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题名适体SELEX筛选中单链DNA的制备
被引量：6
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作者
王丽
贺江
王耘
雷兆静
屠康
刘贤进
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机构
安徽科技学院
江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室
南京农业大学食品科技院
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出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2011年第5期1133-1136,共4页
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基金
江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(10)236]
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文摘
探讨建立适体SELEX筛选中单链DNA(ssDNA)的制备方法,生成适体筛选的次级库,为适体SELEX筛选奠定基础。将PCR扩增后带生物素标记的双链DNA(dsDNA)连接在链霉亲和素标记的凝胶上,用NaOH变性解链制备ssDNA。利用荧光法分析dsDNA与凝胶结合所需的时间及NaOH对生物素与链霉亲和素标记凝胶结合的影响,在优化的试验条件下制备ssDNA,用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳对其产物进行鉴定。结果显示:生物素标记的dsDNA与链霉亲和素标记的凝胶结合的时间以40 min为佳,0.01 mol/L、0.10 mol/L和1.00 mol/L的NaOH均不影响生物素与链霉亲和素标记凝胶的结合;在优化试验条件下制备的产物为ssDNA。表明采用上述方法制备ssDNA,操作简单、方便,所需时间短,适用于适体SELEX筛选中次级库的生成。
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关键词
适体
SELEX
双链DNA
单链DNA
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Keywords
aptamer
systematic evolution of ligand by exponential enrichment
dsDNA
ssDNA
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分类号
Q524
[生物学—生物化学]
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