土壤微生物分子生态学研究中总DNA的提取 被引量：72

1

作者 赵勇 周志华 +3 位作者 李武 刘彬彬 潘迎捷 赵立平 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期854-860,共7页

建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标,从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法(Labmethod),它包括样品预处理,细胞裂解,粗DNA纯化,其中细胞裂解组合了玻璃珠击打,SDS裂解,溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限... 建立了一种土壤DNA提取方法。根据DNA产量和纯度2个评价指标,从3种手提土壤DNA方法中优选出方法B为手提DNA方法(Labmethod),它包括样品预处理,细胞裂解,粗DNA纯化,其中细胞裂解组合了玻璃珠击打,SDS裂解,溶菌酶裂解。进一步应用PCR-限制性片段长度多态性(Restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)技术及PCR-温度梯度凝胶电泳(Temperaturegradientgelelectrophoresis,TGGE)技术,结合DNA产量、纯度、片段大小以及所反映的微生物群落结构特性等指标评价了手提方法(Labmethod)得到的总DNA质量,并将这些结果与2种应用较广的商业试剂盒(MoBioUltraCleanSoilDNAKit和Bio101FastDNASPINKit(ForSoil))所得DNA的各种指标进行了比较。结果表明,手提方法(Labmethod)的粗DNA产量低于Bio101Kit的,但高于MoBioKit的。这些方法所得DNA的长度都在21kb左右,Labmethod提取的DNA没有严重被剪切现象,而2种试剂盒提取的DNA都有不同程度的剪切。手提方法得到的DNA经纯化后,应用细菌及真菌特异引物进行PCR扩增,均能获得目的片段,表明该方法能从土壤中同时有效提取细菌和真菌总基因组DNA。并且,手提方法所得DNA的细菌16SrDNA和真菌18SrDNA的PCR-RFLP图谱与两种商业试剂盒的图谱基本相似,但3种方法提取的DNA在细菌16SrDNAV3区和真菌28SrDNA片段的PCR-TGGE图谱上都存在一定差异,主要表现在一些弱势条带的有无或强弱上。这说明手提方法提取的总DNA与2种商业试剂盒一样,在一定程度上能反映微生物群落的多样性和组成。总之,手提DNA方法(Labmethod)所用试剂普通,价格便宜,能在4h以内获得够质够量的土壤DNA用于微生物分子生态学研究,较适合于广大普通实验室进行土壤DNA提取工作。 展开更多

关键词 土壤DNA提取 DNA质量 PCR扩增 限制性片段长度多态性分析 温度梯度凝胶电泳分析

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秸秆还田后土壤微生物群落结构变化的初步研究 被引量：38

2

作者 赵勇 李武 +3 位作者 周志华 张晓君 潘迎捷 赵立平 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1114-1118,共5页

通过实验室条件下的小麦秸秆粉和油菜秸秆粉的还土试验,结合常规的分析手段和基于DNA的分子技术(变性梯度凝胶电泳(DGGE)及测序技术),初步研究了秸秆粉还田后土壤物理化学特性及生物学特性的变化。结果表明,培养60d后,秸秆还田土壤的肥... 通过实验室条件下的小麦秸秆粉和油菜秸秆粉的还土试验,结合常规的分析手段和基于DNA的分子技术(变性梯度凝胶电泳(DGGE)及测序技术),初步研究了秸秆粉还田后土壤物理化学特性及生物学特性的变化。结果表明,培养60d后,秸秆还田土壤的肥力明显提高,其纤维素酶活性明显增强。DGGE图谱表明,对照土壤(S)以及处理土壤(SW和SR),在培养过程中,β-Proteobacteria类细菌组成都在发生变化。对其中一个样品的DGGE条带进行了割胶测序,测序结果表明,大部分条带代表的微生物是未培养的或不可培养的。采用传统分离培养技术,从秸秆还田土壤中分离了2株纤维素降解菌。以上结果说明,秸秆还田具有良好的土壤综合效应。 展开更多

关键词 秸秆 纤维素酶活性 变性梯度凝胶电泳 β-Proteobacteria 纤维素降解菌

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除臭微生物分离和筛选方法的改进与应用 被引量：25

3

作者 陈书安 黄为一 赵兵 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第5期126-129,共4页

为减轻大量的禽畜废弃物对环境的污染和促进其有机肥转化的进程,在以往大量研究的基础上,改进了分离和筛选除臭微生物的方法。应用该简便方法,快速地从环境中分离和筛选出除臭微生物F468,能够降低新鲜鸡粪氨气和硫化氢释放量分别在67%和... 为减轻大量的禽畜废弃物对环境的污染和促进其有机肥转化的进程,在以往大量研究的基础上,改进了分离和筛选除臭微生物的方法。应用该简便方法,快速地从环境中分离和筛选出除臭微生物F468,能够降低新鲜鸡粪氨气和硫化氢释放量分别在67%和56%以上,降低风干鸡粪氨气和硫化氢释放量分别在90%和52%以上。通过形态学方法鉴定,F468初步被鉴定为绿色木霉。 展开更多

关键词 微生物 分离和筛选方法 固体废弃物 除臭 鉴定

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一氯苯的微生物厌气降解及其降解性质粒的研究 被引量：13

4

作者 罗如新 沈标 李顺鹏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期63-66,共4页

以一氯苯为唯一碳源，从某化工厂废水处理厂的活性污泥中分离得一株一氯苯降解菌，初步鉴定属于气单胞菌属（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）。用气相色谱法测得该菌在３周内的氯苯降解率为３３％。不同的质粒消除试验结果表明，该菌质粒很稳定。... 以一氯苯为唯一碳源，从某化工厂废水处理厂的活性污泥中分离得一株一氯苯降解菌，初步鉴定属于气单胞菌属（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）。用气相色谱法测得该菌在３周内的氯苯降解率为３３％。不同的质粒消除试验结果表明，该菌质粒很稳定。已成功地将质粒转移到大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉＪＦ８０３）中。该转化子能利用一氯苯为唯一碳源生长，且转化子中有与原菌株电泳迁移率相同的质粒。因此，可以认为该质粒携带有降解一氯苯的基因。 展开更多

关键词 一氯苯 生物降解 质粒

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活性微生物与农药的降解 被引量：21

5

作者 王永杰 李顺鹏 严淑玲 《中国沼气》 1999年第4期10-13,共4页

本文讨论了农药微生物降解的研究进展。着重探讨了农药分子结构。

关键词 活性微生物 农药 降解

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两种土壤微生物生物量对外源镧的反应 被引量：1

6

作者 褚海燕 曹志洪 +3 位作者 朱建国 谢祖彬 卜元卿 张华勇 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期6-8,共3页

在实验室条件下研究了黄潮土、水稻土微生物生物量对外源镧的反应。外源镧对两种土壤微生物生物量均表现为抑制的影响并随着浓度增加抑制作用增强。镧对黄潮土微生物生物量的抑制作用要高于水稻土,这可能与黄潮土有机质含量和阳离子交... 在实验室条件下研究了黄潮土、水稻土微生物生物量对外源镧的反应。外源镧对两种土壤微生物生物量均表现为抑制的影响并随着浓度增加抑制作用增强。镧对黄潮土微生物生物量的抑制作用要高于水稻土,这可能与黄潮土有机质含量和阳离子交换量较低有关。土壤微生物生物量氮对外源镧的反应较生物量碳更为敏感。外源镧使土壤微生物群落向C/N比高的微生物方向发展。 展开更多

关键词 外源镧 黄潮土 水稻土 微生物生物量 碳/氮比 稀土

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外源镧对土壤微生物碳源利用的影响

7

作者 褚海燕 卜元卿 +4 位作者 林先贵 朱建国 谢祖彬 曹志洪 张华勇 《农村生态环境》 CSSCI CSCD 北大核心 2003年第1期47-49,共3页

用14 C标记葡萄糖法研究了外源镧对土壤微生物碳源利用的影响。结果表明 :外源镧在低浓度下可增强土壤微生物利用碳源进行呼吸作用 ,而高浓度下则产生显著抑制作用 ,最大抑制率为 3 3 %。土壤微生物呼吸产生的14 CO2 主要是培养初期释放... 用14 C标记葡萄糖法研究了外源镧对土壤微生物碳源利用的影响。结果表明 :外源镧在低浓度下可增强土壤微生物利用碳源进行呼吸作用 ,而高浓度下则产生显著抑制作用 ,最大抑制率为 3 3 %。土壤微生物呼吸产生的14 CO2 主要是培养初期释放的 ,培养 14d后14 CO2 释放已非常少。外源镧可增强土壤微生物利用碳源合成自身的生物量 ,最大增幅为 2 5 %。 展开更多

关键词 镧 ^14C葡萄糖 碳源利用 微生物生物量 呼吸作用

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胶孢炭疽菌菟丝子专化型的生物学特性 被引量：3

8

作者 刘慧 袁世斌 《四川农业大学学报》 CSCD 2003年第1期23-26,共4页

胶孢炭疽菌菟丝子专化型生长和产孢的最适温度范围分别为25～30℃和28～30℃,最适pH值分别为5 0和6 0,最适C/N分别为35 0～52 5和35 0～58 4。大豆菟丝子汁对该菌的生长、产孢和孢子萌发均有显著的寄主营养诱导作用,首次对该菌的分生孢... 胶孢炭疽菌菟丝子专化型生长和产孢的最适温度范围分别为25～30℃和28～30℃,最适pH值分别为5 0和6 0,最适C/N分别为35 0～52 5和35 0～58 4。大豆菟丝子汁对该菌的生长、产孢和孢子萌发均有显著的寄主营养诱导作用,首次对该菌的分生孢子萌发生物学特性进行了较为系统的研究。 展开更多

关键词 胶孢炭疽菌 菟丝子 专化型 生物学特性 大豆 生物除草剂 鲁保一号菌剂

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生物除草剂菟丝子胶孢炭疽菌生物学特性的研究 被引量：3

9

作者 谷峻 黄为一 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2002年第5期38-40,共3页

研究表明 ,菟丝子胶孢炭疽菌在 10～ 35℃能够生长 ,以 2 8～ 30℃为最佳 ;在光暗交替条件下菌丝体生长最快 ;在黑暗条件下 ,分生孢子萌发率最高 ,为 88.1% ;持续光照时 ,菌丝体生长速率和分生孢子萌发率均最低 ;蔗糖最利于其生长 ,淀... 研究表明 ,菟丝子胶孢炭疽菌在 10～ 35℃能够生长 ,以 2 8～ 30℃为最佳 ;在光暗交替条件下菌丝体生长最快 ;在黑暗条件下 ,分生孢子萌发率最高 ,为 88.1% ;持续光照时 ,菌丝体生长速率和分生孢子萌发率均最低 ;蔗糖最利于其生长 ,淀粉对菌丝体生长有明显抑制作用 ;pH值 5～ 9时均可生长 ,以pH值 5～ 7为宜 ;相对湿度在 90 %以上时 ,分生孢子的平均萌发率为 74 .2 % ,相对湿度以 97.5 %～ 10 0 %为最佳 ;表面活性剂 0 .1%吐温 2 0和 0 .1%吐温 展开更多

关键词 生物除草剂 菟丝子胶孢炭疽菌 生物学特性

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氯苯、对硝基酚对土壤生物活性的影响 被引量：23

10

作者 沈标 李顺鹏 +1 位作者 赵硕伟 刘进军 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期309-314,共6页

本文通过对土壤呼吸强度、各微生物生理群的数量以及土壤酶活性的测定，研究了氯苯、对硝基酚对土壤生物活性的影响。实验表明氯苯、对硝基酚对土壤生物活性的影响是复杂的。氯苯在200mg／kg以下对土壤呼吸强度，细菌、放线菌及真菌的... 本文通过对土壤呼吸强度、各微生物生理群的数量以及土壤酶活性的测定，研究了氯苯、对硝基酚对土壤生物活性的影响。实验表明氯苯、对硝基酚对土壤生物活性的影响是复杂的。氯苯在200mg／kg以下对土壤呼吸强度，细菌、放线菌及真菌的数量都有一定的刺激作用；而对氨化细菌、硝化细菌以及反硝化细菌则表现出抑制作用：对脲酶、脱氢酶也具有刺激作用，对庶糖酶则具有轻微的抑制作用；对硝基酚对上述几种酶的活性及各微生物类群大多表现出抑制作用。 展开更多

关键词 氯苯 对硝基酚 微生物 土壤酶

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短链脂肪酸对阿扎霉素B生物合成的调节 被引量：2

11

作者 江曙 陶金华 +1 位作者 朱丽 黄为一 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期219-222,240,共5页

研究了短链脂肪酸和长链脂肪酸对吸水链霉菌NND-52-C菌株阿扎霉素B生物合成的影响。结果表明,短链脂肪酸普遍具有促进阿扎霉素B的合成作用,而长链脂肪酸的作用则相反。在发酵至48h,添加0.1%丙酸钠和0.2%乙酸钠,阿扎霉素B的产量分别达到2... 研究了短链脂肪酸和长链脂肪酸对吸水链霉菌NND-52-C菌株阿扎霉素B生物合成的影响。结果表明,短链脂肪酸普遍具有促进阿扎霉素B的合成作用,而长链脂肪酸的作用则相反。在发酵至48h,添加0.1%丙酸钠和0.2%乙酸钠,阿扎霉素B的产量分别达到2120mg/L和1861mg/L,比对照提高了58.8%和39.4%。进一步研究表明,丙酸盐可通过诱导丙酸激酶的表达,从而大幅度地提高阿扎霉素B的产量。 展开更多

关键词 短链脂肪酸 阿扎霉素B 生物合成

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磷酸盐对阿扎霉素B生物合成的调节 被引量：2

12

作者 江曙 朱丽 黄为一 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期73-75,共3页

磷酸钙不仅可以促进阿扎霉素B产生菌的生长,而且对阿扎霉素B的生物合成具有一定的促进作用。在发酵培养基中添加1mmol/L磷酸钙可使阿扎霉素B发酵效价最高达1892mg/L,比对照提高26%;此外添加2mmol/L磷酸钙能够部分解除氨离子对阿扎霉素B... 磷酸钙不仅可以促进阿扎霉素B产生菌的生长,而且对阿扎霉素B的生物合成具有一定的促进作用。在发酵培养基中添加1mmol/L磷酸钙可使阿扎霉素B发酵效价最高达1892mg/L,比对照提高26%;此外添加2mmol/L磷酸钙能够部分解除氨离子对阿扎霉素B生物合成的抑制,解除率为20%。 展开更多

关键词 磷酸钙 阿扎霉素B 生物合成

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吸水链霉菌NND52胞内抗生素的理化性质及生物活性的研究 被引量：2

13

作者 何佳 王世梅 黄为一 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期33-36,共4页

提取纯化了吸水链霉菌NND 5 2胞内抗生素 ,结果表明 :它的Vanillin试剂染色、酸碱稳定性、对细菌的抗性 ,对金属离子的运载能力以及对鸡球虫作用阶段等性质与聚醚类抗生素相同。抗球虫指数 (ACI)

关键词 吸水链霉菌 抗生素 抗球虫药物 生物活性 鸡

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拟除虫菊酯类农药残留降解菌的筛选及其生理特性研究 被引量：76

14

作者 丁海涛 李顺鹏 +1 位作者 沈标 崔中利 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期123-129,共7页

从活性污泥的富集培养物中分离得到可降解几种拟除虫菊酯农药的菌株qw5,初步鉴定qw5为地衣芽孢杆菌 (Bacilliuslicheniformis)。菌株qw5在通气、pH7～ 8、温度 3 0℃左右的环境条件下生长较好。培养 5天 ,菌株qw5对氰戊菊酯、氯氰菊酯... 从活性污泥的富集培养物中分离得到可降解几种拟除虫菊酯农药的菌株qw5,初步鉴定qw5为地衣芽孢杆菌 (Bacilliuslicheniformis)。菌株qw5在通气、pH7～ 8、温度 3 0℃左右的环境条件下生长较好。培养 5天 ,菌株qw5对氰戊菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯的降解率分别为 5 3 .8%、41 .2 %和 61 .7%。经质谱分析 ,菌株qw5降解氰戊菊酯产生中间代谢产物 3 -苯氧基苯甲醛。qw5对小白鼠无致病力 ,对几种常用的抗生素敏感。盆钵和小区试验表明 ,菌株qw5对青菜中残留的拟除虫菊酯有明显去除效果。 展开更多

关键词 拟除虫菊酯类 农药残留 降解菌 筛选 生理特性 芽孢杆菌 微生物降解

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甲基一六O五降解菌J5的分离及其降解性状研究 被引量：23

15

作者 崔中利 李顺鹏 何健 《农村生态环境》 CSSCI CSCD 北大核心 2001年第3期21-25,共5页

从农药厂污水处理系统中分离到 1株降解甲基一六O五 (O ,O-二甲基 -O- 对硝基苯基 -硫代磷酸酯 ,简称MP)的芽胞杆菌 ,初步鉴定为蜡状芽胞杆菌 (Bacilluscereus)J5。J5能够高效降解MP ,但它不能利用MP作为唯一碳源生长 ,其代谢方式可能... 从农药厂污水处理系统中分离到 1株降解甲基一六O五 (O ,O-二甲基 -O- 对硝基苯基 -硫代磷酸酯 ,简称MP)的芽胞杆菌 ,初步鉴定为蜡状芽胞杆菌 (Bacilluscereus)J5。J5能够高效降解MP ,但它不能利用MP作为唯一碳源生长 ,其代谢方式可能为共代谢。在有葡萄糖作为碳源的条件下 ,J5可以高效转化MP ,其转化效率可达 95 %以上。用薄层层析。 展开更多

关键词 生物降解 甲基一六○五 共代谢 降解菌 分离 降解性状 农药残留 废水处理 生物修复 农药污染

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吸水链霉菌NND-52菌株胞内抗生素M1分离、纯化及结构确定 被引量：13

16

作者 严淑玲 黄为一 +1 位作者 王世梅 武济民 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期161-170,203,共11页

吸水链霉菌 NND- 5 2菌丝体 ,经溶媒浸提 ,粗结晶 ,梯度洗脱的硅胶柱层析分离 ,纯化 ,得到主要组分 M1,通过对其基本理化性质分析和 UV、IR、1 H- NMR、1 3C- NMR、DEPT等波谱分析 ,确定其结构与阿扎霉素 B相同 。

关键词 吸水链霉菌 分离 结构 阿扎霉素B 非典型大环内酯抗生素

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不同来源香菇双单杂交后代的遗传研究 被引量：9

17

作者 叶明 叶生梅 +2 位作者 潘迎捷 马桂荣 陈永萱 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期53-56,共4页

采用交配基因型遗传标记的香菇野生株Q与栽培株苏香的孢子单核体和原生质体单核体进行完全亲和双 单杂交 ,并对杂交后代进行了遗传分析。显著性检验表明 ,供试菌株的菌丝生长速率及CMC酶活力均达到极显著差异水平。RAPD结果分析表明 ,... 采用交配基因型遗传标记的香菇野生株Q与栽培株苏香的孢子单核体和原生质体单核体进行完全亲和双 单杂交 ,并对杂交后代进行了遗传分析。显著性检验表明 ,供试菌株的菌丝生长速率及CMC酶活力均达到极显著差异水平。RAPD结果分析表明 ,6个杂交菌株在DNA水平上具有很高的相似性 ,但来源于原生质体单核体的杂交后代与来源于孢子单核体的杂交后代存在不同程度的差异。酯酶同工酶结果显示 ,来自孢子单核体的杂交后代比来自原生质体杂交后代的变异程度高。两种不同来源的杂交后代在农艺性状方面具有不同的变异范围。 展开更多

关键词 香菇 双-单杂交 随机扩增多态性 DNA 酯酶同工酶 聚类分析 农艺性状 遗传研究

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VA菌根对西瓜生长和枯萎病的影响 被引量：12

18

作者 于汉寿 吴汉章 +1 位作者 汪智渊 陈永萱 《中国蔬菜》 北大核心 1997年第6期26-27,共2页

ＶＡ菌根对西瓜生长和枯萎病的影响于汉寿吴汉章汪智渊陈永萱（江苏丘陵地区镇江农科所句容２１２４００）（南京农业大学微生物学系）ＶＡ菌根是自然界普遍存在的一类真菌与植物根系建立的互惠共生体，它可促进共生植物的生长，增强植... ＶＡ菌根对西瓜生长和枯萎病的影响于汉寿吴汉章汪智渊陈永萱（江苏丘陵地区镇江农科所句容２１２４００）（南京农业大学微生物学系）ＶＡ菌根是自然界普遍存在的一类真菌与植物根系建立的互惠共生体，它可促进共生植物的生长，增强植株的抗逆性〔１〕。枯萎病是西瓜的重... 展开更多

关键词 西瓜 VA菌根 生长 枯萎病

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灵芝属分类学研究进展 被引量：18

19

作者 唐传红 苏春丽 +2 位作者 张劲松 郝瑞霞 潘迎捷 《食用菌学报》 2007年第3期86-90,共5页

概述了形态学特征、同工酶技术以及分子生物学技术在灵芝分类上的应用现状,指出了灵芝分类中存在的问题,并提出了相应的对策。

关键词 综述 灵芝 分类 对策

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luxAB基因标记甲基对硫磷降解菌DLL-1在土壤和植株根部的生态行为研究 被引量：6

20

作者 孙洁梅 崔中利 +1 位作者 邱珊莲 李顺鹏 《农村生态环境》 CSSCI CSCD 北大核心 2003年第1期43-46,共4页

发光酶标记是 1种有效的跟踪微生物在生态环境中动态行为的技术手段。采用luxAB基因标记技术对甲基对硫磷降解菌DLL - 1在土壤中的分布和植株内的定殖情况进行了研究。结果表明 ,DLL - 1可以较长时间的在植株根际定殖 ,3 0d后仍可用X -... 发光酶标记是 1种有效的跟踪微生物在生态环境中动态行为的技术手段。采用luxAB基因标记技术对甲基对硫磷降解菌DLL - 1在土壤中的分布和植株内的定殖情况进行了研究。结果表明 ,DLL - 1可以较长时间的在植株根际定殖 ,3 0d后仍可用X -感光片检测到菌体的存在 ,而根际外未检测到DLL - 1。植株根剖开后在培养基上培养 2 4h后进行X -光片曝光 ,发现DLL - 1能够进入植株根内并定殖。菌株回收后采用测定其农药降解活力和检查质粒图谱 2种方法证实 ,所观测的回收菌株就是接种的DLL - 展开更多

关键词 农药 甲基对硫磷 降解菌 假单胞菌DLL-1 luxAB 分子标记 定殖

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