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哺乳动物合子基因组激活过程中表观遗传因子的表达模式研究
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作者 陈笑薇 杨瑛楠 +3 位作者 田梦圆 张金豪 王锋 邓明田 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1128-1140,共13页
[目的]哺乳动物合子基因组激活(zygotic genome activation,ZGA)是早期胚胎发育的一个关键阶段,标志着早期胚胎的发育调控由母源基因向合子基因转变。DNA甲基化和组蛋白修饰等表观遗传精确调控合子基因或母源基因的激活或抑制,在早期胚... [目的]哺乳动物合子基因组激活(zygotic genome activation,ZGA)是早期胚胎发育的一个关键阶段,标志着早期胚胎的发育调控由母源基因向合子基因转变。DNA甲基化和组蛋白修饰等表观遗传精确调控合子基因或母源基因的激活或抑制,在早期胚胎发育过程中发挥重要作用。本研究目的为探究表观遗传因子在哺乳动物ZGA过程中的表达变化,理解哺乳动物早期胚胎发育的调控方式。[方法]通过构建山羊早期胚胎发育不同时期胚胎RNA-seq文库,使用生物信息学方法联合分析小鼠、人和牛早期胚胎发育不同时期胚胎RNA-seq数据,分析重要表观遗传因子在哺乳动物ZGA过程中的表达模式。[结果]在人、小鼠、山羊、牛ZGA过程中分别检测到153、153、87、58个差异表达的表观遗传因子,其中KDM5B、SETD2、EED、MSL2、MTA2、ATXN7L3、YTHDF2、IGF2BP1、ALYREF在人、小鼠、牛和山羊ZGA时期均差异表达;DNA甲基化因子TET1在小鼠、人、牛ZGA时期表达存在显著差异,在山羊ZGA过程中不差异但表达水平逐渐升高;组蛋白甲基化因子STED2和KDM5B在人、小鼠、牛、山羊ZGA过程中发挥重要作用;组蛋白乙酰化因子MSL2和MTA2在人、小鼠、牛、山羊ZGA时期维持乙酰化的动态平衡发挥重要作用;RNA修饰因子中YTHDF2和IGF2BP1可能参与调控哺乳动物ZGA过程的转录过程。[结论]本试验解析了DNA甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化和RNA修饰等表观遗传调控因子在哺乳动物ZGA期间的变化规律,并比较了人、小鼠、牛和山羊的表达模式,为构建哺乳动物ZGA调控网络、剖析表观遗传因子的动态调控作用、预测胚胎发育潜能等提供科学依据。 展开更多
关键词 合子基因组激活 表观遗传 早期胚胎发育 哺乳动物 组蛋白修饰
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卵泡抑制素基因对绵羊卵巢颗粒细胞的影响及机制研究
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作者 戴可可 李尚来 +5 位作者 蔡玉 陈培勇 徐辉 吕文莉 赵冰茹 张艳丽 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第5期1141-1150,共10页
[目的]本试验旨在研究卵泡抑制素(follistatin,FST)基因对湖羊卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GC)增殖及凋亡的影响,为揭示卵泡抑制素对湖羊繁殖调控机制的影响提供理论基础。[方法]利用免疫组织化学方法检测FST在卵巢组织中的表达特征... [目的]本试验旨在研究卵泡抑制素(follistatin,FST)基因对湖羊卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GC)增殖及凋亡的影响,为揭示卵泡抑制素对湖羊繁殖调控机制的影响提供理论基础。[方法]利用免疫组织化学方法检测FST在卵巢组织中的表达特征。利用RT-qPCR、Western blot、流式细胞术等方法,分析FST基因过表达和干扰对湖羊卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。通过RNA-seq分析FST基因干扰前后湖羊卵巢颗粒细胞的转录组表达差异变化。[结果]FST在湖羊卵巢颗粒细胞内高表达,干扰FST能抑制湖羊卵巢颗粒细胞增殖,降低颗粒细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA和蛋白水平,过表达FST则表现出相反的趋势;RNA-seq结果显示,干扰FST后颗粒细胞中细胞周期调控、卵母细胞减数分裂、孕激素分泌等相关功能及通路发生显著变化。[结论]FST可以促进湖羊GC增殖,抑制GC凋亡,通过影响卵母细胞分裂和生殖激素分泌相关基因的表达,参与湖羊卵泡发育进程。 展开更多
关键词 卵泡抑制素 湖羊 颗粒细胞 增殖 凋亡
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案例教学在动物科学专业基础课中的应用探究——以动物繁殖学为例 被引量:8
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作者 王子玉 杭苏琴 +1 位作者 李东旭 王锋 《黑龙江动物繁殖》 2021年第4期55-58,共4页
动物繁殖学是动物科学专业必修的专业基础课程之一,教学中对学生的实践能力和创新能力培养要求较高,南京农业大学动物科技学院动物繁殖教研组探索出"案例研习+模拟实训+规范化学习"三位一体的案例教学法,对案例教学法在动物... 动物繁殖学是动物科学专业必修的专业基础课程之一,教学中对学生的实践能力和创新能力培养要求较高,南京农业大学动物科技学院动物繁殖教研组探索出"案例研习+模拟实训+规范化学习"三位一体的案例教学法,对案例教学法在动物繁殖学教学中的应用及成效进行初步探究,为案例教学在动物科学专业基础课教学中的推广应用提供参考。 展开更多
关键词 案例 动物繁殖学 实践教学 创新教育
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哺乳动物合子基因组激活调控的研究进展 被引量:2
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作者 邓明田 王锋 《黑龙江动物繁殖》 2020年第1期37-41,共5页
合子基因组激活(zygotic genome activation,ZGA)异常是哺乳动物早期胚胎发育阻滞的主要原因之一,其发生对早期胚胎发育和全能性的建立有着重要的意义。研究发现ZGA发生与DNA甲基化、组蛋白甲基化和非编码RNA等表观遗传及转录因子有关... 合子基因组激活(zygotic genome activation,ZGA)异常是哺乳动物早期胚胎发育阻滞的主要原因之一,其发生对早期胚胎发育和全能性的建立有着重要的意义。研究发现ZGA发生与DNA甲基化、组蛋白甲基化和非编码RNA等表观遗传及转录因子有关。笔者主要对以上因素调控哺乳动物ZGA的机制予以综述,为深入理解哺乳动物早期胚胎发育提供参考。 展开更多
关键词 合子基因组激活 DNA甲基化 组蛋白甲基化 非编码RNA 转录因子
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过表达Kdm4d对山羊孤雌胚胎基因组激活期Xist表达的影响
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作者 杨瑛楠 蔡玉 +4 位作者 刘孜斐 李东旭 万永杰 王锋 邓明田 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1227-1234,共8页
[目的]本试验旨在探究过表达赖氨酸特异去甲基化酶4D(Kdm4d)对山羊孤雌胚胎基因组激活期(8细胞期)Xist表达的影响。[方法]通过构建Kdm4d-IRES-EGFP重组质粒,体外转录Kdm4d mRNA,再利用显微注射、免疫荧光和亚硫酸氢盐测序等方法,分析过... [目的]本试验旨在探究过表达赖氨酸特异去甲基化酶4D(Kdm4d)对山羊孤雌胚胎基因组激活期(8细胞期)Xist表达的影响。[方法]通过构建Kdm4d-IRES-EGFP重组质粒,体外转录Kdm4d mRNA,再利用显微注射、免疫荧光和亚硫酸氢盐测序等方法,分析过表达Kdm4d对山羊孤雌胚胎基因组激活期(8细胞期)Xist表达的影响。[结果]与对照组相比,组蛋白H3K9甲基化(H3K9me3)水平在2~8细胞期和囊胚期过表达Kdm4d的山羊孤雌胚胎中均显著降低,过表达Kdm4d山羊的4、8细胞期胚胎和囊胚的发育潜能无显著变化;Xist表达水平在过表达Kdm4d的山羊8细胞期孤雌胚胎中显著升高,但Xist启动子仍维持高甲基化,与对照组相比无显著变化。[结论]Kdm4d能有效移除孤雌胚胎中H3K9me3修饰,促进Xist表达,但不影响Xist启动子DNA甲基化水平和山羊孤雌胚胎发育潜能。本研究为深入理解Kdm4d调控山羊早期胚胎X染色体失活的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 Kdm4d XIST 孤雌胚胎 胚胎基因组激活 山羊
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山羊睾丸支持细胞的培养与双荧光自噬报告载体的建立 被引量:1
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作者 韩乐 张国敏 +5 位作者 杨花 庞静 万永杰 姚晓磊 王锋 张艳丽 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期132-139,共8页
[目的]本试验旨在建立一个实时追踪山羊细胞自噬发生状况的工具,以探讨细胞自噬对睾丸支持细胞(SC)和生殖细胞的影响。[方法]通过PCR法扩增mCherry-EGFP-LC3基因序列1 884 bp,将其导入真核表达载体pEX-3中,得到重组质粒pmCherry-EGFP-L... [目的]本试验旨在建立一个实时追踪山羊细胞自噬发生状况的工具,以探讨细胞自噬对睾丸支持细胞(SC)和生殖细胞的影响。[方法]通过PCR法扩增mCherry-EGFP-LC3基因序列1 884 bp,将其导入真核表达载体pEX-3中,得到重组质粒pmCherry-EGFP-LC3;将pmCherry-EGFP-LC3及对照质粒p EX-3分别转染体外分离培养的山羊SC,饥饿处理12 h后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的表达,用RT-qPCR和Western blot检测细胞中自噬相关基因和蛋白表达变化,用透射电镜观察细胞自噬体的形成。[结果]成功构建了双荧光自噬报告载体,该载体能在山羊SC中表达,荧光显微镜下可见绿色荧光和红色荧光表达;饥饿处理后,该载体可以指示细胞中自噬泡的形成过程,且细胞自噬相关标记Beclin1 mRNA以及LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA比值和蛋白水平均显著上调,并能观察到初始自噬体的形成。[结论]获得的山羊SC可以作为后续试验的细胞模型;构建的双荧光pmCherry-EGFP-LC3自噬报告载体可为进一步研究山羊SC的自噬发生提供有效的工具。 展开更多
关键词 自噬 睾丸支持细胞 微管相关蛋白Ⅰ轻链3(LC3) 山羊
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AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究 被引量:7
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作者 汪棋 汪长建 +5 位作者 魏宗友 陆汉希 姚晓磊 杨花 王锋 张艳丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3033-3045,共13页
旨在研究AMPK激活剂二甲双胍(metformin,Met)和阿卡地新(acadesine,AICAR)对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度(0、100、200、300、400、500μmol·L-1)的Met和AICAR,冷冻解冻后根据精子... 旨在研究AMPK激活剂二甲双胍(metformin,Met)和阿卡地新(acadesine,AICAR)对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度(0、100、200、300、400、500μmol·L-1)的Met和AICAR,冷冻解冻后根据精子活力、运动性能和结构完整性指标筛选出最佳的添加浓度(400μmol·L-1 Met、200μmol·L-1 AICAR);然后分别使用不同的冷冻稀释液(对照组:稀释液;Met组:含400μmol·L-1 Met的稀释液;AICAR组:含200μmol·L-1 AICAR的稀释液)冷冻精液,解冻后检测精子中AMPK蛋白表达、顶体酶活性、代谢指标、线粒体功能以及抗氧化酶活性。结果表明,稀释液中添加400μmol·L-1 Met和200μmol·L-1 AICAR均可显著提高解冻后精子活力、运动性能及精子结构完整性(P<0.05),其中400μmol·L-1 Met组精子总活力达43.20%,顶体完整率为91%,质膜完整率为46%。与对照组相比,Met组和AICAR组解冻后精子中AMPK磷酸化水平显著升高(P<0.05);顶体酶活性显著提高(P<0.05);丙酮酸水平显著下降(P<0.05),乳酸脱氢酶活性、乳酸以及ATP含量均显著升高(P<0.05);与对照组相比,Met和AICAR组稀释液更有利于维持线粒体膜电位(P<0.05),提高ATP酶(P<0.05)以及抗氧化酶的活性(P<0.05)。添加适当浓度的AMPK激活剂可以提高绵羊精液冷冻保存的效果。 展开更多
关键词 绵羊精液 冷冻保存 AMPK激活剂 精液品质
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