目的扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE-A9(melanom a antigen A9)cDNA,构建原核表达载体,制备抗MAGE-A9单抗,观察其在肝细胞癌中的定位。方法从人肝癌组织提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-A9cDNA,插入载体pMD18-T中,测序正确后,构建重组...目的扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE-A9(melanom a antigen A9)cDNA,构建原核表达载体,制备抗MAGE-A9单抗,观察其在肝细胞癌中的定位。方法从人肝癌组织提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-A9cDNA,插入载体pMD18-T中,测序正确后,构建重组表达载体pBAD/gI-II-MAGE-A9,转化大肠杆菌TOP10株进行表达。重组蛋白经L-Arabinose诱导表达纯化后,制备抗MAGE-A9单抗,免疫组化检测MAGE-A9在肝细胞癌中的表达和定位。结果获得AGE-A9cDNA,测序结果与GenBank一致。成功构建表达载体,表达可溶重组蛋白,SDS-PAGE分析其相对分子质量为35Kd。获得抗MAGE-A9单抗,MAGE-A9在肝细胞癌中的阳性表达率为21%(8/39),主要表达于胞浆,未见肿瘤异质性,统计学分析MAGE-A9的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性。结论有相当部分肝癌患者的肿瘤表达MAGE-A9抗原,且其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性,MAGE-A9可能成为肝癌特异性免疫治疗的靶点。展开更多
文摘目的扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE-A9(melanom a antigen A9)cDNA,构建原核表达载体,制备抗MAGE-A9单抗,观察其在肝细胞癌中的定位。方法从人肝癌组织提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-A9cDNA,插入载体pMD18-T中,测序正确后,构建重组表达载体pBAD/gI-II-MAGE-A9,转化大肠杆菌TOP10株进行表达。重组蛋白经L-Arabinose诱导表达纯化后,制备抗MAGE-A9单抗,免疫组化检测MAGE-A9在肝细胞癌中的表达和定位。结果获得AGE-A9cDNA,测序结果与GenBank一致。成功构建表达载体,表达可溶重组蛋白,SDS-PAGE分析其相对分子质量为35Kd。获得抗MAGE-A9单抗,MAGE-A9在肝细胞癌中的阳性表达率为21%(8/39),主要表达于胞浆,未见肿瘤异质性,统计学分析MAGE-A9的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性。结论有相当部分肝癌患者的肿瘤表达MAGE-A9抗原,且其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性,MAGE-A9可能成为肝癌特异性免疫治疗的靶点。
