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稳定表达猪德尔塔冠状病毒N蛋白的Vero细胞系的建立及鉴定 被引量:1
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作者 钱炳旭 薄宗义 +7 位作者 白雪雁 张成成 郭梦娇 李梦娇 廖凯 薛峰 吴艳涛 张小荣 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期56-61,共6页
为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)核衣壳(N)蛋白的非洲绿猴肾(Vero)细胞系,本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中,获得重组质粒pLVX-PDCoV-N,利用慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,慢病毒感染Vero细胞,... 为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)核衣壳(N)蛋白的非洲绿猴肾(Vero)细胞系,本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中,获得重组质粒pLVX-PDCoV-N,利用慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,慢病毒感染Vero细胞,嘌呤霉素加压筛选目的细胞。RT-PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列,Western blot和IFA试验表明N蛋白可在细胞系中稳定表达。应用制备的细胞系对临床PDCoV阳性血清样品进行检测,与ELISA检测结果符合率达到100%。本研究成功建立了稳定表达PDCoV N蛋白的Vero细胞系,为PDCoV N蛋白生物学特性研究和PDCoV的临床检测、流行病学调查奠定了基础。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 核衣壳(N)蛋白 慢病毒 稳转细胞系
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不同贮藏温度下进口生鲜牛肉中大肠杆菌生长预测模型的建立 被引量:8
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作者 陈雨 梁莹 +7 位作者 周萍萍 任建鸾 杨捷琳 郭德华 薛峰 蒋原 汤芳 戴建君 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第12期81-88,共8页
为了建立不同温度条件下进口生鲜牛肉中大肠杆菌O157:H7的生长预测模型。将于超市购买的进口生鲜牛肉和大肠杆菌O157:H7作为研究对象,监测其在4、16、25、30、37℃贮藏温度条件下进口生鲜牛肉中大肠杆菌生长数据,绘制生长曲线,采用修正G... 为了建立不同温度条件下进口生鲜牛肉中大肠杆菌O157:H7的生长预测模型。将于超市购买的进口生鲜牛肉和大肠杆菌O157:H7作为研究对象,监测其在4、16、25、30、37℃贮藏温度条件下进口生鲜牛肉中大肠杆菌生长数据,绘制生长曲线,采用修正Gompertz、Logistic、Richards、MMF四种模型进行拟合,建立进口生鲜牛肉中大肠杆菌一级模型,将一级模型拟合的数据代入Ratkowsky方程建立二级模型,通过准确因子、偏差因子以及均方根误差,对模型的准确性进行检验。结果表明,四种模型拟合后得到的相关系数均为0.98以上,修正Gompertz模型数据表明该模型拟合程度最好,最适合预测大肠杆菌在进口生鲜牛肉上的生长动态,模型的准确因子均为0.99,偏差因子为1.14和1.03,决定系数R~2为0.97和0.99,说明所建立的模型可靠性较高。本研究建立的生长预测模型能够有效预测4~37℃不同温度条件下大肠杆菌O157:H7在进口生鲜牛肉上的生长情况。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 进口 生鲜牛肉 贮藏温度 生长预测模型
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一种快速鉴别牛肉中大肠杆菌O157:H7检测方法的建立及应用 被引量:4
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作者 赵亚男 曾德新 +7 位作者 郭德华 蒋原 蒋鲁岩 李鑫妮 陈伟 汤芳 薛峰 戴建君 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期272-279,296,共9页
目的建立一种快速、准确检测牛肉中大肠杆菌O157∶H7的方法。方法利用抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体2G5(捕获抗体),酶标单克隆抗体2E3(HRP-2E3,检测抗体),建立可用于检测大肠杆菌O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法,同时对反应条件进行优化... 目的建立一种快速、准确检测牛肉中大肠杆菌O157∶H7的方法。方法利用抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体2G5(捕获抗体),酶标单克隆抗体2E3(HRP-2E3,检测抗体),建立可用于检测大肠杆菌O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法,同时对反应条件进行优化并对该方法进行评价。结果通过优化得到最佳反应条件,单克隆抗体2G5最佳包被浓度为4.48μg/mL,HRP-2E3最佳检测浓度为19.9μg/mL。该方法对纯培养菌液最低检出限为1×10^5 CFU/mL,具有良好的敏感性,且特异性良好,与其他大肠杆菌、沙门氏菌、李斯特菌等均无交叉反应。板内及板间变异系数均小于7%,具有较高的精密度。人工污染牛肉样品增菌8 h后,对大肠杆菌O157∶H7的检出限为1 CFU/25 g。结论建立的双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度、准确度、重复性良好,特异性强,可用于临床实际样品检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157∶H7 双抗体夹心ELISA 单克隆抗体 牛肉
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市售蜂蜜中残留细菌的分离与鉴定 被引量:1
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作者 曾德新 厉蓉蓉 +5 位作者 张娜 封振 许蔚 张锐 周俊 蒋鲁岩 《美食研究》 北大核心 2021年第3期75-81,共7页
从南京市筛选92份菌落总数测定值>10 CFU/g的蜂蜜样品进行菌种分析,以了解市售蜂蜜样品中主要残留菌;参考我国蜂蜜生产工艺,对蜂蜜中主要残留菌设计50~121℃的热处理评价实验,以了解目前主流生产工艺对蜂蜜中主要残留菌的消杀效果及... 从南京市筛选92份菌落总数测定值>10 CFU/g的蜂蜜样品进行菌种分析,以了解市售蜂蜜样品中主要残留菌;参考我国蜂蜜生产工艺,对蜂蜜中主要残留菌设计50~121℃的热处理评价实验,以了解目前主流生产工艺对蜂蜜中主要残留菌的消杀效果及主要残留菌的完全致死温度。结果表明:市售蜂蜜中主要残留菌种为蜡样芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌,其分离率分别为71%和24%;热处理评价试验表明,主流生产工艺无法完全灭活蜂蜜中主要残留菌,50℃处理30 min,蜡样芽孢杆菌灭活率为87.88%,枯草芽孢杆菌灭活率为80.32%,当温度大于100℃时可使上述两种菌完全灭活。 展开更多
关键词 蜂蜜 残留细菌 分离 鉴定
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