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极低蛋白日粮补充不同形式氮营养素对生长猪回肠食糜菌群、代谢产物和屏障功能的影响 被引量：10
1
作者 刘壮 慕春龙 +3 位作者 彭宇 彭燮 车炼强 朱伟云 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期526-534,共9页
[目的]本试验旨在研究极低蛋白(ELP)日粮下,补充不同形式氮营养素(氨基酸或酪蛋白)对生长猪回肠微生物、代谢产物和屏障功能的影响。[方法]试验选用80头PIC阉公猪(体质量约15.57 kg,48日龄),随机分为4组:中等蛋白组(MP)、低蛋白组(LP)... [目的]本试验旨在研究极低蛋白(ELP)日粮下,补充不同形式氮营养素(氨基酸或酪蛋白)对生长猪回肠微生物、代谢产物和屏障功能的影响。[方法]试验选用80头PIC阉公猪(体质量约15.57 kg,48日龄),随机分为4组:中等蛋白组(MP)、低蛋白组(LP)、极低蛋白+氨基酸组(ELP-AA)和极低蛋白+酪蛋白组(ELP-CAS),日粮粗蛋白(CP)水平分别为17%、15%、13%和13%。每个处理5个重复,每个重复4头仔猪。试验期28 d。MP和LP两组添加必需氨基酸(AA),ELP-AA组添加非必需AA以达到LP组日粮水平,ELP-CAS组使用3%酪蛋白部分替代ELP-AA组的单体AA,使其满足营养需要。于第29天每个重复挑选1头接近栏平均体质量的猪屠宰,采集回肠食糜和肠道组织样品,用于各项指标测定。[结果]与MP组相比,ELP-AA组回肠食糜中双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳酸杆菌属(Lactobacillus)和消化链球菌属(Peptostreptococcus)的数量显著降低(P<0.05),短链脂肪酸、氨态氮和生物胺的含量均显著下降(P<0.05),而补充酪蛋白后,乙酸、丁酸、氨态氮、腐胺和精胺的含量得到显著恢复(P<0.05)。基因表达方面,与LP组相比,ELP-AA组部分肠道屏障功能相关基因(MUC-1、MUC-2和Occludin)的表达量均显著下调(P<0.05),而MUC-1和Occludin的表达量在ELP-CAS组和MP或LP组之间无显著差异(P>0.05)。相关性分析结果表明,Lactobacillus数量与丁酸和生物胺含量、MUC-1、MUC-2和Occludin基因表达量显著正相关。[结论]饲喂极低蛋白日粮补充单体氨基酸对回肠微生物数量、代谢以及肠道组织屏障均产生不利影响,而补充酪蛋白能部分改善回肠有益微生物的生长并恢复部分肠道屏障相关基因的表达,提示在极低蛋白质水平下,补充酪蛋白对维持机体正常氮利用、肠道微生物生长代谢和肠道屏障功能具有重要作用。 展开更多
关键词 蛋白水平 氮营养素 肠道微生物 屏障功能
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荧光素酶报告系统检测大肠杆菌代谢产物调控STC-1细胞表达胆囊收缩素研究
2
作者 余倩 张玉宇 +2 位作者 张曾娣 朱伟云 黄赞 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1133-1140,共8页
[目的]本文旨在筛选出可调控肠道Ⅰ细胞表达胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)的大肠杆菌代谢物,建立可方便检测CCK表达的STC-1细胞模型。[方法]利用分子克隆技术构建含有CCK启动子调控荧光素酶的慢病毒载体,包装慢病毒并感染STC-1细胞,... [目的]本文旨在筛选出可调控肠道Ⅰ细胞表达胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)的大肠杆菌代谢物,建立可方便检测CCK表达的STC-1细胞模型。[方法]利用分子克隆技术构建含有CCK启动子调控荧光素酶的慢病毒载体,包装慢病毒并感染STC-1细胞,获得STC-1/CCK-Luc细胞系。用大肠杆菌基因敲除株培养液上清处理上述细胞,检测荧光素酶活性,确定可影响CCK表达的大肠杆菌基因及代谢产物。使用纯化的代谢产物处理STC-1细胞及肠道类器官,通过Western blot及免疫荧光法检测CCK表达水平的变化。[结果]酶切鉴定及DNA测序表明慢病毒载体构建成功,荧光素酶活性检测发现大肠杆菌ΔSapD株菌液上清可显著抑制荧光素酶的表达。敲除SapD基因可以使培养液中腐胺水平下降,而腐胺可以上调STC-1细胞及肠道类器官中CCK的表达。[结论]成功构建了能够体外检测CCK表达的细胞系,筛选出1个能够调控CCK表达的大肠杆菌突变体。 展开更多
关键词 慢病毒载体 胆囊收缩素(CCK) 荧光素酶 大肠杆菌敲除株
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丙酸钠对IPEC-J2细胞紧密连接及炎症细胞因子的影响 被引量：4
3
作者 张亚南 李轩 +2 位作者 陈慧子 余凯凡 朱伟云 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期137-144,共8页
[目的]本文以猪肠道上皮IPEC-J2细胞为模型,探究不同水平丙酸钠对细胞紧密连接和炎症细胞因子的影响。[方法]分别用1和10 mmol·L^(-1)丙酸钠处理IPEC-J2细胞,以不加丙酸钠处理IPEC-J2细胞为对照组,分别处理12 h和24 h后测定各组细... [目的]本文以猪肠道上皮IPEC-J2细胞为模型,探究不同水平丙酸钠对细胞紧密连接和炎症细胞因子的影响。[方法]分别用1和10 mmol·L^(-1)丙酸钠处理IPEC-J2细胞,以不加丙酸钠处理IPEC-J2细胞为对照组,分别处理12 h和24 h后测定各组细胞活力、跨膜电阻(TEER)值、紧密连接相关蛋白及炎症细胞因子基因表达和细胞上清液中炎症因子浓度。[结果]丙酸钠处理24 h后,处理组细胞活力显著下降(P<0.05),细胞的TEER值则显著上升(P<0.05)。RT-qPCR结果显示,紧密连接相关蛋白Claudin中,不同浓度丙酸钠处理12和24 h后,显著下调Claudin-1 mRNA的表达(P<0.05),但显著上调Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4 mRNA的表达(P<0.05)。紧密连接相关蛋白ZO中,处理12和24 h时,1和10 mmol·L^(-1)丙酸钠分别显著上调ZO-2 mRNA和ZO-1 mRNA的表达(P<0.05),但10 mmol·L^(-1)丙酸钠则显著下调ZO-2 mRNA的表达(P<0.05)。不同浓度丙酸钠处理12和24 h均显著上调炎症细胞因子IL-8、IL-18和TNF-αmRNA的表达(P<0.05),显著下调IL-6 mRNA的表达(P<0.05)。ELISA测定结果表明,丙酸钠显著刺激IL-8和TNF-α的分泌(P<0.05),对IL-18和IL-6的分泌则无显著影响(P>0.05)。[结论]丙酸钠选择性上调紧密连接蛋白家族相关基因的表达,一定程度上维护小肠上皮细胞屏障功能的完整性,同时调节细胞炎症反应,揭示丙酸在调节小肠上皮细胞屏障功能以及炎症反应过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 丙酸钠 紧密连接 炎症细胞因子 IPEC-J2细胞
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不同尿素添加水平对育肥湖羊瘤胃发酵及微生物菌群结构的影响 被引量：12
4
作者 孙美杰 姜君 +3 位作者 徐诣轩 李志鹏 申军士 朱伟云 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期323-332,共10页
[目的]本试验旨在研究低蛋白日粮添加不同水平尿素对育肥湖羊瘤胃发酵及微生物菌群结构的影响。[方法]70只育肥公湖羊(23.6~26.0 kg)随机分为5组,分别饲喂以下日粮:正常豆粕(SBM,170 g·kg^(-1)),低豆粕(40 g·kg^(-1))基础上添... [目的]本试验旨在研究低蛋白日粮添加不同水平尿素对育肥湖羊瘤胃发酵及微生物菌群结构的影响。[方法]70只育肥公湖羊(23.6~26.0 kg)随机分为5组,分别饲喂以下日粮:正常豆粕(SBM,170 g·kg^(-1)),低豆粕(40 g·kg^(-1))基础上添加0、10、20和30 g·kg^(-1)尿素(U0、U10、U20、U30)。试验预饲期1周,正试期8周。采集瘤胃液测定发酵参数和功能菌群数量,同时扩增细菌16S rRNA基因V3—V4区进行Illumina-MiSeq测序。[结果]与U10组相比,U20和U30组瘤胃液pH值显著升高(P<0.05)。氨态氮(NH_(3)-N)浓度随尿素添加量的增加显著升高(P<0.05)。与U0和U30组相比,SBM、U10和U20组总菌、甲烷菌和原虫数量显著升高(P<0.05)。Illumina-MiSeq测序结果显示U30组Shannon指数显著高于U0和U10组(P<0.05),但Chao1指数没有差异(P>0.05)。U10组Bacteroidetes的丰度显著高于SBM、U20和U30组(P<0.05),但Firmicutes却显著降低(P<0.05)。各组的主要优势菌属为Prevotella 1、Muribaculaceae norank、Rikenellaceae RC9 gut group和Christensenellaceae R-7 group。U10组Prevotella 1的丰度显著高于U20和U30组(P<0.05),而Rikenellaceae RC9 gut group、Christensenellaceae R-7 group和Ruminococcaceae NK4A214 group显著低于U30组(P<0.05)。RDA结果显示pH值、NH_(3)-N和总挥发性脂肪酸(TVFA)对瘤胃不同菌属的影响程度存在差异,其中pH值的影响最显著(P<0.05)。[结论]在低蛋白日粮中添加适量尿素(10 g·kg^(-1))可增加育肥湖羊瘤胃功能菌群数量,促进相关代谢产物的产生与利用,但日粮氮不足或尿素添加水平过高则会降低瘤胃功能菌群数量和改变细菌群落组成。 展开更多
关键词 尿素 育肥 湖羊 瘤胃发酵 功能菌群 菌群结构
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不同浓度硫化氢对肠上皮细胞炎症、线粒体功能和氧化应激的影响 被引量：4
5
作者 张夏薇 慕春龙 朱伟云 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期157-163,共7页
[目的]本试验使用硫氢化钠(NaHS,硫化氢供体)处理Caco-2细胞,研究硫化氢(H2S)对肠上皮细胞炎症、氧化应激和线粒体硫化物代谢功能的影响,探究H 2S影响肠道健康的可能机制。[方法]试验分为4个组,分别为对照组、低(0.1 mmol·L^-1)、... [目的]本试验使用硫氢化钠(NaHS,硫化氢供体)处理Caco-2细胞,研究硫化氢(H2S)对肠上皮细胞炎症、氧化应激和线粒体硫化物代谢功能的影响,探究H 2S影响肠道健康的可能机制。[方法]试验分为4个组,分别为对照组、低(0.1 mmol·L^-1)、中(1 mmol·L^-1)、高(2 mmol·L^-1)浓度的NaHS组,处理24 h后测定各组细胞活力、炎症细胞因子基因表达、硫化物代谢酶基因表达和氧化应激指标。[结果]与对照组相比,NaHS能够增强肠上皮细胞活力,2 mmol·L^-1 NaHS显著上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)的基因表达水平(P<0.05),0.1 mmol·L^-1 NaHS上调线粒体硫化物代谢酶硫醌氧化还原酶(SQR)、硫代硫酸盐硫转移酶(TST)、硫双加氧酶(ETHE1)和亚硫酸氧化酶(SUOX)的基因表达,而2mmol·L-1 NaHS下调SQR的基因表达,显著提高丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性(P<0.05),显著降低超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05),0.1mmol·L^-1 NaHS显著提高MDA含量(P<0.05),1mmol·L^-1 NaHS则显著降低SOD活性(P<0.05)。[结论]低浓度H 2S能增强细胞活力,提高线粒体硫化物代谢能力和氧化应激水平。高浓度H 2S能促进炎症反应,提高氧化应激水平,影响线粒体硫化物代谢能力,可能对肠道健康产生不利影响。 展开更多
关键词 硫化氢 氧化应激 炎症 线粒体
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日粮添加尿素对育肥湖羊空肠菌群结构及氨和尿素转运蛋白表达的影响 被引量：1
6
作者 孙美杰 郑文金 +1 位作者 申军士 朱伟云 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期345-353,共9页
[目的]本试验旨在探究日粮添加尿素对育肥湖羊空肠发酵、菌群结构以及氨和尿素转运蛋白表达的影响。[方法]将42只3月龄育肥公湖羊(约24.3 kg)随机均分为3个处理组,在饲喂基础日粮的基础上分别添加0 g·kg-1(U0组)、10 g·kg-1(... [目的]本试验旨在探究日粮添加尿素对育肥湖羊空肠发酵、菌群结构以及氨和尿素转运蛋白表达的影响。[方法]将42只3月龄育肥公湖羊(约24.3 kg)随机均分为3个处理组,在饲喂基础日粮的基础上分别添加0 g·kg-1(U0组)、10 g·kg-1(U10组)、30 g·kg^(-1)(U30组)尿素。试验预饲期1周,正试期10周。试验结束每组随机选取6只屠宰,采集空肠内容物,测定发酵参数和定量总菌,并利用Illumina MiSeq测序分析空肠细菌组成;采集空肠上皮组织样品检测氨转运蛋白b(Rhbg)、氨转运蛋白c(Rhcg)和尿素转运蛋白B(UT-B)基因mRNA表达。[结果]与U0组相比,U10和U30组空肠氨态氮含量显著升高(P<0.05)。与U0组相比,U10组总挥发性脂肪酸和乙酸含量显著降低,U30组丁酸和异戊酸含量相较于U10组显著升高(P<0.05)。相较于U0组,U10和U30组的总菌数量显著升高(P<0.05)。Illumina-MiSeq测序结果显示,添加尿素并未影响空肠Chao 1、ACE、Shannon和Simpson指数(P>0.05),PCoA分析结果显示各组间空肠细菌群落组成明显区分。添加尿素对湖羊空肠中细菌门水平相对丰度无显著影响,但细菌属水平相对丰度存在差异。各处理组主要优势菌属为Lachnospiraceae NK3A20 group、Ruminococcus 2、Acetitomaculum和Bifidobacteriaceae unclassified,其中Lachnospiraceae NK3A20 group和Ruminococcus 2的相对丰度均在U10组中最高。此外,U10组Ruminococcus gauvreauii group和Olsenella的相对丰度相较于U30组显著升高(P<0.05)。与U0和U30组相比,U10组空肠上皮Rhbg基因mRNA表达水平显著上调(P<0.05);Rhcg基因和UT-B基因表达水平随尿素添加水平的升高逐渐降低,但差异不显著(P>0.05)。[结论]日粮补充适宜尿素(10 g·kg^(-1))可提高空肠内氨态氮含量,促进氮利用细菌的生长定殖,改善菌群结构。此外,添加尿素会影响空肠上皮Rhbg基因的表达,但不影响Rhcg基因和UT-B基因的表达。 展开更多
关键词 湖羊 尿素 菌群结构 氨转运蛋白 尿素转运蛋白
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