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靶向Trop-2 CAR-T细胞的制备及其体外对卵巢癌细胞杀伤作用的研究 被引量:3
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作者 徐亚如 周荧 +9 位作者 唐奇 刘振云 黄骁辰 杨婷婷 张慧林 赵薇 蒯兴旺 仇镇宁 朱进 冯振卿 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第6期653-658,共6页
目的:制备靶向人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:运用分子克隆及基因... 目的:制备靶向人滋养层细胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen 2,Trop-2)的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T),观察Trop-2 CAR-T细胞在体外对卵巢癌细胞增殖的影响。方法:运用分子克隆及基因重组技术构建Trop-2 CAR;采用Western blot检测Trop-2 CAR在293T细胞中的表达;CCK-8法检测Trop-2 CAR-T细胞对卵巢癌细胞增殖的影响;ELISA检测细胞因子分泌的变化。结果:酶切鉴定及测序分析结果表明,Trop-2 CAR各基因片段连接正确;Western blot检测结果显示,该质粒能够在293T细胞中有效表达;CCK-8结果显示,制备的Trop-2 CAR-T细胞在体外能明显抑制表达Trop-2的卵巢癌细胞的增殖(P<0.05);ELISA检测结果表明Trop-2 CAR-T细胞与表达Trop-2的卵巢癌细胞共培养后,干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukin-2,IL-2)细胞因子分泌增加(P<0.01)。结论:该研究成功制备了Trop-2 CAR-T细胞,可有效抑制Trop-2表达阳性的卵巢癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体 Trop-2 卵巢癌
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荧光定量PCR检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率 被引量:2
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作者 黄骁辰 蒯兴旺 +9 位作者 杨婷婷 唐奇 李涛 季国忠 赵薇 刘振云 陈渊 仇镇宁 冯振卿 朱进 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期903-908,共6页
目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c-Met CAR病毒与c-Met CAR(GFP)病毒,感染T细胞制备c-Met CAR-T细胞与c... 目的:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法检测c-Met CAR病毒感染T细胞的效率。方法:应用基因重组技术构建c-Met CAR(GFP)逆转录病毒质粒。应用病毒包装技术制备c-Met CAR病毒与c-Met CAR(GFP)病毒,感染T细胞制备c-Met CAR-T细胞与c-Met CAR-T(GFP)细胞。Western blot检测c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)在293T细胞中表达的外源性CD3ζ蛋白。设计特异性引物应用荧光定量PCR检测CAR病毒对T细胞的感染效率,并与流式细胞术的检测结果进行比较。结果:构建c-Met CAR(GFP)质粒,荧光显微镜可观察到c-Met CAR(GFP)质粒在293T细胞上表达绿色荧光蛋白。c-Met CAR和c-Met CAR(GFP)病毒感染的293T细胞可表达外源性CD3ζ蛋白。荧光定量PCR检测c-Met CAR与c-Met CAR(GFP)的感染效率分别为(52.1±1.7)%、(55.9±2.3)%。流式细胞术检测c-Met CAR(GFP)病毒感染效率为(50.7±3.6)%,两种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通过设计特异性引物,应用荧光定量PCR方法能够特异性检测CAR病毒对T细胞的感染效率,该检测方法结果准确、安全,对CAR-T细胞的临床应用具有实用价值。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体 C-MET 荧光定量PCR
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抗MetFab-DOX对人肝癌细胞的多柔比星耐药作用
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作者 章明炯 黄骁辰 +5 位作者 唐奇 陈玲 汤丽娟 杨婷婷 冯振卿 刘政 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第9期931-937,共7页
目的抗MetFab-DOX能抑制肝细胞肝癌HepG2的增殖,而关于抗MetFab-DOX对多柔比星(DOX)耐药肝癌细胞的作用研究较少。文章构建DOX耐药细胞HepG2/DOX并探讨抗MetFab-DOX对该细胞耐药性的影响。方法使用大剂量间歇诱导法构建DOX耐药肝癌细胞... 目的抗MetFab-DOX能抑制肝细胞肝癌HepG2的增殖,而关于抗MetFab-DOX对多柔比星(DOX)耐药肝癌细胞的作用研究较少。文章构建DOX耐药细胞HepG2/DOX并探讨抗MetFab-DOX对该细胞耐药性的影响。方法使用大剂量间歇诱导法构建DOX耐药肝癌细胞模型HepG2/DOX;细胞分为对照组(不加药物)、DOX组(5μg/m L)、抗MetFab-DOX组(含有DOX浓度5μg/m L),采用CCK8法、流式细胞凋亡检测、细胞免疫荧光、划痕愈合实验以及Transwell侵袭实验检测抗MetFab-DOX对HepG2/DOX增殖、凋亡、药物内化以及生物学功能的影响;构建HepG2/DOX荷瘤裸鼠模型并检测抗MetFabDOX处理后对肿瘤体积和形态的影响。结果耐药细胞株HepG2/DOX细胞对DOX以及抗MetFab-DOX的敏感性均明显降低,HepG2细胞与HepG2/DOX细胞的IC50差异均有统计学意义(P<0.05)。不同药物处理24h后,抗MetFab-DOX组细胞凋亡率高于DOX组(19.87%vs 8.09%,P<0.05);当药物作用48 h时,抗MetFab-DOX组细胞凋亡率亦高于DOX组(41.27%vs16.15%,P<0.01)。抗MetFab-DOX组以及DOX组在30 min细胞内化情况没有明显的差异,而在60 min以及120 min时抗MetFab-DOX组DOX荧光强度高于DOX组。抗MetFab-DOX组24 h细胞划痕愈合率(14.46%)低于DOX组(16.80%)和空白对照组(19.88%),差异有统计学意义(P<0.05)。不同药物处理48 h后,与空白对照组细胞划痕愈合率(56.43%)和DOX组(36.96%)相比,抗MetFab-DOX处理后显著下降(22.60%),差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组单个视野平均穿膜细胞数(1043.52个)比较,DOX组(880.51个)和抗MetFab-DOX组(646.18个)明显减少(P<0.05),且抗MetFab-DOX组明显低于DOX组(P<0.05)。药物处理第40天时,抗MetFab-DOX组抑瘤率明显高于DOX组(64.00%vs 35.27%,P<0.05)。对照组中移植瘤组织细胞排列不规则,增殖期肿瘤大小不一,数目占比大。DOX组与对照组相比,细胞增生略有下降。在抗MetFabDOX组中,肿瘤细胞进一步出现明显的皱缩变小,肿瘤细胞数量减少。结论抗MetFab-DOX能有效降低肝细胞肝癌对DOX的耐药性,其机制可能与抗MetFab-DOX能够增加药物细胞中的积聚,诱导细胞凋亡相关。 展开更多
关键词 抗体耦联药物 Met蛋白 多柔比星 肝细胞肝癌 耐药性
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RBM4a基因表达与功能研究进展
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作者 雍红梅 周学义 +1 位作者 赵薇 冯振卿 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1009-1013,共5页
RNA结合基序4(RNA-binding motif 4,RBM4)是一个参与不同细胞生物学过程的RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP),其结构包含两个RNA识别基序和一个CCHC型锌指结构。RBM4表达于多种组织,参与前体m RNA的选择性剪接、翻译控制和RNA沉默... RNA结合基序4(RNA-binding motif 4,RBM4)是一个参与不同细胞生物学过程的RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP),其结构包含两个RNA识别基序和一个CCHC型锌指结构。RBM4表达于多种组织,参与前体m RNA的选择性剪接、翻译控制和RNA沉默等转录后基因调控过程。RBM4具有多种生物学功能,包括维持胚胎和性腺发育、控制昼夜节律及介导细胞分化等。RBM4的表达异常可导致多种疾病的发生,特别是与肿瘤的关系密切,但具体分子机制尚需进一步研究。文章就RBM4的相关研究进展作一综述。 展开更多
关键词 RBM4 选择性剪接 翻译控制 RNA沉默 疾病
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