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神经营养因子受体Trkb对湖羊垂体细胞增殖及促性腺激素分泌的影响 被引量:1
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作者 陈培勇 蔡玉 +3 位作者 杨花 徐辉 王锋 张艳丽 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期166-173,共8页
[目的]本研究旨在探究神经营养因子酪氨酸激酶B受体(Trkb)基因对湖羊垂体促性腺激素分泌的影响。[方法]利用qPCR方法对Trkb进行组织表达谱分析;构建Trkb过表达载体并转染至湖羊垂体细胞,利用qPCR、Western blot、EdU以及ELISA等技术检... [目的]本研究旨在探究神经营养因子酪氨酸激酶B受体(Trkb)基因对湖羊垂体促性腺激素分泌的影响。[方法]利用qPCR方法对Trkb进行组织表达谱分析;构建Trkb过表达载体并转染至湖羊垂体细胞,利用qPCR、Western blot、EdU以及ELISA等技术检测过表达Trkb对垂体细胞增殖及促性腺激素分泌的影响。[结果]Trkb在湖羊心、肝、脾、肺、肾以及下丘脑和垂体等各个组织中均有表达,但在垂体中表达水平显著高于其他组织(P<0.05)。Trkb在湖羊垂体组织不同发育阶段差异表达,其中在6月龄垂体组织中高表达(P<0.05),在5日龄和3月龄表达水平较低。与对照组相比,过表达Trkb基因显著促进了垂体细胞增殖率(P<0.05),增殖标记基因Pcna表达水平与Bcl2/Bax比值均显著提高(P<0.05)。此外,过表达Trkb显著提高了促性腺激素相关基因Fshβ和Lhβ的表达水平,促进了垂体细胞促卵泡素(FSH)分泌(P<0.05)。[结论]过表达Trkb能够显著促进湖羊垂体细胞增殖,降低细胞凋亡水平从而显著提高促性腺激素的分泌水平。本研究初步验证Trkb基因在湖羊垂体细胞中功能,为深入研究Trkb调控垂体功能的分子机制提供了试验依据。 展开更多
关键词 湖羊 垂体 酪氨酸激酶B受体(Trkb) 细胞增殖 促性腺激素
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玉米赤霉烯酮对湖羊睾丸间质细胞毒性及m^(6)A甲基化修饰相关基因表达的影响 被引量:5
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作者 刘亮 苏晓彤 +4 位作者 李慧贤 胡康瑶 陆宏辉 许新松 万永杰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期772-779,共8页
[目的]本文旨在探究玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEA)对湖羊睾丸间质细胞(leydig cells, LC)的毒性作用。[方法]用200μmol·L^(-1)ZEA处理湖羊LC 8 h,通过EdU法检测细胞增殖情况,RT-qPCR和Western blot分别检测与细胞增殖和凋亡、... [目的]本文旨在探究玉米赤霉烯酮(zearalenone, ZEA)对湖羊睾丸间质细胞(leydig cells, LC)的毒性作用。[方法]用200μmol·L^(-1)ZEA处理湖羊LC 8 h,通过EdU法检测细胞增殖情况,RT-qPCR和Western blot分别检测与细胞增殖和凋亡、氧化应激、m^(6)A甲基化修饰相关基因和蛋白的表达变化。[结果]与对照组相比,ZEA处理组LC活性和增殖数量极显著下降(P<0.01);细胞增殖相关基因pcna及其蛋白表达水平均极显著下降(P<0.01);促凋亡基因表达水平(bax、caspase3,P<0.01;tp53、caspase9,P<0.05)均显著升高,相对应蛋白表达水平(TP53、CASPASE9,P<0.01)极显著升高;抗凋亡基因bcl-2及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);氧化应激相关基因相对表达水平(cat,P<0.05;gsh-px、sod2,P<0.01)显著或极显著上升,其相关蛋白表达水平(SOD2,P<0.01)极显著上升;m^(6)A相关基因alkbh5的相对表达水平显著降低(P<0.05),mettl3和ythdc1水平极显著升高(P<0.01),ythdf3水平显著升高(P<0.05)。[结论]ZEA可抑制湖羊LC增殖,促进湖羊LC凋亡,导致LC发生氧化损伤,产生毒性作用,且其毒性作用可能跟m^(6)A甲基化修饰相关。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 湖羊 睾丸间质细胞 增殖 凋亡 氧化应激 m^(6)A甲基化修饰
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围产期湖羊能量负平衡下添加三丁酸甘油酯对羔羊瘤胃发酵指标及微生物多样性的影响 被引量:5
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作者 张昕乐 王智博 +5 位作者 陈培勇 王远孝 张艳丽 王锋 尤佩华 樊懿萱 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期933-938,共6页
[目的]围产期母羊往往处于多种营养素负平衡状态,尤其是能量负平衡(NEB)。本试验旨在探究在NEB的围产期湖羊日粮中添加三丁酸甘油酯对羔羊的瘤胃发酵指标及微生物多样性的影响。[方法]选取20只体况相似、健康且怀双羔的产前50 d湖羊,体... [目的]围产期母羊往往处于多种营养素负平衡状态,尤其是能量负平衡(NEB)。本试验旨在探究在NEB的围产期湖羊日粮中添加三丁酸甘油酯对羔羊的瘤胃发酵指标及微生物多样性的影响。[方法]选取20只体况相似、健康且怀双羔的产前50 d湖羊,体重(45±5)kg,随机分为2组,分别为能量负平衡(NEB)组和添加三丁酸甘油酯(TB)组,其生产的羔羊分组为L-NEB和L-TB,采用人工定量饲喂对应组别母乳。试验期从母羊产前40 d至产后42 d,预试期10 d。当羔羊达到42日龄时,分别从每组随机挑选5只屠宰,采集瘤胃内容物,测量其瘤胃发酵指标,再采用高通量测序技术对其瘤胃微生物进行分析。[结果]围产期湖羊添加三丁酸甘油酯后,L-TB组羔羊的瘤胃内容物乙酸含量显著升高(P<0.05),丙酸含量呈上升趋势;瘤胃微生物多样性显著降低(P<0.05);厚壁菌门丰度显著提高(P<0.05),蓝藻菌门丰度显著下降(P<0.05);属水平上,厚壁菌门中Succiniclasticum和Ruminococcaceae UCG014丰度显著提高(P<0.05)。[结论]在围产期湖羊日粮中添加三丁酸甘油酯可以改善羔羊的营养状态,为羔羊瘤胃有益菌的定殖创造有利条件,对羔羊的生长发育产生积极影响。 展开更多
关键词 湖羊 围产期 三丁酸甘油酯 瘤胃微生物
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GALNTL5基因在不同月龄湖羊附睾中的表达模式及其miRNA的预测 被引量:2
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作者 姚晓磊 孟繁星 +2 位作者 王书婷 刘孜斐 王锋 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期519-525,共7页
[目的]本文旨在探究不同发育阶段湖羊附睾(头、体、尾)中GALNTL5(polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase-like protein 5)的表达规律及其microRNA(miRNA)预测。[方法]选取3、9、24月龄(M)雄性湖羊各5只,屠宰后采集附睾(头、体... [目的]本文旨在探究不同发育阶段湖羊附睾(头、体、尾)中GALNTL5(polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase-like protein 5)的表达规律及其microRNA(miRNA)预测。[方法]选取3、9、24月龄(M)雄性湖羊各5只,屠宰后采集附睾(头、体、尾)组织。采用RT-qPCR和Western blot技术检测不同发育阶段湖羊附睾中GALNTL5 mRNA和蛋白表达水平;用免疫组化技术对其进行定位分析;用RNAhybrid和miRanda 2种软件分别预测GALNTL5对应的miRNA并取交集,同时检测候选miRNA在附睾尾中的表达规律。[结果]GALNTL5 mRNA和蛋白在附睾体、尾中表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P<0.05);GALNTL5 mRNA在附睾头中表现为24 M显著高于3 M和9 M(P<0.05),但3 M与9 M之间差异不显著(P>0.05)。除了GALNTL5蛋白在9 M与24 M附睾尾中差异显著外,其余均差异不显著(P>0.05);GALNTL5蛋白在附睾头、体中的表达规律一致;GALNTL5定位于附睾主细胞、基细胞及精子中。预测获得11个候选miRNA,按评分高低进行排序,选取miR-487a-5p、miR-485-5p、miR-329b-5p和miR-27a这4个miRNA进行验证,发现miR-487a-5p表达水平表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P<0.05),而miR-485-5p和miR-27a呈现相反趋势。[结论]GALNTL5在精子成熟过程中扮演着重要的角色;miR-485-5p和miR-27a可能与GALNTL5存在靶向关系。 展开更多
关键词 GALNTL5 附睾 发育阶段 湖羊
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HSD17B12基因对湖羊垂体细胞促性腺激素合成的影响 被引量:2
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作者 杨花 赵欣月 +2 位作者 万珍 王锋 张艳丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期703-713,共11页
旨在探索湖羊垂体中17β-羟类固醇脱氢酶12(HSD17B12)基因对垂体激素分泌的影响。本研究挑选体重相近(40 kg左右)且健康的性成熟湖羊公羊(9月龄)3只,采集垂体组织进行HSD17 B12基因CDS区扩增及蛋白同源性分析,确定其CDS区序列。利用免... 旨在探索湖羊垂体中17β-羟类固醇脱氢酶12(HSD17B12)基因对垂体激素分泌的影响。本研究挑选体重相近(40 kg左右)且健康的性成熟湖羊公羊(9月龄)3只,采集垂体组织进行HSD17 B12基因CDS区扩增及蛋白同源性分析,确定其CDS区序列。利用免疫组化分析HSD17B12在性成熟雄性湖羊垂体中的表达定位。体外分离湖羊垂体细胞,利用RNA干扰和细胞转染技术体外干扰HSD17B12,qPCR鉴定激素相关基因的表达水平,并利用流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡、周期等的变化。结果表明,HSD17 B12基因CDS区长度为939 bp,并且在物种间保守性较高。此外,HSD17B12在湖羊垂体组织大部分细胞中均呈现阳性表达。在垂体细胞干扰HSD17 B12后,可以造成细胞增殖效率显著降低(P<0.05),细胞凋亡比率显著增加(P<0.05),细胞周期发生显著改变(P<0.05),且垂体促性腺激素合成相关基因FSHβ、LHβ和生长激素基因GH表达水平均显著降低(P<0.05)。结果提示,在湖羊垂体细胞中干扰HSD17 B12的表达,可通过影响细胞增殖、周期和凋亡水平的变化而显著降低促性腺激素及生长激素的分泌。本研究初步证明了HSD 17B12基因在湖羊垂体中的重要作用,为进一步探索其中的作用机制提供一定的基础。 展开更多
关键词 HSD17B12 垂体 湖羊
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