汪心婕 +4 位作者 戎誉 陈淑华 刘根焰 白莉 汤华民 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第7期945-953,共9页
目的:分离纯化新的铜绿假单胞菌噬菌体。方法:从南京医科大学校园天元湖中分离得到铜绿假单胞菌噬菌体,并对纯化后的噬菌体进行基因组测序和生物学性状解析、体外抑菌曲线绘制及生物膜清除实验。结果:分离出一株铜绿假单胞菌噬菌体,将... 目的:分离纯化新的铜绿假单胞菌噬菌体。方法:从南京医科大学校园天元湖中分离得到铜绿假单胞菌噬菌体,并对纯化后的噬菌体进行基因组测序和生物学性状解析、体外抑菌曲线绘制及生物膜清除实验。结果:分离出一株铜绿假单胞菌噬菌体,将其命名为PAPX,基因组分析表明它与假单胞菌噬菌体Epa12亲缘关系较近(同源性为98%),属于假单胞菌病毒家族Pbunavirus属分支。透射电子显微镜观察显示,它具有直径约90 nm的球形头部和长约50 nm、直径26 nm的收缩性尾部,是一种肌尾噬菌体。生物学性状分析表明,它能裂解24株临床菌株中的17株,表明其对宿主菌有很强的裂解作用。噬菌体的体外抑菌实验显示,该株噬菌体PAPX能在细菌增殖初期就表现出抑制菌株生长的能力。生物膜裂解实验,证明该噬菌体PAPX能有效清除铜绿假单胞菌的生物膜,减少菌株定植。结论:本研究成功分离纯化了一株铜绿假单胞菌噬菌体PAPX,通过生物学特性研究、体外实验及生物膜清除实验的验证,揭示了其在治疗铜绿假单胞菌感染方面具有广阔的临床应用前景。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 噬菌体治疗 生物膜
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Sublytic C5b-9上调KLF5促进Thy-1肾炎大鼠肾小球系膜细胞生成IL-23的作用
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作者 刘玉 应帅 +4 位作者 罗灿 李玉 荣灿 王迎伟 邱文 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第9期1198-1206,共9页
目的:研究亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)上调转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)促进Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)产生炎症因子白细胞介素(interl... 目的:研究亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)上调转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)促进Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)产生炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-23的作用。方法:(1)建立大鼠Thy-1N模型和体外培养大鼠GMC,用Western blot(WB)检查Thy-1N大鼠肾组织和受sublytic C5b-9刺激的GMC中KLF5和IL-23的表达。(2)分别将KLF5过表达质粒(pIRES2-KLF5)或KLF5小干扰质粒(shKLF5)转染GMC,通过实时荧光定量PCR和WB检测KLF5和IL-23的mRNA和蛋白水平。(3)将IL-23全长启动子荧光素酶报告基因质粒(p GL3-IL-23-FL)转染GMC,再给予sublytic C5b-9刺激,或将p GL3-IL-23-FL与pIRES2-KLF5或shKLF5共转染GMC,用荧光素酶报告基因实验检测IL-23启动子活性的变化。(4)将慢病毒(lentivirus,LV)包装的LV-shKLF5和LV-shCTR行肾动脉灌注术导入大鼠肾组织,经小动物脏器可见光三维成像和冰冻切片观察GFP表达,证实LV-shCTR在肾组织中富集效率。之后再复制大鼠Thy-1N,用WB检查肾组织中KLF5和IL-23的蛋白表达。结果:(1)Thy-1N大鼠的肾组织和sublytic C5b-9刺激的GMC中,KLF5和IL-23的表达均显著升高,且KLF5的表达高峰稍早于IL-23。(2)在GMC中过表达或敲低KLF5能分别引起IL-23表达的升高或降低。(3)Sublytic C5b-9刺激或KLF5过表达均可增加GMC中IL-23启动子的活性,但敲低KLF5后可明显下调由sublytic C5b-9刺激GMC诱导的IL-23启动子活性。(4)敲低Thy-1N大鼠肾组织中KLF5的表达后,其肾组织中IL-23的表达水平明显降低。结论:大鼠Thy-1N发病早期,sublytic C5b-9刺激GMC后可通过上调KLF5促进IL-23基因的转录与表达。 展开更多
关键词 THY-1肾炎 亚溶解型C5b-9 肾小球系膜细胞 krüppel样因子5 白细胞介素-23
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系统性红斑狼疮患者外周血T细胞CTLA-4表达及其临床意义 被引量:3
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作者 徐安琪 杨晓帆 +2 位作者 王慧娟 张缪佳 季晓辉 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期62-68,共7页
目的:研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)T细胞中CTLA-4的表达及临床意义。方法:分离正常人和SLE患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),以抗-CD3、抗-CD28刺激培养48 h,刺激培养前后... 目的:研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)T细胞中CTLA-4的表达及临床意义。方法:分离正常人和SLE患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),以抗-CD3、抗-CD28刺激培养48 h,刺激培养前后收取细胞,以流式细胞术(FCM)检测CD4^+和CD8^+T细胞中CTLA-4^+细胞比例,并分析其与SLE疾病活动性指数(SLEDAI)和肾损害的关系。再以ELISA法检测培养上清中游离的CTLA-4水平。结果:SLE患者刺激前的CD4^+和CD8^+T细胞且主要是CD25^+T细胞中CTLA-4^+细胞的比例较正常人显著增高,与SLEDAI呈正相关;而其CD8^+CD28-T细胞中CTLA-4^+细胞比例也显著高于正常人,但与SLEDAI之间无显著相关性;经抗-CD3、抗-CD28抗体刺激后,其CD4^+CD25^+T细胞、CD8^+CD25^+T细胞或CD8^+CD28-T细胞中CTLA-4^+细胞的比例却显著低于正常人,但与SLEDAI之间无显著相关性,仅在活动性SLE患者中有肾损组的CD8^+CD28-T细胞中CTLA-4^+细胞的比例显著低于非肾损组;而且经刺激培养后SLE患者PBMC上清中游离的CTLA-4水平也显著低于正常人。结论:SLE患者新鲜分离的T细胞(CD4^+及CD8^+)中CTLA-4表达异常增高,反映T细胞异常活化和疾病活动;另一方面,SLE患者T细胞又存在CTLA-4诱导性表达障碍,可能与SLE T细胞体外再活化能力减弱有关。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 T细胞 CTLA-4
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Akt1上调FBXO6表达对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响
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作者 高彩月 曹丹丹 +4 位作者 倪思琦 张婧 王迎伟 邱文 赵晨卉 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第6期777-785,共9页
目的:检测胶质瘤组织和细胞中F盒蛋白(F-box protein,FBXO)6的表达及其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响,并探究FBXO6表达的上游调控机制。方法:使用CGGA数据库分析胶质瘤患者肿瘤组织中FBXO6的表达及其与患者预后的相关性。行RT-PCR和West... 目的:检测胶质瘤组织和细胞中F盒蛋白(F-box protein,FBXO)6的表达及其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响,并探究FBXO6表达的上游调控机制。方法:使用CGGA数据库分析胶质瘤患者肿瘤组织中FBXO6的表达及其与患者预后的相关性。行RT-PCR和Western blot检查胶质瘤细胞系(U251、U373和U87)中FBXO6的表达水平,筛选出FBXO6蛋白表达量最高的U87细胞。CCK-8和Transwell实验检测过表达和沉默FBXO6对U87细胞增殖和侵袭的影响。使用U0126(ERK1/2抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂)和Perifosine(Akt1抑制剂)处理U87细胞,Western blot检查ERK1/2、JNK、Akt1的表达和磷酸化水平,之后行RT-PCR和Western blot检测FBXO6的表达变化,CCK-8和Transwell实验检测U87细胞增殖和侵袭能力。使U87细胞过表达FBXO6并给予Perifosine处理,进行RT-PCR、Western blot、CCK-8和Transwell实验,检测FBXO6表达、细胞增殖和侵袭能力。结果:胶质瘤患者癌组织中FBXO6高表达,且表达量与恶性程度相关,并与患者不良预后密切相关。3种胶质瘤细胞系U251、U373和U87均表达FBXO6,以U87细胞表达最为显著。过表达FBXO6基因后U87细胞的增殖和侵袭明显增强,而沉默FBXO6基因后U87细胞的增殖和侵袭明显减弱。Akt1抑制剂可显著下调U87细胞的FBXO6表达,而ERK1/2和JNK抑制剂对FBXO6的表达无明显影响。Akt1抑制剂可显著减弱U87细胞的增殖和侵袭,而过表达FBXO6可拮抗上述效应。结论:胶质瘤细胞中Akt1活化上调FBXO6基因的表达,促进细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 胶质瘤 FBXO6 AKT1 增殖 侵袭
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用sublytic C5b-9刺激上调的KLF5对大鼠肾小球系膜细胞合成IL-36α的影响 被引量:4
5
作者 罗灿 王文博 +7 位作者 吴志皎 刘龙飞 谢梦晓 邱文 张婧 赵聃 季明德 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期367-373,共7页
目的:探讨转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor,KLF5)调控sublytic C5b-9刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)合成促炎因子白细胞介素(interleukin,IL)-36α的作用。方法:首先,培养大鼠GMC,体外用... 目的:探讨转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor,KLF5)调控sublytic C5b-9刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)合成促炎因子白细胞介素(interleukin,IL)-36α的作用。方法:首先,培养大鼠GMC,体外用sublytic C5b-9刺激GMC后,不同时间点行反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检查KLF5、IL-36αmRNA和蛋白水平的变化。接着,构建KLF5的过表达(pIRES2-KLF5)及发夹状小干扰RNA(shKLF5)质粒。将pIRES2-KLF5转染GMC或在shKLF5转染GMC后再用sublytic C5b-9刺激,行RT-PCR和Western blot检查过表达或沉默KLF5基因后对GMC合成IL-36α的影响。同时用荧光素酶报告实验检查过表达或沉默KLF5基因对IL-36α启动子活性的影响。结果:用sublytic C5b-9刺激GMC,能显著上调KLF5和IL-36α的mRNA和蛋白表达,且KLF5的表达时相早于IL-36α。过表达KLF5能上调IL-36α的生成,而沉默KLF5基因后再行sublytic C5b-9刺激,由GMC产生的IL-36α则显著下降。sublytic C5b-9刺激GMC或过表达KLF5基因均可提高IL-36α启动子的活性,而沉默KLF5基因则能明显减低sublytic C5b-9上调IL-36α启动子的活性。结论:KLF5的表达对sublytic C5b-9诱导GMC合成IL-36α有促进作用。 展开更多
关键词 sublytic C5B-9 肾小球系膜细胞(GMC) krüppel样因子5(KLF5) 白细胞介素-36α(IL-36α)
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SP1基因在sublytic C5b-9促大鼠肾小球系膜细胞增殖中的作用
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作者 朱宇峰 蔡梦媛 +7 位作者 刘昌伟 王庆林 张恩瑞 钱宝梅 张志伟 赵聃 邱文 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1499-1505,共7页
目的:检查特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)在Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾组织中和亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)刺激的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMCs)中的表达情况,并探讨SP1表达上调对sub... 目的:检查特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)在Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾组织中和亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9)刺激的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMCs)中的表达情况,并探讨SP1表达上调对sublytic C5b-9促大鼠GMCs增殖的作用。方法:复制大鼠Thy-1N模型,同时用sublytic C5b-9刺激体外培养的大鼠GMCs,分别用real-time PCR和Western blot检查Thy-1N大鼠肾组织(体内)和sublytic C5b-9刺激的大鼠GMCs(体外)中SP1基因的mRNA和蛋白表达水平及其表达时相。与此同时,构建SP1基因的表达质粒(p EGFP-N1/SP1-His)和发夹状小干扰RNA质粒(SP1shRNA,shSP1)。将上述质粒分别转染大鼠GMCs(同时设对照质粒转染组),再给予或不给予sublytic C5b-9刺激。用real-time PCR和Western blot检查SP1表达量,并行CCK-8实验检查GMCs的增殖情况。结果:在Thy-1N大鼠肾组织和sublytic C5b-9刺激的大鼠GMCs中,SP1 mRNA和蛋白表达水平均显著上调,且其体内外表达时相较为一致。体外过表达SP1可显著促进GMCs增殖,而沉默SP1可明显抑制sublytic C5b-9诱导的GMCs增殖反应。结论:Sublytic C5b-9刺激大鼠GMCs后能通过上调SP1表达促进GMCs增殖。 展开更多
关键词 Thy-1肾炎(Thy-1N) 肾小球系膜细胞(GMCs) 增殖 亚溶解型C5b-9(sublytic C5b-9) 特异性蛋白1(SP1)
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SAMD13通过激活ERK1/2对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响
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作者 季明德 廖俊进 +5 位作者 高彩月 倪思琦 高培宇 王迎伟 邱文 赵晨卉 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第12期1649-1656,共8页
目的:检测胶质瘤组织和细胞中无菌α基序结构域蛋白13(sterile alpha motif domain-containing protein 13,SAMD13)的表达情况,并探究SAMD13表达对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响和调控机制。方法:使用GEPIA数据库分析胶质瘤患者癌组织中SA... 目的:检测胶质瘤组织和细胞中无菌α基序结构域蛋白13(sterile alpha motif domain-containing protein 13,SAMD13)的表达情况,并探究SAMD13表达对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响和调控机制。方法:使用GEPIA数据库分析胶质瘤患者癌组织中SAMD13的表达及其与预后的相关性。行RT-PCR和Western blot检测胶质瘤细胞系(U373、U87和U251)中SAMD13的表达情况。构建SAMD13过表达质粒(pIRES2-SAMD13)和SAMD13 shRNA质粒(shSAMD13),转染细胞后行Western blot、CCK-8和Transwell实验,检测过表达和沉默SAMD13基因对于U373细胞增殖和侵袭的影响,同时检查Akt1、ERK1/2和STAT3的表达和磷酸化水平。此外,在转染pIRES2-SAMD13的同时,加入ERK1/2抑制剂(U0126),通过CCK-8和Transwell实验观察其对细胞增殖和侵袭的影响。结果:胶质瘤患者癌组织中SAMD13的表达显著高于癌旁组织,并与患者不良预后密切相关。U373、U87和U251 3种胶质瘤细胞系均表达SAMD13,以U373细胞表达最为显著。在U373细胞中转染pIRES2-SAMD13和shSAMD13,可分别过表达和沉默SAMD13基因,并分别促进和抑制细胞的增殖和侵袭。此外,过表达和沉默SAMD13可分别显著增强和减弱U373细胞中ERK1/2的磷酸化,而对Akt1和STAT3的磷酸化无明显影响。U0126可显著抑制由SAMD13过表达所诱发的U373细胞增殖和侵袭,但对SAMD13的表达无明显影响。结论:胶质瘤组织和细胞中均高表达SAMD13,上调的SAMD13可通过激活ERK1/2促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 胶质瘤 SAMD13 ERK1/2 增殖 侵袭
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TBK1对NLRC4炎症小体的作用及其机制研究
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作者 曾强 张在奎 +1 位作者 孙乃双 陈允梓 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第5期595-603,614,共10页
目的:探究TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)调控核苷结合寡聚化结构域样受体4(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor 4,NLRC4)炎症小体激活的作用及其机制。方法:在鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimuriu... 目的:探究TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)调控核苷结合寡聚化结构域样受体4(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor 4,NLRC4)炎症小体激活的作用及其机制。方法:在鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.T)感染的永生化骨髓巨噬细胞(immortalized bone marrow derived macrophage,IBMDM)中,Western blot检测NLRC4炎症小体激活及其下游分子半胱天冬蛋白酶1(cysteine aspartic acid specific protease 1,Caspase-1)和Gasdermin D(GSDMD)的剪切情况;乳酸脱氢酶检测试剂盒检测细胞培养基上清中乳酸脱氢酶的含量;蛋白质免疫共沉淀实验确定TBK1与NLRC4的相互作用及其具体结构域;细胞免疫荧光实验确定TBK1与NLRC4的空间定位;GST pull-down实验确定TBK1与NLRC4是否存在直接相互作用;凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)寡聚化检测实验验证NLRC4炎症小体组装。构建S.T感染C57BL/6小鼠动物模型,观察小鼠生存情况。涂板计数腹腔灌洗液和肺的细菌负荷量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腹腔灌洗液及血清中的肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白细胞介素(interleukin,IL)-1β的含量;流式细胞术检测腹腔灌洗液中的中性粒细胞比例。结果:在S.T感染的IBMDM中,抑制TBK1可减弱NLRC4炎症小体激活,NLRC4磷酸化水平下降,Caspase-1与GSDMD的剪切减少;TBK1与NLRC4存在相互作用,TBK1的N端与NLRC4的NACHT结构域相互作用;TBK1与NLRC4存在空间上的共定位;TBK1可以磷酸化NLRC4的Ser533位点。S.T动物模型实验显示,抑制TBK1活性可以显著提高小鼠的生存率;减低小鼠腹腔灌洗液和肺中的细菌负荷量;降低血清以及腹腔灌洗液中的IL-1β、TNF-α的表达水平;减少腹腔灌洗液中的中性粒细胞比例。结论:TBK1与NLRC4相互作用,磷酸化NLRC4 Ser533位点,促进NLRC4炎症小体的激活,为治疗相关疾病提供理论依据和新的潜在靶点。 展开更多
关键词 NLRC4炎症小体 TBK1 鼠伤寒沙门氏菌
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轻度认知功能障碍合并腔隙性梗死患者脑白质完整性磁共振扩散张量成像研究 被引量:7
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作者 俞婷婷 尹震宇 +3 位作者 张冰 李卫萍 徐运 周洪 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期805-812,共8页
目的:使用磁共振(magnetic resonance,MR)扩散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)评价轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)合并腔隙性梗死(lacunar infarctions,LI)患者脑白质完整性及其与认知功能的相关性。方法:前... 目的:使用磁共振(magnetic resonance,MR)扩散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)评价轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)合并腔隙性梗死(lacunar infarctions,LI)患者脑白质完整性及其与认知功能的相关性。方法:前瞻性纳入26例MCI患者,行头颅MR检查发现合并陈旧性LI者14人(MCI-LI组),不合并陈旧性LI者12人(MCI-non LI组),同期招募16位健康志愿者作为正常对照(normal control,NC)组。受试者均完成认知功能评估及头颅DTI检查。比较3组间DTI参数差异,采用多元线性逐步回归法确定DTI参数与认知功能的相关性。结果:MCI-LI组较MCI-non LI组扣带束左侧海马、胼胝体束额部、右下额枕束和右颞叶上纵束等白质纤维束的各向异性分数(fractionalanisotropy,FA)值显著降低(P<0.05),而平均扩散率(mean diffusivity,MD)值显著升高(P<0.05)。MCI-LI组扣带束右扣带回FA值与日常生活能力评估量表(Activity of Daily Living Scale,ADL)评分显著相关(B=–50.2,95%CI:–77.7~–22.7,P=0.003)。MCI-LI组左侧丘脑前辐射FA值(B=443.8,95%CI:222.9~664.8,P=0.001)及左下纵束MD值(B=–318.5,95%CI:–534.7~–102.3,P=0.009)与韦氏数字符号测验(Wechsler Digit Symbol Substitution,WDSS)评分显著相关。MCI-LI组左颞叶上纵束FA值与数字广度倒背(Backward Digit Span,BDSP)评分显著相关(B=12.5,95%CI:1.5~23.4,P=0.030)。结论:MCI合并LI患者脑白质完整性较MCI不合并LI患者明显减低,MCI合并LI患者认知功能与部分脑白质DTI参数之间存在相关性。 展开更多
关键词 腔隙性梗死 轻度认知功能障碍 扩散张量成像 白质纤维束
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冠状病毒疫苗研究进展及2019新型冠状病毒疫苗研发展望 被引量:7
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作者 张明顺 吉宁飞 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期151-154,159,共5页
2019新型冠状病毒传染性强,危重症发生率高,亟需有效的防控手段。疫苗接种是保护易感者,阻断传染性疾病传播的重要措施。文章总结了2002年SARS冠状病毒和2012年MERS冠状病毒疫苗灭活疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗研究进展。结合冠状病毒疫... 2019新型冠状病毒传染性强,危重症发生率高,亟需有效的防控手段。疫苗接种是保护易感者,阻断传染性疾病传播的重要措施。文章总结了2002年SARS冠状病毒和2012年MERS冠状病毒疫苗灭活疫苗、亚单位疫苗和DNA疫苗研究进展。结合冠状病毒疫苗研究进展、牛痘苗的历史经验以及2019新型冠状病毒的特点,展望了2019新型冠状病毒疫苗研发的可能途径。 展开更多
关键词 2019新型冠状病毒 灭活疫苗 亚单位疫苗 DNA疫苗
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病理性人格特质维度对抑郁症患者临床疗效的影响 被引量:2
11
作者 刘苏佳 高瑜 +2 位作者 张寅 郑鹏 陈图农 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1382-1385,共4页
目的:探讨抑郁症患者病理性人格特质维度对临床疗效的影响。方法:将2018年4月—2019年4月南京医科大学附属脑科医院心理科60例抑郁症住院患者纳入研究,根据美国《精神障碍诊断与统计手册》第5版(Diagnostic and Statistical Manual of M... 目的:探讨抑郁症患者病理性人格特质维度对临床疗效的影响。方法:将2018年4月—2019年4月南京医科大学附属脑科医院心理科60例抑郁症住院患者纳入研究,根据美国《精神障碍诊断与统计手册》第5版(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders,5th Edition,DSM-5)中的人格问卷(Preliminary Application of DSM-5 Personality Questionnaire,PID-5)评估人格特质维度,药物治疗开始及治疗2周、3周、4周采用汉密尔顿抑郁量表评定患者抑郁严重程度。结果:经过4周治疗,住院患者的抑郁症状好转;DSM-5的5个病理性人格特质维度中,负性情绪、分离、对抗对抑郁症的治疗效果有显著影响(P<0.05)。结论:抑郁症的治疗效果受到部分病理性人格特质维度的影响。 展开更多
关键词 人格特质维度 抑郁 人格障碍替代模式
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沉默GCN5或SOX9基因对Thy-1肾炎大鼠肾组织中TGF-β1生成的影响 被引量:1
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作者 吴志皎 张志伟 +7 位作者 刘龙飞 夏露 谢梦晓 罗灿 邱文 张婧 赵聃 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期360-366,共7页
目的:研究沉默大鼠肾组织中通用控制核苷酸合成5(general control nonderepressible 5,GCN5)基因、性别决定区Y框蛋白9(SRY related HMG box-9,SOX9)基因对Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾组织内转化生长因子-β1(transforming... 目的:研究沉默大鼠肾组织中通用控制核苷酸合成5(general control nonderepressible 5,GCN5)基因、性别决定区Y框蛋白9(SRY related HMG box-9,SOX9)基因对Thy-1肾炎(Thy-1 nephritis,Thy-1N)大鼠肾组织内转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)生成的影响。方法:分别用慢病毒(lentivirus,LV)包装GCN5和SOX9发夹状小干扰RNA(shRNA),即制备LV-shGCN5和LV-shSOX9重组病毒。然后行大鼠肾动脉灌注术将LV-shGCN5和LV-shSOX9分别导入大鼠肾脏,再经尾静脉注射兔抗大鼠胸腺细胞抗血清(anti-thymocyte serum,ATS)复制Thy-1N模型。在注射ATS后3 h,取大鼠肾组织,用RTPCR和Western blot检查各组大鼠肾组织中GCN5和SOX9的mRNA及蛋白表达水平,以验证干扰效果及GCN5、SOX9对TGF-β1产生的影响。结果:利用肾动脉灌注术将LV-shGCN5或LV-shSOX9重组病毒导入大鼠肾组织后,不仅能有效沉默相应的靶基因,而且还能下调TGF-β1的表达。结论:沉默大鼠肾组织中GCN5或SOX9基因后能显著抑制Thy-1N大鼠肾内TGF-β1的生成。 展开更多
关键词 Thy-1肾炎(Thy-1N) 通用控制核苷酸合成5(GCN5) 性别决定区Y框蛋白9(SOX9) 转化生长因子-β1(TGF-β1) 基因沉默
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人PD-L1基因启动子区STAT3结合元件的筛选 被引量:1
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作者 Samjhana Pandey 钱宝梅 +3 位作者 王文博 赵聃 王迎伟 邱文 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1280-1284,1291,共6页
目的:检查信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)对人胶质瘤细胞程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)基因转录和表达的影响,同时筛选PD-L1基因启动区可能的STAT3结合元件... 目的:检查信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)对人胶质瘤细胞程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)基因转录和表达的影响,同时筛选PD-L1基因启动区可能的STAT3结合元件。方法:培养U251细胞,给予STAT3抑制剂(BP-1-102)或DMSO处理,9 h后用流式细胞术检查细胞表面PD-L1蛋白的表达情况。将PD-L1基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-PD-L1-FL)转染U251细胞,再给予BP-1-102或DMSO处理,9 h后检查细胞内荧光素酶活性。将PD-L1基因启动子全长和各截短(pGL3-PD-L1-1~4)荧光素酶报告质粒和STAT3过表达质粒(pCMV-STAT3)共转染HEK293细胞,再测定荧光素酶活性,初步确定STAT3的结合区域。应用生物信息学软件预测PD-L1基因启动子上STAT3的结合元件,并开展结合元件突变实验确定有效性。结果:BP-1-102可明显下调U251细胞中PD-L1的基因转录和蛋白表达。此外,将pGL3-PD-L1-FL、pGL3-PD-L1-1~4和pCMV-STAT3共转染HEK293细胞后,pGL3-PD-L1-4的启动活性显著低于其他质粒,提示STAT3可能结合于PD-L1基因启动子-200~0 nt区域。生物信息学软件预测发现,此区域含有2个STAT3的结合元件,分别位于-194^-184 nt和-135^-125 nt部位。进一步研究揭示突变-194^-184 nt和-135^-125 nt元件均可显著下调pGL3-PD-L1-FL的荧光素酶活性,联合突变更为明显。结论:本研究成功筛查出STAT3在人PD-L1基因启动子上的可能结合区域,为后续研究胶质瘤细胞中STAT3相关的PD-L1基因转录调控奠定了基础。 展开更多
关键词 程序性死亡配体1(PD-L1) 信号转导与转录激活因子3(STAT3) 启动子 转录调控
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HEK 293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定 被引量:1
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作者 李玉 应帅 +6 位作者 葛文 阮玉婷 吴宁霞 王伟民 张婧 邱文 王迎伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第4期445-451,共7页
目的:研究人胚肾293T(HEK 293T,简称293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel⁃like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF... 目的:研究人胚肾293T(HEK 293T,简称293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel⁃like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式和修饰的位点。方法:将构建的Flag⁃TRAF6、HA⁃KLF5、泛素过表达质粒、shTRAF6小干扰质粒和TRAF6 C70A位点突变质粒行不同组合转染293T细胞48 h。用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和免疫印迹(immunoblotting,IB)实验检查TRAF6与KLF5的结合以及KLF5 K63或K48多聚泛素化水平。此外,构建KLF5全部赖氨酸突变的质粒,分别与TRAF6质粒共转染293T细胞。用前述IP/IB检测KLF5 K63连接的多聚泛素化修饰,并确定KLF5 K63泛素化修饰的位点。结果:293T细胞中TRAF6能与KLF5结合;TRAF6过表达和基因沉默或TRA6酶活性缺失能相应上调或下调KLF5 K63的多聚泛素化;KLF5被TRAF6 K63多聚泛素化修饰的位点是其第99位和第100位的赖氨酸。结论:TRAF6能与KLF5相互作用,并对KLF5⁃K99和K100进行K63多聚泛素化修饰。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子受体相关因子6 Krüppel样因子5 K63连接的多聚泛素化修饰 HEK 293T细胞
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大鼠MIP-1α基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其IRF-8结合元件的初步鉴定 被引量:1
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作者 钱宝梅 王文博 +4 位作者 罗灿 张婧 赵聃 王迎伟 邱文 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期10-15,共6页
目的:构建大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK-293T)中过表达干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)对MIP-1α... 目的:构建大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK-293T)中过表达干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)对MIP-1α基因启动活性的影响,同时筛选其可能的IRF-8结合元件。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠MIP-1α基因启动子序列,将MIP-1α基因启动子插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建MIP-1α基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-FL)。将上述p GL3-MIP-1α-FL和本课题组已构建的大鼠IRF-8过表达质粒(pIRES2-IRF-8)共转染HEK-293T细胞,检测细胞内荧光素酶活性,确定IRF-8对MIP-1α基因的启动作用。同时,应用生物信息学软件预测MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件,并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-1~3)。将上述MIP-1α基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和IRF-8过表达质粒共转染HEK-293T细胞,再测定荧光素酶活性,初步确定IRF-8的结合元件。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述pGL3-MIP-1α-FL(-1 400~+94 nt)质粒构建成功。将pGL3-MIP-1α-FL和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,过表达IRF-8可显著增加MIP-1α基因启动子活性。应用生物信息学软件预测发现MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件(-1 157~-1 144nt、-740~-734 nt、-683~-670 nt、-365~-359 nt、-249~-236 nt),并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-MIP-1α-1(-453~+94 nt)、p GL3-MIP-1α-2(-352~+94 nt)和pGL3-MIP-1α-3(-3~+94 nt)。将pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1~3和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,p GL3-MIP-1α-3的启动活性显著低于pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1和pGL3-MIP-1α-2。提示IRF-8可能结合在大鼠MIP-1α基因启动子的-352~-3 nt区域的IRF-8结合元件(-249~-236 nt)上。结论:本实验成功构建了大鼠MIP-1α基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出IRF-8在MIP-1α基因启动子上的可能结合元件,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α) 干扰素调节因子-8(IRF-8) 启动子
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维生素D受体核定位信号的鉴定
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作者 马泽萌 陈允梓 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1073-1079,共7页
目的:确定维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)的核定位信号并验证其功能。方法:通过软件分析及文献调研预测VDR核定位信号,利用点突变试剂盒构建了VDR一系列点突变体,通过蛋白质免疫印迹检测VDR在胞质和胞核里的分布,并结合免疫荧光... 目的:确定维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)的核定位信号并验证其功能。方法:通过软件分析及文献调研预测VDR核定位信号,利用点突变试剂盒构建了VDR一系列点突变体,通过蛋白质免疫印迹检测VDR在胞质和胞核里的分布,并结合免疫荧光观察确定其预测突变点对VDR入核的影响,最后采用实时荧光定量链式聚合酶反应(quantitative real-time PCR,qPCR)检测VDR下游基因的表达,以判断VDR核定位突变体的活性。结果:确定VDR核定位信号序列为49RRSMKRKALFLT61,构建的VDR一系列核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)点突变体在细胞内的表达主要分布在胞质里,维生素D(vitamin D,VD)既不能诱导这些点突变体入核,也不能促进VD下游基因表达。结论:VDR核定位确定信号能有效控制VDR进入细胞核发挥转录因子作用,进而影响其下游基因的表达,为探索VD及VDR相关疾病的治疗提供新平台和思路。 展开更多
关键词 维生素D受体 维生素D 核定位信号 转录调控
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gp96蛋白影响HHV-6 gB糖蛋白的成熟
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作者 马菁菁 许梦原 +2 位作者 李凌云 姚堃 汤华民 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1309-1313,共5页
目的:寻找与糖蛋白96(glycoprotein 96,gp96)相互作用的人疱疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)的病毒因子,并研究其相互作用对病毒感染的影响。方法:通过免疫共沉淀、Western blot以及激光共聚焦显微镜寻找并验证gp96和HHV-6糖蛋白B... 目的:寻找与糖蛋白96(glycoprotein 96,gp96)相互作用的人疱疹病毒6型(human herpesvirus 6,HHV-6)的病毒因子,并研究其相互作用对病毒感染的影响。方法:通过免疫共沉淀、Western blot以及激光共聚焦显微镜寻找并验证gp96和HHV-6糖蛋白B(glycoprotein B,g B)的相互作用;提取外泌体检测gp96过表达对HHV-6 gB成熟的影响。结果:免疫共沉淀实验发现HHV-6 gB和gp96有相互作用;激光共聚焦证实gB和gp96在空间上共定位;Western blot确认gp96过表达会影响g B的成熟。结论:gp96蛋白与HHV-6 gB糖蛋白特异性结合,并且影响HHV-6 g B的成熟。 展开更多
关键词 人疱疹病毒6型 gB糖蛋白 gp96蛋白
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