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狂犬病毒G蛋白基因的克隆、表达及生物学活性鉴定
被引量：
6
1
作者
冯晓敏
卞颖华
+3 位作者
徐伟
刘新建
朱进
管晓虹
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期986-990,共5页
目的:将狂犬病毒G蛋白(rabies virus Gprotein,RVG)基因片段克隆到原核表达载体中,表达并纯化GST融合G蛋白,为研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供诊断抗原。方法:根据GenBank发表的狂犬病病毒CVS-11株G蛋白结构基因序列设计引物,利...
目的:将狂犬病毒G蛋白(rabies virus Gprotein,RVG)基因片段克隆到原核表达载体中,表达并纯化GST融合G蛋白,为研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供诊断抗原。方法:根据GenBank发表的狂犬病病毒CVS-11株G蛋白结构基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增出RVG基因片段,并定向克隆于pGEX-6P-1载体中,构建原核表达载体pGEX-RVG。阳性重组质粒转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过对表达条件的优化,确定可溶性表达的最佳条件。利用谷胱甘肽转移酶(GST)亲和层析法获得纯化的目的蛋白,Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:构建了原核表达载体pGEX-RVG,经IPTG诱导后可表达分子量约36 000融合蛋白,经纯化获得高纯度的目的蛋白。Western blot检测表明重组的融合蛋白有较好的生物学活性。结论:成功表达并纯化狂犬病毒G蛋白,为进一步研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供抗原。
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关键词
狂犬病毒
G蛋白基因
融合蛋白
可溶性表达
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职称材料
重组豹蛙酶的制备及其生物学特性分析
被引量：
5
2
作者
汪楠
唐小军
+6 位作者
熊四平
郑峰
张慧林
高畅
李文杰
董华
朱进
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1034-1038,共5页
目的:通过构建豹蛙酶原核表达载体pColdⅡ-Rap,表达、纯化豹蛙酶并研究其生物学活性。方法:合成豹蛙酶全基因序列,克隆于原核表达载体pColdⅡ中,鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21,用SDS-PAGE和Western blot验证豹蛙酶的表达;大量表达重组...
目的:通过构建豹蛙酶原核表达载体pColdⅡ-Rap,表达、纯化豹蛙酶并研究其生物学活性。方法:合成豹蛙酶全基因序列,克隆于原核表达载体pColdⅡ中,鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21,用SDS-PAGE和Western blot验证豹蛙酶的表达;大量表达重组豹蛙酶融合蛋白(Rap-His),通过MTT法分析Rap-His对乳腺癌细胞增殖的影响。结果:成功构建了pColdⅡ-Rap原核表达载体,经优化表达、纯化的条件,获得纯度较高的Rap-His;MTT法检测结果表明,该融合蛋白在320、160μg/ml时对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率在加药后4 d达到93.49%。结论:本研究制备的重组Rap-His融合蛋白能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖。这为进一步与肿瘤特异抗体偶联,构建肿瘤特异性靶向药物的研究奠定了基础。
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关键词
豹蛙酶
融合蛋白
细胞增殖抑制
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职称材料
题名
狂犬病毒G蛋白基因的克隆、表达及生物学活性鉴定
被引量：
6
1
作者
冯晓敏
卞颖华
徐伟
刘新建
朱进
管晓虹
机构
南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室病理学系
南京医科大学
卫生部
抗体
技术
重点
实验室
生物
技术
系
南京医科大学
第二附属医院消化内科
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第7期986-990,共5页
基金
国家"863"计划资助(2007AA02Z418)
文摘
目的:将狂犬病毒G蛋白(rabies virus Gprotein,RVG)基因片段克隆到原核表达载体中,表达并纯化GST融合G蛋白,为研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供诊断抗原。方法:根据GenBank发表的狂犬病病毒CVS-11株G蛋白结构基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增出RVG基因片段,并定向克隆于pGEX-6P-1载体中,构建原核表达载体pGEX-RVG。阳性重组质粒转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,通过对表达条件的优化,确定可溶性表达的最佳条件。利用谷胱甘肽转移酶(GST)亲和层析法获得纯化的目的蛋白,Western blot对表达的蛋白进行鉴定。结果:构建了原核表达载体pGEX-RVG,经IPTG诱导后可表达分子量约36 000融合蛋白,经纯化获得高纯度的目的蛋白。Western blot检测表明重组的融合蛋白有较好的生物学活性。结论:成功表达并纯化狂犬病毒G蛋白,为进一步研制狂犬病新型ELISA抗体检测试剂盒提供抗原。
关键词
狂犬病毒
G蛋白基因
融合蛋白
可溶性表达
Keywords
rabies virus
G protein gene
fusion protein
soluble expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
重组豹蛙酶的制备及其生物学特性分析
被引量：
5
2
作者
汪楠
唐小军
熊四平
郑峰
张慧林
高畅
李文杰
董华
朱进
机构
南京医科大学
卫生部
抗体
技术
重点
实验室
南京
军区军事医学研究所
南京医科大学
附属妇幼保健院妇产科
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1034-1038,共5页
基金
南京市科技发展项目(ZKX12025)
文摘
目的:通过构建豹蛙酶原核表达载体pColdⅡ-Rap,表达、纯化豹蛙酶并研究其生物学活性。方法:合成豹蛙酶全基因序列,克隆于原核表达载体pColdⅡ中,鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21,用SDS-PAGE和Western blot验证豹蛙酶的表达;大量表达重组豹蛙酶融合蛋白(Rap-His),通过MTT法分析Rap-His对乳腺癌细胞增殖的影响。结果:成功构建了pColdⅡ-Rap原核表达载体,经优化表达、纯化的条件,获得纯度较高的Rap-His;MTT法检测结果表明,该融合蛋白在320、160μg/ml时对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制率在加药后4 d达到93.49%。结论:本研究制备的重组Rap-His融合蛋白能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖。这为进一步与肿瘤特异抗体偶联,构建肿瘤特异性靶向药物的研究奠定了基础。
关键词
豹蛙酶
融合蛋白
细胞增殖抑制
Keywords
ranpirnase
fusion protein
inhibition of cell proliferation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
狂犬病毒G蛋白基因的克隆、表达及生物学活性鉴定
冯晓敏
卞颖华
徐伟
刘新建
朱进
管晓虹
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011
6
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职称材料
2
重组豹蛙酶的制备及其生物学特性分析
汪楠
唐小军
熊四平
郑峰
张慧林
高畅
李文杰
董华
朱进
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
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