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马链球菌兽疫亚种类M基因和猪链球菌2型mrp基因片段的融合表达及仔猪免疫试验 被引量:13
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作者 范红结 陆承平 唐家琪 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期78-81,共4页
将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量... 将含猪链球菌 2型mrp及马链球菌兽疫亚种类M基因融合片段的重组质粒转化大肠杆菌BL 2 1,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,表达了相对分子质量为 6 0 0 0 0左右的融合蛋白。利用组氨酸亲和层析柱 ,获得了纯化的融合蛋白 ,质量浓度为 4 2 μg·mL-1。以纯化的融合蛋白、宿主菌BL 2 1经IPTG诱导表达后的超声波破碎上清、马链球菌兽疫亚种ATCC 35 2 4 6株和猪链球菌 2型HA 980 1株制备的二联灭活苗为免疫原 ,分别免疫 30头仔猪。初次免疫 1月后 ,以同样的剂量再次免疫 ,3周后以 5×LD50 的ATCC 35 2 4 6和HA 980 1强毒株进行攻击。结果 ,纯化融合蛋白免疫组的免疫保护率达 6 0 % ,BL 2 1上清免疫组的免疫保护率为 5 0 % ,全菌二联灭活菌苗的免疫保护率达 90 %。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种M基因 猪链球菌2型mrp基因 融合表达 仔猪 免疫试验 链球菌病 二联疫苗
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2型鸭疫里氏杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量:12
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作者 程龙飞 施少华 +4 位作者 傅光华 李文杨 彭春香 黄瑜 陈溥言 《福建农业学报》 CAS 2006年第2期131-134,共4页
以2型鸭疫里氏杆菌裂解物作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的兔抗鸭IgG抗体为第二抗体,以TMB为显色剂,成功地建立了检测鸭血清中2型鸭疫里氏杆菌抗体的间接EL1SA方法。经检测表明该方法特异性强,敏感性比常规的试管凝集试验高320倍。... 以2型鸭疫里氏杆菌裂解物作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的兔抗鸭IgG抗体为第二抗体,以TMB为显色剂,成功地建立了检测鸭血清中2型鸭疫里氏杆菌抗体的间接EL1SA方法。经检测表明该方法特异性强,敏感性比常规的试管凝集试验高320倍。以该方法对免疫2型鸭疫里氏杆菌灭活油乳剂疫苗的试验鸭进行抗体水平的跟踪测定,发现试验鸭于免疫后7d开始产生抗体,28d达到最高峰,然后开始下降,于免疫后56d其抗体水平仍高于免疫后14d的水平。 展开更多
关键词 2型鸭疫里氏杆菌 抗体检测 间接酶联免疫吸附试验
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表达NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的构建 被引量:2
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作者 苏春霞 张彦明 +2 位作者 张雪莲 徐学清 陈溥言 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第1期1-4,共4页
 将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700bp克隆到真核表达载体pIRES中,构建成表达F基因的载体pIRESF,然后将包含F基因及其上游的内含子和下游的polyA的2900bpDNA片段再克隆入包含gB启动子的SK载体中,并使其克隆到gB启动子600bp...  将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700bp克隆到真核表达载体pIRES中,构建成表达F基因的载体pIRESF,然后将包含F基因及其上游的内含子和下游的polyA的2900bpDNA片段再克隆入包含gB启动子的SK载体中,并使其克隆到gB启动子600bp的下游,最后将包含gB启动子和F基因表达盒3500bp克隆到包含MDVCVI988非必须片段US10的载体SK中。该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的MDVCVI988重组病毒奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 马立克氏病病毒CVI988转移质粒载体
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猪圆环病毒检测方法的研究进展 被引量:4
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作者 许立华 芦银华 +1 位作者 王玲 陈溥言 《农业科学研究》 2004年第1期73-76,共4页
综述了国内外检测猪圆环病毒的各种方法 ,包括病毒检测、病毒抗体检测等 ,便于全面了解猪圆环病毒的研究进展。
关键词 猪圆环病毒 检测方法 研究进展
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猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 被引量:2
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作者 许立华 王玲 +1 位作者 刘华雷 陈溥言 《宁夏农学院学报》 2004年第2期71-75,共5页
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪的一种新传染病 ,分布广泛且对养猪业造成巨大损失 .就猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构、基因组编码蛋白、病毒结构蛋白的抗原性等方面的研究进展进行综述 ,为相关研究提供重要... 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪的一种新传染病 ,分布广泛且对养猪业造成巨大损失 .就猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构、基因组编码蛋白、病毒结构蛋白的抗原性等方面的研究进展进行综述 ,为相关研究提供重要依据 . 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因组 编码蛋白 抗原性
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含NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的真核表达
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作者 苏春霞 苏鑫铭 +3 位作者 张彦明 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第5期59-62,共4页
为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移... 为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移质粒载体已经进入细胞DNA;转染转移质粒载体 pUS10F后的293 T细胞所表达的NDV F基因产物抗原性较好,能够与抗NDV的标准血清反应。确定的最佳转染条件为:DNA 3μg/mL,转染后48 h外源基因在细胞中的表达量最高,在6孔板和96孔板中细胞数量分别以 2×105/孔和1×101/孔的转染效果最好。 展开更多
关键词 畜禽疫病 新城疫病毒 F基因 马立克氏病病毒CVI988转移质粒载体
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