日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原的免疫原性研究 被引量：16

1

作者 赵巍 苏川 +4 位作者 吴海玮 沈蕾 王荣芝 陈淑贞 张兆松 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第3期24-27,共4页

用日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa重组抗原（rSj22．6）免疫一批昆明小鼠，获得特异性免疫血清，其与22．6kDa重组抗原和日本血吸虫成虫抗原作免疫印迹试验（Westernblot），结果显示可特异地识别重组抗原和成虫抗原中22．6kDa分子... 用日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa重组抗原（rSj22．6）免疫一批昆明小鼠，获得特异性免疫血清，其与22．6kDa重组抗原和日本血吸虫成虫抗原作免疫印迹试验（Westernblot），结果显示可特异地识别重组抗原和成虫抗原中22．6kDa分子，而正常鼠血清则不能识别。实验中，血清经去除抗大肠杆菌抗体的处理后，其与大肠杆菌的非特异性反应条带被去除，特异性反应的条带则增强。 展开更多

关键词 日本血吸虫 重组抗原 单特异免疫血清

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K型和D型CpG寡脱氧核苷酸对猪外周血单个核细胞免疫刺激活性的比较研究 被引量：2

2

作者 朱鸿飞 李光富 +3 位作者 朱建中 卢春 邵国清 张兆松 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期542-544,553,共4页

目的:比较K、D两型CpG寡脱氧核苷酸(CpG 0DN)对猪外周血单个核细胞(PBMC)免疫刺激活性的差异.方法:用人工合成的@K型和D型两类CpG 0DN和不含CpG基元的对照0DN D48分别刺激已分离的猪PBMC,3H-TdR掺入法测定每分闪烁次数(cpm)值,计算刺激... 目的:比较K、D两型CpG寡脱氧核苷酸(CpG 0DN)对猪外周血单个核细胞(PBMC)免疫刺激活性的差异.方法:用人工合成的@K型和D型两类CpG 0DN和不含CpG基元的对照0DN D48分别刺激已分离的猪PBMC,3H-TdR掺入法测定每分闪烁次数(cpm)值,计算刺激指数(SI).双抗体夹心ELISA法测定活化细胞上清中IFN-γ和IL-2表达水平.结果:D和K型CpGODN对猪PBMC增殖均具有较强刺激作用,K型的增殖效应高于D型.含'GTCGTT'基元的2006作用尤为显著,但不能有效刺激猪PBMC分泌IFN-γ和IL-2.D型刺激增殖效应低于K型,但能有效地促进猪PBMC分泌IFN-γ和IL-2.结论:K型和D型CpG 0DN在刺激猪PBMC增殖及其分泌IFN-γ、IL-2的水平有所不同. 展开更多

关键词 CPG寡脱氧核苷酸 CPG基元 IFN—γ IL—2 猪

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免疫平衡调理剂抗疲劳的实验研究 被引量：5

3

作者 王祝鸣 李芸茜 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期325-327,共3页

目的 :了解免疫平衡调理剂对小鼠的抗疲劳效果。方法 :选用昆明种小鼠 ,设免疫平衡调理剂低、中、高 (1.7、5 .0、10 0ml/kg) 3个剂量组和 1个空白对照组 ,分别观察小鼠游泳试验及生化指标 (血清尿素氮、乳酸、肝糖原 )。 结果 :各受... 目的 :了解免疫平衡调理剂对小鼠的抗疲劳效果。方法 :选用昆明种小鼠 ,设免疫平衡调理剂低、中、高 (1.7、5 .0、10 0ml/kg) 3个剂量组和 1个空白对照组 ,分别观察小鼠游泳试验及生化指标 (血清尿素氮、乳酸、肝糖原 )。 结果 :各受试物组小鼠负重游泳时间均比对照组延长 ,尤以中、高剂量组明显 (P <0 .0 1)。各受试物组血中尿素氮均低于对照组 ,但以高剂量组与之差异明显 (P <0 .0 5 ) ,各剂量受试物组血乳酸含量均低于对照组 ,尤以中、高剂量组差异具极显著性 (P <0 .0 1)。各受试物组小鼠的肝糖原均高于对照组 ,中、高剂量组与之对照的差异为显著及极显著 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,生化指标与疲劳试验的结果相符。结论 :免疫平衡调理剂具有明显的抗疲劳作用。 展开更多

关键词 免疫平衡调理剂 疲劳试验 抗疲劳 实验研究

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日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30引起小鼠足垫反应的实验研究

4

作者 宋建华 傅海京 +7 位作者 阿依肯 邵渊 龚辉 薛磊 金玉 钟石根 冯振卿 管晓虹 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CSCD 2000年第5期377-378,共2页

目的　探讨日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30引起小鼠足垫反应的实验条件。方法　对 3个因素 2个水平 (尾蚴感染数 10条 /鼠和 5 0条 /鼠 ,NP30注射剂量 1μg/鼠和 10 μg/鼠 ,感染后 4周和 7周 )应用正交设计进行小鼠足垫试验 ,于NP3... 目的　探讨日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30引起小鼠足垫反应的实验条件。方法　对 3个因素 2个水平 (尾蚴感染数 10条 /鼠和 5 0条 /鼠 ,NP30注射剂量 1μg/鼠和 10 μg/鼠 ,感染后 4周和 7周 )应用正交设计进行小鼠足垫试验 ,于NP30注射后不同时间观察足垫肿胀情况。结果　正交设计结果的方差分析表明 ,NP30在注射后 12h的结果有显著性差异。结论　NP30引起的足垫肿胀为迟发型变态反应。 展开更多

关键词 日本血吸虫 足垫反应 单克隆抗独特型抗体

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体外筛选对鸡具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸 被引量：8

5

作者 朱鸿飞 朱建中 +4 位作者 李光富 卢春 邵国青 范红结 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期83-86,共4页

分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对SPF鸡全血 ,经低速离心分离的外周血单个核细胞(PBMC)和脾脏细胞 ,用淋巴细胞分离液分离的PBMC和脾脏细胞进行刺激 ,用3 H TdR掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同培养温度和细胞浓度下... 分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对SPF鸡全血 ,经低速离心分离的外周血单个核细胞(PBMC)和脾脏细胞 ,用淋巴细胞分离液分离的PBMC和脾脏细胞进行刺激 ,用3 H TdR掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同培养温度和细胞浓度下的转化效果 ,从而建立了适用于大批量筛选对鸡具有免疫刺激活性CpGODN的淋巴细胞转化方法。进一步用该方法筛选自行设计合成的 38条ODN。结果表明 ,用低速离心法分离的鸡PBMC ,在细胞含量为10 7mL-1、 37℃、 5 %CO2 条件下 ,经CpGODN刺激 6 4～ 6 6h后 ,可以得到稳定的高效转化 ;不含CpG模体的ODN不具有免疫刺激活性 ;CpGODN 10、 11和 14具有最佳的免疫刺激活性 ,刺激指数大于 10。 展开更多

关键词 鸡 CPG寡脱氧核苷酸 CpG模体 淋巴细胞转化 免疫刺激活性

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Sj28GST基因克隆和高效表达产物的纯化 被引量：4

6

作者 李光富 张兆松 +6 位作者 王新军 李春玲 王勇 季旻 刘丰 蔡晓萍 朱翔 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期15-18,共4页

目的　从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中克隆 2 8kDa谷胱甘肽 -S -转移酶 (Sj2 8GST)基因 ,获得用于疫苗和T细胞表位研究的高纯度重组融合蛋白 2 8GST -TRX。方法　应用引物特异性PCR技术 ,从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中扩... 目的　从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中克隆 2 8kDa谷胱甘肽 -S -转移酶 (Sj2 8GST)基因 ,获得用于疫苗和T细胞表位研究的高纯度重组融合蛋白 2 8GST -TRX。方法　应用引物特异性PCR技术 ,从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中扩增Sj2 8GST基因 ,经琼脂糖凝胶电泳结合碱基序列分析鉴定后 ,采用定向克隆技术构建Sj2 8GST -TRX融合蛋白重组表达载体并诱导其在大肠杆菌BL2 1(DE3)的表达 ,用Western -blotting测定以融合蛋白方式表达的Sj2 8GST的免疫原性 ,通过包涵体纯化结合Ni+柱亲和层析获得高纯度重组融合蛋白。结果　Sj2 8GSTPCR产物为约 6 4 0bp ,其碱基序列 (6 33bp)和推导的氨基酸序列 (2 11aa)与GenBank报道一致 ;获得了Sj2 8GST -TRX重组质粒 ;2 8GST -TRX融合蛋白在大肠杆菌以包涵体形式高效表达 ;在分子量为约 4 3kDa处有一能与羊抗Sj2 8GST抗体产生特异性反应的含 2 8GST融合蛋白条带 ;包涵体纯化法结合Ni+ 亲和层析可获得高纯度的重组融合蛋白。结论　获得到了日本血吸虫中国大陆株 2 8GST分子的全长基因和高纯度重组 2 8GST -TRX融合蛋白 ,该融合蛋白具有天然Sj2 8GST免疫原性。 展开更多

关键词 Sj28GST 基因克隆 高效表达产物 纯化 日本血吸虫 28kDa谷胱甘肽-S-转移酶

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肝细胞癌患者组织中MAGE-1基因的原核表达及鉴定 被引量：4

7

作者 徐凛峰 朱进 +1 位作者 焦永军 张建平 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期534-537,共4页

目的:克隆MAGE-1基因并对其进行原核表达及鉴定。方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MAGE-1基因片段,将该片段克隆在原核表达载体PET-32a中,重组克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的蛋白以His亲和柱层析纯化... 目的:克隆MAGE-1基因并对其进行原核表达及鉴定。方法:通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)从原发性肝癌的细胞中扩增MAGE-1基因片段,将该片段克隆在原核表达载体PET-32a中,重组克隆转化大肠杆菌BL21(DE3),表达的蛋白以His亲和柱层析纯化,并用Dot-blot和Western-blot对其进行鉴定。结果:经RT-PCR扩增出930bp基因片段,经测序分析后的DNA序列与Genbank中的报道序列同源程度达98%,构建含重组表达载体PET32-M1的工程菌,经IPTG诱导表达、纯化,MAGE-1蛋白浓度为0.48mg/ml,经Dot-blot和Western-blot检测,纯化蛋白可以与商业化的驴抗MAGE-1的多抗结合。结论:成功扩增了肝细胞肝癌中的MAGE-1基因全长cDNA并对其进行了原核表达与鉴定,为进一步研究MAGE-1基因的功能和研制有临床价值的全人抗MAGE-1抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 人肝细胞癌(HCC) MAGE-1 原核表达

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单克隆抗独特型抗体NP30对血吸虫虫卵肉芽肿细胞凋亡的影响 被引量：1

8

作者 王聪 冯振卿 +4 位作者 彭韬 李玉华 仇镇宁 冷静 管晓虹 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期310-312,F002,共4页

目的:探索日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对血吸虫虫卵肉芽肿细胞凋亡的影响。方法:BALB/c小鼠随机分为两组,实验组腹腔注射NP30主动免疫3次,对照组腹腔注射生理盐水,分别在尾蚴攻击感染后第39、49、64、108、112天处死,应用透射电... 目的:探索日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对血吸虫虫卵肉芽肿细胞凋亡的影响。方法:BALB/c小鼠随机分为两组,实验组腹腔注射NP30主动免疫3次,对照组腹腔注射生理盐水,分别在尾蚴攻击感染后第39、49、64、108、112天处死,应用透射电镜观察肝虫卵肉芽肿细胞凋亡的形态改变,流式细胞术(FCM)和末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测虫卵肉芽肿凋亡细胞。结果:透射电镜观察虫卵肉芽肿细胞有凋亡小体形成;经FCM和TUNEL检测实验组虫卵肉芽肿细胞凋亡明显多于对照组。结论:细胞凋亡在日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成、细胞转化过程中起着重要作用。NP30抗病免疫作用的机制之一是促进虫卵肉芽肿细胞的凋亡。 展开更多

关键词 日本血吸虫病 抗独特型抗体 虫卵肉芽肿 细胞凋亡

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prk基因非融合表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1

9

作者 江汕 冯振卿 +3 位作者 江千里 李玉华 徐玮 管晓虹 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期341-343,共3页

目的:构建prk基因的非融合表达载体,并诱导表达。方法:PCR扩增并回收prk基因片段,将其与亚克隆载体pMD18-T重组,通过蓝/白斑筛选、酶谱分析和序列测定鉴定出重组质粒,然后从该重组质粒上切下prk基因片段,再克隆至非融合表达载体pBV220中... 目的:构建prk基因的非融合表达载体,并诱导表达。方法:PCR扩增并回收prk基因片段,将其与亚克隆载体pMD18-T重组,通过蓝/白斑筛选、酶谱分析和序列测定鉴定出重组质粒,然后从该重组质粒上切下prk基因片段,再克隆至非融合表达载体pBV220中,酶谱分析鉴定出正向重组质粒,诱导含有正向重组质粒的宿主菌表达蛋白,提取全菌总蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果:成功构建并筛选出pBV220正向重组质粒,经热诱导表达,得到一可溶性的相对分子质量为65ku的重组蛋白。结论:pBV220-prk表达载体的成功构建和表达,说明扩增所得的基因具有正确的阅读框架,使获得天然Prk蛋白成为可能,为进一步研究prk基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 prk基因 激酶 基因表达 非融合蛋白

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日本血吸虫抗独特型抗体NP30重链6×CDR3/IL-2融合基因构建及表达 被引量：1

10

作者 徐玮 冯振卿 +4 位作者 朱进 仇镇宁 李芸茜 江汕 管晓虹 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期299-301,共3页

目的:构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区6×CDR3基因/IL-2融合基因,以观察其对动物的抗血吸虫感染保护作用。方法:通过PCR方法体外扩增NP30 6×V_HCDR3和IL-2基因,经测序后先后重组入原核表达质粒pET-28a(+)相应... 目的:构建日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30重链可变区6×CDR3基因/IL-2融合基因,以观察其对动物的抗血吸虫感染保护作用。方法:通过PCR方法体外扩增NP30 6×V_HCDR3和IL-2基因,经测序后先后重组入原核表达质粒pET-28a(+)相应的位点上,将构建正确的6×V_HCDR3/IL-2-pET-28a(+)表达质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达。结果:构建的6×V_HCDR3/IL-2融合基因中,6×V_HCDR3和IL-2序列均正确,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析分子质量约为30ku,表达量约占菌体总蛋白的20％。结论:成功构建并原核表达了NP30 6×V_HCDR3/IL-2融合基因。 展开更多

关键词 日本血吸虫 融合基因 抗体 抗独特型 白细胞介素-2

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抗结直肠癌缺陷蛋白合成肽单克隆抗体的制备与初步鉴定 被引量：1

11

作者 马利民 吴文溪 +1 位作者 管晓虹 仇镇宁 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2000年第4期263-265,共3页

目的　制备针对结直肠癌缺陷 ( deleted colorectal carcinom a,DCC)蛋白抗原决定簇多肽的单克隆抗体。方法　用合成的 DCC蛋白抗原决定簇多肽 (氨基酸序列从 195～ 2 0 4)为抗原 ,免疫 BAL B/c小鼠 ,经细胞融合 ,有限稀释法筛选出能分... 目的　制备针对结直肠癌缺陷 ( deleted colorectal carcinom a,DCC)蛋白抗原决定簇多肽的单克隆抗体。方法　用合成的 DCC蛋白抗原决定簇多肽 (氨基酸序列从 195～ 2 0 4)为抗原 ,免疫 BAL B/c小鼠 ,经细胞融合 ,有限稀释法筛选出能分泌抗 DCC合成肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,并对单克隆抗体进行了初步鉴定。结果　细胞融合率 75 % ,经 3次亚克隆 ,最后保留一株能稳定分泌抗 DCC合成肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ( NJ99)。免疫印迹及组织定位显示该单克隆抗体特异性高、亲和力强。结论　抗 DCC合成肽单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立为深入研究 展开更多

关键词 单克隆抗体 结直肠肿瘤 免疫组织化学 制备

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单细胞凝胶电泳技术操作方法的改进 被引量：7

12

作者 刘丰 张正东 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1999年第4期326-327,共2页

目的为处理大批量样品，对单细胞凝胶电泳技术中的一些操作步骤进行了简化，并对操作中易出现的问题进行了总结。方法应用在１张载玻片上滴注２种不同的靶细胞等方法以提高制片速度。结果通过观察对照组和丙烯腈染毒组，发现后者ＤＮＡ... 目的为处理大批量样品，对单细胞凝胶电泳技术中的一些操作步骤进行了简化，并对操作中易出现的问题进行了总结。方法应用在１张载玻片上滴注２种不同的靶细胞等方法以提高制片速度。结果通过观察对照组和丙烯腈染毒组，发现后者ＤＮＡ受到了明显的损伤。结论改进的方法并不影响实验结果的正确性，且适用于现场人群的大量调查。 展开更多

关键词 DNA损伤 DNA修复 单细胞凝胶电泳

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