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猪流行性腹泻病毒诱导细胞铁死亡的分析
1
作者 王公民 伍钢 +3 位作者 陈雪清 陈希文 徐佳靖 张源淑 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第11期5852-5863,共12页
本文旨在探究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染后是否引起铁死亡及对其复制水平的影响。首先通过PEDV感染IPEC-J2(porcine intestinal epithelial cells,IPEC-J2)细胞后的蛋白组学差异蛋白、GO和KEGG富集分... 本文旨在探究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染后是否引起铁死亡及对其复制水平的影响。首先通过PEDV感染IPEC-J2(porcine intestinal epithelial cells,IPEC-J2)细胞后的蛋白组学差异蛋白、GO和KEGG富集分析推测IPEC-J2细胞在感染PEDV后会发生铁死亡,通过测定细胞中MDA、GSH含量,铁死亡关键蛋白TFRC、xCT、GPX4、ACSL4、LPCAT3和Ferritin蛋白水平及倒置荧光显微镜观察Fe^(2+)、脂质ROS和线粒体膜电位荧光强度变化确定了会发生铁死亡。进一步通过添加铁死亡抑制剂Fer-1(ferrostatin-1)探讨了PEDV感染IPEC-J2细胞后引起的铁死亡在其感染过程中N蛋白的表达变化和病毒滴度的变化。蛋白组学的筛选结果:PEDV感染组Ferritin下调最显著;GO和KEGG富集分析结果均显示,铁代谢紊乱和脂代谢失调途径最显著,推测PEDV感染IPEC-J2后可能引起了铁死亡;感染细胞中MDA含量极显著升高,GSH含量极显著降低(P<0.01);Ferritin、GPX4、ACSL4和LPCAT3蛋白水平均极显著下调(P<0.01),并且TFRC蛋白水平极显著上调(P<0.01);荧光结果显示,Fe^(2+)相对荧光强度极显著增强、氧化型脂质ROS荧光强度极显著增强及线粒体膜电位极显著降低(P<0.01)。在添加Fer-1后PEDV的N蛋白水平和基因水平均极显著下调(P<0.01),并且Fer-1处理后病毒滴度也极显著下降(P<0.01)。PEDV感染IPEC-J2细胞可以引起细胞发生铁死亡,这可能是促进其复制的机制之一。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪小肠上皮细胞 铁死亡
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乳房链球菌感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢的影响 被引量：2
2
作者 卢劲晔 高亚兵 +2 位作者 韩心茹 刘钰臻 赵家玉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1766-1776,共11页
代谢是一切生理活动的基石,氨基酸代谢作为三大物质代谢之一,参与机体的多种生理活动,与宿主免疫细胞的功能有密切关系,在疾病的发展中具有不可替代的作用。为探究乳房链球菌(Streptococcus uberis,S.uberis)感染对乳腺上皮细胞中氨基... 代谢是一切生理活动的基石,氨基酸代谢作为三大物质代谢之一,参与机体的多种生理活动,与宿主免疫细胞的功能有密切关系,在疾病的发展中具有不可替代的作用。为探究乳房链球菌(Streptococcus uberis,S.uberis)感染对乳腺上皮细胞中氨基酸代谢的影响,本研究以S.uberis和乳腺上皮细胞系(EpH4-Ev)为研究对象,采用靶向氨基酸代谢组学技术对细胞中的氨基酸进行定量分析,并采用RT-qPCR和Western blot方法对关键氨基酸——精氨酸代谢通路关键酶进行验证。结果表明:S.uberis感染细胞后,细胞中甘氨酸、苏氨酸、鸟氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺的含量被显著上调(P<0.05),谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、组氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、赖氨酸和天冬氨酸的含量被显著下调(P<0.05),其中,精氨酸含量变化极显著(P<0.000 1,VIP>1.2),天冬酰胺和谷氨酰胺两种生糖氨基酸显著上升(P<0.05),赖氨酸和亮氨酸两种生酮氨基酸含量显著下降(P<0.05)。进一步研究精氨酸分解代谢通路发现:S.uberis感染乳腺上皮细胞会显著上调精氨酸代谢关键酶NOS2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),显著下调ARG1的表达水平(P<0.05)。与对照组相比,S.uberis感染乳腺后,显著上调了细胞中促炎因子IL-1β、TNF-α表达(P<0.05)。综上所述,S.uberis感染造成乳腺上皮细胞氨基酸代谢紊乱,加速细胞内精氨酸耗竭,诱发炎症反应。结果提示,精氨酸在宿主抵抗S.uberis感染过程中具有重要作用,可作为奶牛乳腺炎早期诊断和未来防治的突破口。 展开更多
关键词 乳房链球菌 氨基酸代谢 精氨酸 乳腺炎
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群养母猪饮水行为自动监测系统设计 被引量：25
3
作者 陆明洲 沈明霞 +3 位作者 丁永前 陈林锋 杨晓静 周波 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期133-138,共6页
为了解决群养母猪个体饮水行为的精准监测问题,提出一种饮水行为自动监测方法并设计了监测系统。采用射频标识技术、红外探测技术、多路信号嵌入式处理技术、ZigBee无线网络技术设计了远程饮水监测点;以STM32微控制器为核心扩展ZigBee... 为了解决群养母猪个体饮水行为的精准监测问题,提出一种饮水行为自动监测方法并设计了监测系统。采用射频标识技术、红外探测技术、多路信号嵌入式处理技术、ZigBee无线网络技术设计了远程饮水监测点;以STM32微控制器为核心扩展ZigBee模块及以太网接口设计具有协议转换功能的网关节点,实现饮水数据向本地服务器的转发;利用Visual C#及SQL Server构建了饮水行为管理信息系统,实现母猪饮水数据的存储、管理、远程发布。该系统在养殖场实地测试,结果表明,系统对群养母猪饮水频率监测准确率达到100%,能够实现母猪饮水行为的实时远程监测目标。 展开更多
关键词 群养母猪 动物行为 自动监测 饮水行为
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运输应激对猪淋巴结IL-2、IL-6和IL-10及其受体mRNA转录的影响 被引量：7
4
作者 吕琼霞 张书霞 赵茹茜 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期95-100,共6页
为研究运输应激对猪肠系膜淋巴结中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA转录的影响,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和核因子κB(NF-κB)对其转录的调控作用,用荧光定量RT-PCR方法对肠系膜淋巴结中3种细胞因子及其受体mRNA进行定量检测... 为研究运输应激对猪肠系膜淋巴结中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA转录的影响,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和核因子κB(NF-κB)对其转录的调控作用,用荧光定量RT-PCR方法对肠系膜淋巴结中3种细胞因子及其受体mRNA进行定量检测,用ELISA方法检测猪肠系膜淋巴结组织匀浆液中P38MAPK含量的动态变化,用激光扫描共聚焦显微镜观察运输前后NF-κB在肠系膜淋巴结细胞中的分布。结果显示:经1、2和4 h的运输应激,肠系膜淋巴结中3种细胞因子的转录均发生了显著变化,且均是4 h时达到最大值,并极显著高于对照组、1 h组和2 h组(P<0.01),而其相应受体的变化趋势不同。NF-κB在肠系膜淋巴结细胞中的表达呈逐渐上升趋势,到4 h时达到最大,其入核率也是同样的变化趋势。运输应激过程中P38MAPK含量没有明显的变化。结论:运输应激可引起猪肠系膜淋巴结细胞因子及其受体mRNA转录的急剧变化,且存在时效性;NF-κB的激活是调控猪肠系膜淋巴结相关细胞因子变化的一个重要因素。 展开更多
关键词 猪 运输应激 肠系膜淋巴结 细胞因子 P38MAPK 核因子ΚB
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过氧化氢诱导原代大鼠睾丸间质细胞氧化损伤模型的建立 被引量：6
5
作者 丁逍 刘琳 +1 位作者 陈迪 马海田 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期99-104,共6页
为了建立体外模拟氧自由基诱导的细胞氧化损伤模型，本试验采用Percoll密度梯度离心法纯化原代大鼠Leydig细胞，并鉴定特异性蛋白3t3-HSD；采用MTT法测定细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位、ROS以及O；含量，比色法测定... 为了建立体外模拟氧自由基诱导的细胞氧化损伤模型，本试验采用Percoll密度梯度离心法纯化原代大鼠Leydig细胞，并鉴定特异性蛋白3t3-HSD；采用MTT法测定细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位、ROS以及O；含量，比色法测定·OH、MDA的含量以及抗氧化物酶SOD、CAT和POD的活性。结果显示：特异性蛋白3B—HSD鉴定后，荧光显微镜观察到大部分细胞呈现特异性荧光。MTT测定结果显示，300～1000μmol·L～H2O2处理细胞均可极显著降低细胞活力（P〈0．01）；300μmol·L^-1H2O2处理可显著提高Leydig的凋亡率以及增加ROS含量（P〈0．05）和·OH含量（P〈0．01），但可显著降低线粒体膜电位（P〈0．05）。H2O2处理对Leydig细胞内SOD、CAT和POD的活性无显著影响（P〉0．05），但可显著提高细胞内MDA的含量（P〈0．05）。结论：300μmol·L^-1H2O2处理Leydig细胞8h可以诱导细胞氧化损伤从而建立体外模拟氧自由基诱导细胞氧化损伤模型。 展开更多
关键词 H2O2 睾丸间质细胞 氧化损伤
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血管紧张素转换酶2在维持肠道稳态中的作用 被引量：4
6
作者 李志强 肖航 张源淑 《动物医学进展》 北大核心 2020年第2期119-123,共5页
血管紧张素转换酶2(ACE2)是首先克隆出的人类血管紧张素转换酶(ACE)的同源基因,是肾素-血管紧张素系统(RAS)的关键调节因子,其主要通过水解血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)生成血管紧张素1-7[Ang(1-7)]从而发挥舒张血管、抗炎、抗增殖等作用。近期... 血管紧张素转换酶2(ACE2)是首先克隆出的人类血管紧张素转换酶(ACE)的同源基因,是肾素-血管紧张素系统(RAS)的关键调节因子,其主要通过水解血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)生成血管紧张素1-7[Ang(1-7)]从而发挥舒张血管、抗炎、抗增殖等作用。近期研究发现,ACE2不仅对心血管和肾功能等具有明显的调控作用,对抑制肠道炎症、维持肠道稳态、保护肠道健康等同样具有积极的影响。当前对ACE2在肠道健康领域的研究较少。论文就ACE2通过影响肠道微生态对维持肠道稳态作用的研究进行综述,为发掘ACE2的新功能提供参考。 展开更多
关键词 血管紧张素转换酶2 肾素-血管紧张素系统 调节因子 肠道稳态
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二脒那秦内源性激活血管紧张素转化酶2对细胞脂质沉积的抑制效应及其机制 被引量：2
7
作者 曹西月 付亚丽 +2 位作者 谢娜娜 张亚峰 张源淑 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2729-2738,共10页
旨在通过诱导3T3-L1前脂肪细胞转分化为3T3-L1脂肪细胞,探讨二脒那秦(DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(ACE 2)对细胞脂质沉积的抑制效应及机制。对3T3-L1前脂肪细胞转分化,将分化成功的3T3-L1脂肪细胞分为对照组、DIZE组(12.5、25μmo... 旨在通过诱导3T3-L1前脂肪细胞转分化为3T3-L1脂肪细胞,探讨二脒那秦(DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(ACE 2)对细胞脂质沉积的抑制效应及机制。对3T3-L1前脂肪细胞转分化,将分化成功的3T3-L1脂肪细胞分为对照组、DIZE组(12.5、25μmol·L^(-1)处理),siACE2组和siACE2+DIZE组(siACE2干扰后+25μmol·L^(-1)DIZE),作用48h,取上清和细胞进行试验:1)测定细胞上清中三酰甘油和葡萄糖含量;2)油红O染色细胞,并进行定量分析;3)Western blot检测细胞内ACE2和脂肪酸合成关键酶或因子FAS、ACC和SREBP-1c及葡萄糖转运蛋白GLUT4与氧化分解关键酶CS的蛋白表达水平。结果显示:1)成功诱导得到了3T3-L1脂肪细胞,前脂肪细胞诱导至第14天,有95%以上细胞内出现脂滴;2)确定了DIZE作用浓度为12.5和25μmol·L^(-1),处理时间为48h,并用该药物浓度及时间处理3T3-L1脂肪细胞,细胞上清中三酰甘油含量显著降低(P<0.05),葡萄糖含量显著升高(P<0.05);25μmol·L^(-1)DIZE处理组细胞脂滴减少,siACE2组无显著变化,siACE2+DIZE组脂滴蓄积介于对照组和DIZE组之间;25μmol·L^(-1)DIZE组ACE2蛋白水平显著高于对照组(P<0.05);siACE2组显著下调(P<0.05),siACE2+DIZE组较siACE2组无明显变化;3)与对照组相比25μmol·L^(-1)DIZE组细胞中FAS、ACC和SREBP-1c蛋白表达下调,siACE2组和siACE2+DIZE组则表达均上调;4)与对照组相比,25μmol·L^(-1)DIZE组GLUT4和CS蛋白表达水平显著上调(P<0.05),siACE2组和siACE2+DIZE组则均显著下调(P<0.05)。综上所述,DIZE处理通过介导脂肪细胞ACE2的内源性激活改善了脂肪细胞的脂肪沉积。其机理:一方面抑制脂质合成;另一方面促进葡萄糖摄取和氧化代谢,两方面协同减少了脂肪沉积。结果提示,ACE2或DIZE可作为防控脂肪沉积发生和发展的潜在靶点或药物。 展开更多
关键词 二脒那秦(DIZE) 血管紧张素转化酶2(ACE2) 脂质沉积
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二脒那秦通过内源性激活ACE2抑制AngⅡ-TGF-β1通路缓解小鼠肺纤维化
8
作者 曹西月 纪晓霞 +3 位作者 张崇昊 张亚峰 陈雨涛 张源淑 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2631-2640,共10页
本试验通过博来霉素诱导建立小鼠肺纤维化损伤模型,探究二脒那秦(diminazene aceturate,DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)对小鼠肺纤维化发生发展的缓解作用。将24只雄性ICR小鼠随机均分为对照... 本试验通过博来霉素诱导建立小鼠肺纤维化损伤模型,探究二脒那秦(diminazene aceturate,DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)对小鼠肺纤维化发生发展的缓解作用。将24只雄性ICR小鼠随机均分为对照组(CON组)、模型组(MOD组)和二脒那秦处理组(DIZE组)。除CON组外,其余2组小鼠一次性气管内注射博来霉素(5 mg·kg^(-1))建立肺纤维化损伤模型。造模1 d后,DIZE组小鼠给予DIZE[15 mg·(kg·d)^(-1)]灌胃处理,CON组和MOD组小鼠同等剂量灌胃生理盐水。连续灌胃28 d,采血后,处死所有小鼠,取肺组织,进行如下试验:(1)肺组织称重,计算小鼠肺系数;HE和Masson染色观察肺病理组织学变化;碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸的含量;(2)间接ELISA法检测血清中AngⅡ和Ang 1-7含量;(3)RT-qPCR及Western blot法检测肺组织中纤维化相关因子基因和蛋白等的表达水平。结果表明:(1)与CON组相比,MOD组小鼠肺系数及羟脯氨酸含量极显著或显著升高(P<0.01&P<0.05);肺组织出现明显病理变化,主要表现肺泡塌陷,炎性细胞浸润,肺泡间隔充血、增厚,有大量胶原纤维沉积。经DIZE处理后肺系数及羟脯氨酸含量显著或极显著降低(P<0.05&P<0.01);肺纤维化程度明显减轻;(2)与CON组相比,MOD组小鼠肺组织中ACE2蛋白表达下调,血清中AngⅡ含量极显著升高(P<0.01),Ang 1-7含量极显著降低(P<0.01);DIZE处理逆转了以上变化;(3)与CON组相比,MOD组小鼠肺组织中Col1a1和Col3a1基因表达极显著上调(P<0.01),α-SMA及TGF-β1基因和蛋白表达均极显著上调(P<0.01),上皮细胞的特征蛋白E-cadherin蛋白表达极显著下调(P<0.01);与MOD组相比,DIZE组缓解了以上变化。一次性气管内注射博来霉素,28 d后可成功诱导小鼠肺纤维化损伤,高水平的AngⅡ可能协同TGF-β1参与了小鼠的肺纤维化;DIZE可能通过内源性激活ACE2,降低AngⅡ的高水平,对小鼠的肺纤维化具有一定的缓解作用。 展开更多
关键词 小鼠 二脒那秦 血管紧张素转化酶2 AngⅡ-TGF-β1通路 肺纤维化
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血管紧张素转化酶2在冠状病毒感染及肺损伤中的作用研究进展
9
作者 付亚丽 曹西月 张源淑 《动物医学进展》 北大核心 2021年第12期106-111,共6页
血管紧张素转换酶2(ACE2)作为肾素-血管紧张素系统(RAS)的关键酶,与肺损伤疾病的发生发展密切相关,其可通过催化AngⅡ为Ang1-7,而Ang1-7则通过Mas受体发挥舒血管、抗炎、抗纤维化等抗AngⅡ的作用,抑制肺损伤。另一方面,近年来,COVID-19... 血管紧张素转换酶2(ACE2)作为肾素-血管紧张素系统(RAS)的关键酶,与肺损伤疾病的发生发展密切相关,其可通过催化AngⅡ为Ang1-7,而Ang1-7则通过Mas受体发挥舒血管、抗炎、抗纤维化等抗AngⅡ的作用,抑制肺损伤。另一方面,近年来,COVID-19在全球各地传播,造成极大的社会危害,ACE2作为SARS-CoV-2的功能受体,介导病毒侵入,在新冠肺炎发病机制中具有重要作用。论文就ACE2在肺脏中的抗损伤和病毒受体的双重作用做一综述,为治疗病毒性肺炎和肺损伤等疾病提供参考。 展开更多
关键词 血管紧张素转化酶2 冠状病毒 肺损伤 新型冠状病毒肺炎
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