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汉赛巴尔通体17-kDa蛋白的表达及间接ELISA方法的建立
被引量：
2
1
作者
程王琨
常晨
+3 位作者
马培培
陈攀
郑芳园
李玉峰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1616-1621,共6页
为探讨中国猪群中是否存在巴尔通体感染情况,作者将汉赛巴尔通体17-kDa蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,然后将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-17kDa,导入大肠杆菌BL21感受态细胞中...
为探讨中国猪群中是否存在巴尔通体感染情况,作者将汉赛巴尔通体17-kDa蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,然后将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-17kDa,导入大肠杆菌BL21感受态细胞中,进行诱导表达,并用Ni-NTA纯化试剂进行纯化;纯化后的蛋白应用His单抗进行鉴定。以17-kDa蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立检测抗汉赛巴尔通体17-kDa蛋白抗体的间接ELISA方法。结果如下:抗原包被量0.4μg·mL-1,37℃包被2h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭3h,待检血清1∶100稀释后,37℃孵育1h,二抗1∶15 000稀释,37℃作用30min,抗体临界值OD450nm≥0.392判为阳性,OD450nm≤0.332 6判为阴性,介于二者之间为可疑。建立的ELISA与猪嗜血支原体、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪口蹄疫病毒等感染血清无交叉反应,批间和批内重复性较好,对379份血清样品进行检测,抗体阳性检出率达51.72%。该方法可用于汉赛巴尔通体抗体检测和流行病学调查。
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关键词
巴尔通体
17-kDa蛋白
间接ELISA
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职称材料
题名
汉赛巴尔通体17-kDa蛋白的表达及间接ELISA方法的建立
被引量：
2
1
作者
程王琨
常晨
马培培
陈攀
郑芳园
李玉峰
机构
南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1616-1621,共6页
基金
公益性行业(农业)科研专项(200903036-10)
文摘
为探讨中国猪群中是否存在巴尔通体感染情况,作者将汉赛巴尔通体17-kDa蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,然后将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-17kDa,导入大肠杆菌BL21感受态细胞中,进行诱导表达,并用Ni-NTA纯化试剂进行纯化;纯化后的蛋白应用His单抗进行鉴定。以17-kDa蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立检测抗汉赛巴尔通体17-kDa蛋白抗体的间接ELISA方法。结果如下:抗原包被量0.4μg·mL-1,37℃包被2h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭3h,待检血清1∶100稀释后,37℃孵育1h,二抗1∶15 000稀释,37℃作用30min,抗体临界值OD450nm≥0.392判为阳性,OD450nm≤0.332 6判为阴性,介于二者之间为可疑。建立的ELISA与猪嗜血支原体、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪口蹄疫病毒等感染血清无交叉反应,批间和批内重复性较好,对379份血清样品进行检测,抗体阳性检出率达51.72%。该方法可用于汉赛巴尔通体抗体检测和流行病学调查。
关键词
巴尔通体
17-kDa蛋白
间接ELISA
Keywords
Bartonella
17-kDa protein
indirect ELISA
分类号
S852.64 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
汉赛巴尔通体17-kDa蛋白的表达及间接ELISA方法的建立
程王琨
常晨
马培培
陈攀
郑芳园
李玉峰
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
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