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基于环介导等温扩增技术检测橡树疫霉菌
被引量:
21
1
作者
戴婷婷
陆辰晨
+2 位作者
沈浩
王源超
郑小波
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期23-28,共6页
应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色判定的简单、快速和灵敏的橡树疫霉菌(Phytophthora ramorum)检测方法。以ITS为靶序列对橡树疫霉菌的分子检测存在无法区分近似种的问题,笔者...
应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色判定的简单、快速和灵敏的橡树疫霉菌(Phytophthora ramorum)检测方法。以ITS为靶序列对橡树疫霉菌的分子检测存在无法区分近似种的问题,笔者在橡树疫霉菌的基因组研究中,发现了PrA3aPro类转座子序列。生物信息学分析表明,该序列非常适合作为大豆疫霉分子检测的靶标。利用LAMP技术,以PrA3aPro为靶序列,设计LAMP特异性引物,建立LAMP反应体系与条件,并进行灵敏度和特异性试验。结果表明:整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测试验结果。在等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,然后经3种方法验证扩增结果:1)浊度仪验证浊度变化;2)琼脂糖凝胶电泳验证;3)在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化判定。特异性试验中,在橡树疫霉菌株中能够产生浊度曲线,扩增到梯形条带,同时HNB显色观察到天蓝色的阳性反应,而在其他疫霉、腐霉和真菌供试菌株中均没有观察到这些现象。在灵敏度试验中,PrA3aPro-LAMP技术最低检测限为1 ng.μL-1。该方法的建立为橡树疫霉菌的检疫及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。
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关键词
橡树疫霉菌
环介导等温扩增
PrA3aPro
羟基萘酚蓝(HNB)
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职称材料
大豆茎褐腐病菌环介导等温扩增检测技术的建立
被引量:
2
2
作者
吴旭东
陆辰晨
+4 位作者
沈浩
吴翠萍
张海峰
王源超
郑小波
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第4期568-574,共7页
[目的]应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立基于颜色判定的简便、快速和灵敏的大豆茎褐腐病菌[Phialophora gregata f.sp.sojae(PGS)]检测方法。[方法]利用LAMP技术,以ITS为靶序列,设计了4条...
[目的]应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立基于颜色判定的简便、快速和灵敏的大豆茎褐腐病菌[Phialophora gregata f.sp.sojae(PGS)]检测方法。[方法]利用LAMP技术,以ITS为靶序列,设计了4条特异性的LAMP引物和2条环引物,在此基础上建立了检测大豆茎褐腐病菌的LAMP体系。[结果]整个检测过程仅需1 h就可通过肉眼直接目测试验结果。在等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化可以判断PGS的存在与否。特异性试验中,大豆茎褐腐病菌菌株DNA扩增后HNB呈天蓝色的阳性反应,而在其他大豆常见病害的供试菌株中均呈紫色的阴性反应。在灵敏度试验中,ITS-LAMP技术最低检测限为10 pg·μL-1,对于进口大豆残体样本中PGS的检测灵敏度为每10 g大豆植株残体50个孢子。[结论]该方法的建立为检疫性病害大豆茎褐腐病菌的检测提供了新的技术平台,符合我国口岸对大豆茎褐腐病菌快速检测的迫切需要。
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关键词
大豆茎褐腐病菌
环介导等温扩增
ITS
羟基萘酚蓝(HNB)
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职称材料
中国大豆产业技术需求分析(英文)
被引量:
2
3
作者
杨光明
孔凡杰
+14 位作者
吴存祥
宋雯雯
胡国华
司伟
刘丽君
王源超
胡耀辉
陈海涛
张孟臣
年海
周新安
郭泰
傅连舜
魏新民
韩天富
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期411-421,共11页
为了解中国大豆产业的技术需求,有针对性地开展科学研究,国家大豆产业技术体系于2008、2009和2010年,采用问卷调查方式对北方春大豆区、黄淮海流域夏大豆区和南方多作大豆区共22个省(市、区)的2 787个大豆产业技术用户进行了技术需求调...
为了解中国大豆产业的技术需求,有针对性地开展科学研究,国家大豆产业技术体系于2008、2009和2010年,采用问卷调查方式对北方春大豆区、黄淮海流域夏大豆区和南方多作大豆区共22个省(市、区)的2 787个大豆产业技术用户进行了技术需求调查,将技术需求划分为大豆新品种、栽培与土壤肥料技术、病虫草害防控技术、农业机械及使用技术、产后处理与加工技术和市场信息服务6个研究领域,并明确了各领域技术发展的优先序,将高产大豆新品种培育,大豆栽培和施肥技术,大豆田难除杂草综合防治技术,适合各地条件的播种、收获、耕整地机械,大豆酶工程技术和降低大豆生产成本的措施列为优先研究方向。在采用参与式评估方法分析各主产区生产限制因素的基础上,提出了促进中国大豆产业发展的措施。
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关键词
中国
大豆产业
限制因素
技术需求
优先序
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职称材料
马铃薯与致病疫霉互作研究进展与展望
被引量:
8
4
作者
田峰奇
王路遥
董莎萌
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期89-110,126,共23页
马铃薯是重要的粮食作物,由致病疫霉侵染引发的晚疫病长期严重制约马铃薯产业的健康发展,因此,国内外均将马铃薯晚疫病列为重大病害。目前,抗病品种选育栽培、晚疫病预测预报和化学防治等相结合的晚疫病综合防治手段已得到普遍推广,但...
马铃薯是重要的粮食作物,由致病疫霉侵染引发的晚疫病长期严重制约马铃薯产业的健康发展,因此,国内外均将马铃薯晚疫病列为重大病害。目前,抗病品种选育栽培、晚疫病预测预报和化学防治等相结合的晚疫病综合防治手段已得到普遍推广,但晚疫病局部大流行在全世界范围内仍时有发生,给粮食安全和生态安全带来巨大挑战。本文回顾了我国晚疫病的部分研究历史,集中关注致病疫霉与寄主的互作机制领域,梳理了近年来关于致病疫霉侵入机理、效应蛋白毒力功能、病原菌变异规律、马铃薯抗病机理等方面的重要研究结果并展望未来主要的研究方向,以期为晚疫病基础研究和防治技术革新提供参考。
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关键词
马铃薯晚疫病
致病疫霉
组学
致病性
抗病性
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职称材料
题名
基于环介导等温扩增技术检测橡树疫霉菌
被引量:
21
1
作者
戴婷婷
陆辰晨
沈浩
王源超
郑小波
机构
南京农业大学植物保护学院卵菌与真菌分子生物学实验室
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期23-28,共6页
基金
国家公益性行业(农业)科研专项(200903004)
国家863计划项目(2012AA101501)
农业部948项目(2010-C17)
文摘
应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色判定的简单、快速和灵敏的橡树疫霉菌(Phytophthora ramorum)检测方法。以ITS为靶序列对橡树疫霉菌的分子检测存在无法区分近似种的问题,笔者在橡树疫霉菌的基因组研究中,发现了PrA3aPro类转座子序列。生物信息学分析表明,该序列非常适合作为大豆疫霉分子检测的靶标。利用LAMP技术,以PrA3aPro为靶序列,设计LAMP特异性引物,建立LAMP反应体系与条件,并进行灵敏度和特异性试验。结果表明:整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测试验结果。在等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,然后经3种方法验证扩增结果:1)浊度仪验证浊度变化;2)琼脂糖凝胶电泳验证;3)在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化判定。特异性试验中,在橡树疫霉菌株中能够产生浊度曲线,扩增到梯形条带,同时HNB显色观察到天蓝色的阳性反应,而在其他疫霉、腐霉和真菌供试菌株中均没有观察到这些现象。在灵敏度试验中,PrA3aPro-LAMP技术最低检测限为1 ng.μL-1。该方法的建立为橡树疫霉菌的检疫及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。
关键词
橡树疫霉菌
环介导等温扩增
PrA3aPro
羟基萘酚蓝(HNB)
Keywords
Phytophthora ramorum
loop-mediated isothermal amplification (LAMP)
PrA3aPro
hydroxynaphthol blue (HNB)
分类号
Q93-331 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
大豆茎褐腐病菌环介导等温扩增检测技术的建立
被引量:
2
2
作者
吴旭东
陆辰晨
沈浩
吴翠萍
张海峰
王源超
郑小波
机构
南京农业大学植物保护学院卵菌与真菌分子生物学实验室
江苏出入境检验检疫局
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第4期568-574,共7页
基金
国家863计划项目(2012AA101501)
国家质检总局项目(2012IK278)
文摘
[目的]应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立基于颜色判定的简便、快速和灵敏的大豆茎褐腐病菌[Phialophora gregata f.sp.sojae(PGS)]检测方法。[方法]利用LAMP技术,以ITS为靶序列,设计了4条特异性的LAMP引物和2条环引物,在此基础上建立了检测大豆茎褐腐病菌的LAMP体系。[结果]整个检测过程仅需1 h就可通过肉眼直接目测试验结果。在等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,根据HNB的颜色变化可以判断PGS的存在与否。特异性试验中,大豆茎褐腐病菌菌株DNA扩增后HNB呈天蓝色的阳性反应,而在其他大豆常见病害的供试菌株中均呈紫色的阴性反应。在灵敏度试验中,ITS-LAMP技术最低检测限为10 pg·μL-1,对于进口大豆残体样本中PGS的检测灵敏度为每10 g大豆植株残体50个孢子。[结论]该方法的建立为检疫性病害大豆茎褐腐病菌的检测提供了新的技术平台,符合我国口岸对大豆茎褐腐病菌快速检测的迫切需要。
关键词
大豆茎褐腐病菌
环介导等温扩增
ITS
羟基萘酚蓝(HNB)
Keywords
Phialophora gregata f. sp. sojae
loop-mediated isothermal amplification
ITS
hydroxynaphthol blue ( HNB )
分类号
Q93-331 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
中国大豆产业技术需求分析(英文)
被引量:
2
3
作者
杨光明
孔凡杰
吴存祥
宋雯雯
胡国华
司伟
刘丽君
王源超
胡耀辉
陈海涛
张孟臣
年海
周新安
郭泰
傅连舜
魏新民
韩天富
机构
中国
农业
科
学院
农业
经济与发展研究所
中国
农业
科
学院
作物科学研究所国家大豆产业技术研发中心
黑龙江省绥化市北林区
农业
技术推广中心
黑龙江省农垦科研育种中心
中国
农业
大学
经济管理
学院
黑龙江省
农业
科
学院
大豆研究所
南京农业大学植物保护学院卵菌与真菌分子生物学实验室
吉林
农业
大学
食品科学与工程
学院
东北
农业
大学
工程
学院
河北省农林科
学院
粮油作物研究所
华南
农业
大学
农
学院
中国
农业
科
学院
油料作物研究所
黑龙江省
农业
科
学院
佳木斯分院
铁岭市
农业
科
学院
黑龙江省
农业
科
学院
黑河分院
出处
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期411-421,共11页
基金
China Agriculture Research System(CARS-04)
Chinese Academy of Agricultural Sciences Innovation Project
文摘
为了解中国大豆产业的技术需求,有针对性地开展科学研究,国家大豆产业技术体系于2008、2009和2010年,采用问卷调查方式对北方春大豆区、黄淮海流域夏大豆区和南方多作大豆区共22个省(市、区)的2 787个大豆产业技术用户进行了技术需求调查,将技术需求划分为大豆新品种、栽培与土壤肥料技术、病虫草害防控技术、农业机械及使用技术、产后处理与加工技术和市场信息服务6个研究领域,并明确了各领域技术发展的优先序,将高产大豆新品种培育,大豆栽培和施肥技术,大豆田难除杂草综合防治技术,适合各地条件的播种、收获、耕整地机械,大豆酶工程技术和降低大豆生产成本的措施列为优先研究方向。在采用参与式评估方法分析各主产区生产限制因素的基础上,提出了促进中国大豆产业发展的措施。
关键词
中国
大豆产业
限制因素
技术需求
优先序
Keywords
China
Soybean industry
Constraints
Technical demand
Priority
分类号
S565.1 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
马铃薯与致病疫霉互作研究进展与展望
被引量:
8
4
作者
田峰奇
王路遥
董莎萌
机构
南京农业大学
植物保护
学院
中国
农业
科
学院
深圳
农业
基因组研究所
出处
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期89-110,126,共23页
基金
中央高校基本科研业务费专项资金(RENCAI2023005)
广东省基础与应用基础研究重大项目(2021B03010004)。
文摘
马铃薯是重要的粮食作物,由致病疫霉侵染引发的晚疫病长期严重制约马铃薯产业的健康发展,因此,国内外均将马铃薯晚疫病列为重大病害。目前,抗病品种选育栽培、晚疫病预测预报和化学防治等相结合的晚疫病综合防治手段已得到普遍推广,但晚疫病局部大流行在全世界范围内仍时有发生,给粮食安全和生态安全带来巨大挑战。本文回顾了我国晚疫病的部分研究历史,集中关注致病疫霉与寄主的互作机制领域,梳理了近年来关于致病疫霉侵入机理、效应蛋白毒力功能、病原菌变异规律、马铃薯抗病机理等方面的重要研究结果并展望未来主要的研究方向,以期为晚疫病基础研究和防治技术革新提供参考。
关键词
马铃薯晚疫病
致病疫霉
组学
致病性
抗病性
Keywords
potato late blight
Phytophthora infestans
omics
pathogenesis
disease resistance
分类号
S435.32 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于环介导等温扩增技术检测橡树疫霉菌
戴婷婷
陆辰晨
沈浩
王源超
郑小波
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
21
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职称材料
2
大豆茎褐腐病菌环介导等温扩增检测技术的建立
吴旭东
陆辰晨
沈浩
吴翠萍
张海峰
王源超
郑小波
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
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职称材料
3
中国大豆产业技术需求分析(英文)
杨光明
孔凡杰
吴存祥
宋雯雯
胡国华
司伟
刘丽君
王源超
胡耀辉
陈海涛
张孟臣
年海
周新安
郭泰
傅连舜
魏新民
韩天富
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
马铃薯与致病疫霉互作研究进展与展望
田峰奇
王路遥
董莎萌
《植物保护》
CAS
CSCD
北大核心
2023
8
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职称材料
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