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共表达口蹄疫病毒VP1-2A基因与猪IL-2重组腺病毒的构建及其免疫效果研究 被引量：3
1
作者 苏春霞 段相国 +3 位作者 郑洁 林源 郭琳 陈溥言 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期1-5,共5页
构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨... 构建共表达口蹄疫病毒(FMDV)VP1-2A基因和猪白细胞介素2(IL-2)基因的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。将FMDV VP1-2A基因和猪IL-2基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中,在受体菌中与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3同源重组。重组腺病毒质粒转染HEK-293A细胞,得到重组腺病毒rAd5VP1-2A-Po IL-2。MTT法检测重组IL-2的生物活性。用rAd5VP1-2A-poIL-2免疫接种小鼠,同时设免疫单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1和空腺病毒的对照组。通过检测淋巴细胞增殖功能,特异性抗体分泌,IL-4和IFN-γ的表达水平衡量rAd5VP1-2A-poIL-2对小鼠特异性免疫应答的影响。结果显示,成功获得了rAd5VP1-2A-poIL-2,MTT法检测重组IL-2具有生物学活性。小鼠免疫试验结果显示,与rAd5VP1免疫组相比,rAd5VP1-2ApoIL-2免疫既能增强重组病毒诱导小鼠淋巴细胞增殖的能力,又能提高重组病毒诱导小鼠特异性抗体的水平。细胞因子检测结果显示,串联IL-2能促进重组病毒诱导Th1和Th2的分化。研究结果说明,rAd5VP1-2A-poIL-2可望成为口蹄疫的候选疫苗。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 重组腺病毒 VP1-2A基因 白细胞介素2
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共表达口蹄疫病毒VP1-2A与猪IFN-α的重组腺病毒增强小鼠免疫功能 被引量：1
2
作者 苏春霞 段相国 +2 位作者 曹瑞兵 郑洁 陈溥言 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1129-1132,共4页
目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行... 目的构建串联表达口蹄疫病毒VP1-2A和猪干扰素-α的重组腺病毒,并研究重组病毒对小鼠特异性免疫的影响。方法将FMDV VP1-2A基因和α干扰素基因先后克隆到腺病毒的穿梭载体中,得到的阳性穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。重组腺病毒质粒感染HEK293A细胞,获得重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。用rAd5VP1-2ApoIFN-α免疫BALB/c小鼠,同时设注射单独表达FMDV VP1的重组腺病毒(rAd5VP1)和空腺病毒的对照组。通过ELISA检测血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平;MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果成功构建了共表达FMDV VP-2A和IFN-α的重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α。小鼠免疫实验结果显示,与单独表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5VP1相比,重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能增强特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,促进IL-4和IFN-γ的分泌,并能增强小鼠淋巴细胞增殖功能。结论重组腺病毒rAd5VP1-2A-poIFN-α能明显增强小鼠特异性免疫应答。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 重组腺病毒 VP1基因 干扰素-Α
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重组白介素-2增强口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究 被引量：1
3
作者 苏春霞 段相国 陈溥言 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第12期1-4,共4页
通过研究重组白细胞介素-2(IL-2)对口蹄疫病毒(FMDV)多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为FMDV表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性Balb/c小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪IL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)和串联表达FMDV多表位... 通过研究重组白细胞介素-2(IL-2)对口蹄疫病毒(FMDV)多表位疫苗免疫效果的增强作用,为IL-2作为FMDV表位疫苗佐剂应用提供实验依据。6周龄雌性Balb/c小鼠,分为4组,第1组联合免疫表达猪IL-2的重组腺病毒(rAd5poIL-2)和串联表达FMDV多表位基因的重组腺病毒(rAd5EGS),第2、3和4组分别注射rAd5EGS、灭活疫苗和PBS,间隔2周免疫1次,共免疫3次。首免后每周采血分离小鼠血清,通过ELISA检测血清中特异性IgG;首免后6周检测血清中抗体亚型IgG1、IgG2a及细胞因子IL-4和IFN-γ的表达水平,同时分离脾细胞,MTT法检测淋巴细胞增殖指数。结果显示,联合免疫rAd5poIL-2和rAd5EGS既能增强rAd5EGS诱导小鼠特异性IgG、IgG1和IgG2a的分泌,又能增强其诱导淋巴细胞增殖能力,且免疫效果强于灭活疫苗;细胞因子检测结果显示,联合免疫rAd5poIL-2后能增强rAd5EGS诱导小鼠IL-4和IFN-γ的分泌,且其诱导IL-4和IFN-γ分泌能力也强于灭活疫苗。说明重组IL-2能有效增强FMDV多表位疫苗诱导抗体分泌能力和细胞免疫应答,rAd5poIL-2有望作为FMDV表位疫苗的候选佐剂。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 多表位疫苗 佐剂 白细胞介素-2
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用PCR、斑点杂交及间接免疫荧光试验诊断鸡传染性贫血的初步研究 被引量：2
4
作者 孙伟 吴中勤 +2 位作者 胡青海 李树香 李刚 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期69-72,共4页
利用地高辛标记的０８５ ｋｂ 的鸡传染性贫血病毒 （ Ｃ Ａ Ｖ） 核酸探针， 对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ 的１５～３０日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行斑点杂交。结果在被检的２０份样品中有６份为阳性，阳性率为３０％ 。对相同样... 利用地高辛标记的０８５ ｋｂ 的鸡传染性贫血病毒 （ Ｃ Ａ Ｖ） 核酸探针， 对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ 的１５～３０日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行斑点杂交。结果在被检的２０份样品中有６份为阳性，阳性率为３０％ 。对相同样品根据已知引物（特异性扩增出 Ｃ Ａ Ｖ 的０５８ ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ） 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增， 所得结果与斑点杂交相同。对应的病鸡血清经间接免疫荧光试验 （ Ｉ Ｆ Ａ）， 有７份为 Ｃ Ａ Ｖ 抗体阳性， 与 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增结果的符合率为８３％ 。初步结果表明， 江苏某地区存在 Ｃ Ａ Ｖ 感染。 展开更多
关键词 鸡 传染性贫血 病毒 核酸探针 间接免疫荧光 PCR
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实时荧光定量PCR技术及在猪重大疫病中的诊断应用
5
作者 周斌 《猪业科学》 2011年第8期40-44,共5页
实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术具有操作简便、特异性强、... 实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、快速高效、全封闭反应、高通量等特点。随着现代医学和分子生物学的飞速发展,该技术已在兽医诊断研究及临床应用方面发挥着越来越大的作用。文章对FQ-PCR的原理、分类以及在猪重大疫病的诊断应用进行了综述。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 猪 重大疫病 诊断
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猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究 被引量：25
6
作者 董信田 李玉峰 +3 位作者 姜平 王先炜 冯志新 俞俐莉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期639-644,共6页
猪圆环病毒2型(PCV2)经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和... 猪圆环病毒2型(PCV2)经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下:①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著(P<0.05)。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 油佐剂 氢氧化铝佐剂 灭活苗
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免疫刺激商品断奶仔猪复制多系统衰竭综合征(PMWS) 被引量：13
7
作者 王先炜 姜平 +4 位作者 韦显凯 李广明 李军星 董信田 蒋文明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期66-71,共6页
猪圆环病毒2型(PCV2)是引起PMWS的必需病原,与其他病原混合感染或受到外界刺激时表现PMWS临床症状。本试验将16头商品化断奶仔猪(32日龄)随机分为4组(每组4头),即对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组、PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白... 猪圆环病毒2型(PCV2)是引起PMWS的必需病原,与其他病原混合感染或受到外界刺激时表现PMWS临床症状。本试验将16头商品化断奶仔猪(32日龄)随机分为4组(每组4头),即对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组、PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组,用上海某猪场分离株PCV2-SH、钥匙孔血蓝蛋白(KLH)反复刺激断奶仔猪以复制PMWS。其中对照组、钥匙孔血蓝蛋白刺激组未出现症状;PCV2攻毒组症状较轻,出现增重缓慢,伴有短暂的体温升高;而PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组出现明显的临床症状,2头猪在攻毒后第11天濒临死亡,其中1头在第12天死亡,攻毒猪宰杀后脏器出现明显的病理变化。PCV2攻毒组和PCV2攻毒后钥匙孔血蓝蛋白刺激组于攻毒后第4天出现病毒血症,宰杀后肺脏、淋巴结均检测到PCV2的DNA。以上结果说明,PCV2-SH感染结合免疫刺激可以引起商品化仔猪发生PMWS,为PCV2致病机理和免疫学研究提供了动物发病模型。 展开更多
关键词 PCV2 免疫刺激 断奶仔猪 仔猪多系统衰竭综合征 复制
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PRRSV与PCV2体外共感染对猪肺泡巨噬细胞免疫学功能的影响 被引量：12
8
作者 冯志新 姜平 +1 位作者 王先炜 李玉峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期950-955,共6页
制备猪肺泡巨噬细胞,分别接种PCV2、PRRSV、PCV2+PRRSV(先接种PCV2,12h后接种PRRSV)、PRRSV+PCV2(先接种PRRSV,12h后接种PCV2)、PRRSV/PCV2(同时接种)和对照组。接种后不同时间观察细胞病变(CPE),并用real-time PCR和IFA方法检测PRRSV和... 制备猪肺泡巨噬细胞,分别接种PCV2、PRRSV、PCV2+PRRSV(先接种PCV2,12h后接种PRRSV)、PRRSV+PCV2(先接种PRRSV,12h后接种PCV2)、PRRSV/PCV2(同时接种)和对照组。接种后不同时间观察细胞病变(CPE),并用real-time PCR和IFA方法检测PRRSV和PCV2滴度,INF-α、INF-γ、TNF-α、IL-8和IL-10的mRNA。结果为:①PRRSV能在PAM中增殖,有CPE;PCV2在PAM中感染率较低,无CPE。②PRRSV对PCV2增殖无明显影响。PCV2先于或同时与PRRSV感染对PRRSV的复制具有抑制作用,而PCV2后于PPRSV感染,可促进PRRSV增殖。③PCV2单独感染PAM后能促进INF-α、INF-γ、IL-8和IL-10的大量表达,对TNF-α的表达量影响不大。④PCV2与PRRSV混合感染,尤其是PCV2后于PRRSV感染后,TNF-α、IL-8和IL-10的表达量与单感染组相比明显增加,而INF-γ的表达量明显受到抑制。实验结果表明,PCV2感染时间对PRRSV的增殖影响不同,PRRSV感染后如果再感染PCV2,可以明显促进PRRSV病毒增殖;两种病毒共同刺激了TNF-α、IL-8和IL-10的大量表达,抑制了抗病毒因子INF-γ的表达,从而可能抑制体液免疫和细胞免疫,加重了病理学免疫应答。 展开更多
关键词 PRRSV PCV2 共感染 猪肺泡巨噬细胞 免疫学功能
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口蹄疫病毒实时RT-PCR检测方法的建立 被引量：15
9
作者 李永东 张常印 +3 位作者 姜平 唐泰山 杨晓伟 杜以军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期212-215,258,共5页
目的用TaqMan技术建立了一种实时RT-PCR的方法,用于检测口蹄疫病毒,并优选出最佳检测样品。方法设计合成一套引物和TaqMan探针,通过反应条件的优化,建立实时RT-PCR的方法,以扩增口蹄疫病毒的3D基因,并用该法检测患病仔猪的气管、前肢肌... 目的用TaqMan技术建立了一种实时RT-PCR的方法,用于检测口蹄疫病毒,并优选出最佳检测样品。方法设计合成一套引物和TaqMan探针,通过反应条件的优化,建立实时RT-PCR的方法,以扩增口蹄疫病毒的3D基因,并用该法检测患病仔猪的气管、前肢肌肉、皮肤、舌、颈浅淋巴结、脾脏、喉头、食管、腹股沟淋巴结、肺脏、扁桃体、肝脏、肾脏、胸肌、心脏、鼻黏膜、后肢肌肉、脑、骨髓、软腭和血清等样品。结果(1)该方法检测FMDV下限为0.01TCID50,其敏感性比普通RT-PCR高100倍,并具有较好的特异性和重复性,(2)FMDV感染仔猪血清、淋巴结、扁桃体和肝脏中病毒含量较高是检测口蹄疫病毒很好的样品。结论建立了一种实时RT-PCR检测口蹄疫病毒的方法。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 TAQMAN 实时RT-PCR
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用聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测无包埋体对虾病毒 被引量：9
10
作者 朱山 郭福生 +2 位作者 涂小林 陆承平 吴时友 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期86-91,共6页
聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测证明，某虾场发病的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）感染无包埋体对虾病毒（ＮＯＳＶ），或称中国对虾类杆状病毒（ＰｃＢＬＶ）；野生脊尾白虾（Ｅｓｏｐａｌａｅｍｏｎｃａｒａｉｎｉｃａｕ... 聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测证明，某虾场发病的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）感染无包埋体对虾病毒（ＮＯＳＶ），或称中国对虾类杆状病毒（ＰｃＢＬＶ）；野生脊尾白虾（Ｅｓｏｐａｌａｅｍｏｎｃａｒａｉｎｉｃａｕｄａ）也感染ＮＯＳＶ，并可能经卵垂直传播；南美白对虾（（Ｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉ）亦可感染该病毒而发病。经ＰＣＲ扩增纯化的皮下及造血组织坏死症杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）与ＮＯＳＶ的核酸结果表明，两者为同一种病毒。选取经ＰＣＲ检测的９份样品，重新编号后用ＥＬＩＳＡ法进行检测，两种方法判定的结果完全相同。将ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ双阳性的样品制备超薄切片，观察到ＮＯＳＶ感染的典型细胞病变。可以认为，在国内流行的中国对虾“暴发病”病原为ＮＯＳＶ。 展开更多
关键词 对虾 病原 无包埋体 对虾病毒 PCR ELISA
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猪α干扰素对猪圆环病毒2型亚单位疫苗免疫效果的影响 被引量：14
11
作者 曹瑞兵 周国栋 陈溥言 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期867-872,共6页
为了评估酵母表达的PCV2 Cap蛋白在猪体的免疫特性以及猪α干扰素对其的免疫佐剂效果,将酵母表达的PCV2 Cap蛋白配比适量的铝胶或重组猪α干扰素制成亚单位疫苗。30日龄仔猪分别接种铝胶佐剂亚单位疫苗和猪α干扰素佐剂亚单位疫苗,同时... 为了评估酵母表达的PCV2 Cap蛋白在猪体的免疫特性以及猪α干扰素对其的免疫佐剂效果,将酵母表达的PCV2 Cap蛋白配比适量的铝胶或重组猪α干扰素制成亚单位疫苗。30日龄仔猪分别接种铝胶佐剂亚单位疫苗和猪α干扰素佐剂亚单位疫苗,同时设攻毒对照与空白对照,首免后21 d加强免疫,二免后14 d用PCV2 JS株攻毒。铝胶佐剂亚单位疫苗免疫猪体后产生了PCV2特异性中和抗体。猪α干扰素佐剂亚单位疫苗组仔猪免疫后产生的ELISA抗体和中和抗体都显著高于铝胶亚单位疫苗组仔猪。攻毒对照组的4只仔猪攻毒后全都产生了病毒血症,并有较长时间的发热;铝胶亚单位疫苗组4头仔猪中只有1头仔猪产生病毒血症,添加猪α干扰素亚单位疫苗组的仔猪攻毒后都没有产生病毒血症。综合分析试验猪的病毒感染、临床表现和生产性能等情况表明Cap蛋白亚单位疫苗具有免疫保护效果,猪α干扰素可显著增强Cap蛋白亚单位疫苗接种仔猪的体液免疫反应,提高PCV-2 Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护效果。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 重组CAP蛋白 免疫特性 猪Α干扰素 免疫佐剂
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山羊痘暴发流行的诊断 被引量：15
12
作者 郭爱珍 姚火春 +2 位作者 唐泰山 陆承平 张振岚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第9期14-15,共2页
关键词 羊痘病毒 山羊痘 暴发 流行 诊断
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法氏囊提取物对小鼠免疫功能的影响 被引量：5
13
作者 张德明 戴亚斌 +4 位作者 许立华 龚远鹰 杨仁全 李刚 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期70-74,共5页
ICR小鼠用伪狂犬病毒 (Pseudorabiesvirus ,PRV)灭活苗免疫 ,同时每只分别注射 0 1,0 2 5和 1mg或口服 0 2 5mg法氏囊 (bursaoffabricius ,BF)提取物 (相对分子质量小于 10 0 0 )。对各试验组小鼠器官指数、白细胞数、淋巴细胞数、... ICR小鼠用伪狂犬病毒 (Pseudorabiesvirus ,PRV)灭活苗免疫 ,同时每只分别注射 0 1,0 2 5和 1mg或口服 0 2 5mg法氏囊 (bursaoffabricius ,BF)提取物 (相对分子质量小于 10 0 0 )。对各试验组小鼠器官指数、白细胞数、淋巴细胞数、淋巴细胞非特异酯酶染色阳性数 (acidα naphthylacetatcesterase ,ANAE+ )、PRV抗体水平、脾脏组织学变化和攻毒试验结果等各种免疫学指标进行检测和比较 ,探讨法氏囊提取物对试验个体的免疫力影响。结果表明 :中等剂量 (每只0 2 5mg)的法氏囊提取物能够不同程度地提高小鼠的体液免疫力和细胞免疫力 ,注射途径较口服的好 ;而高剂量 (每只1mg)的法氏囊提取物可提高小鼠的体液免疫 ,但对机体的细胞免疫却有抑制作用。法氏囊提取物对小鼠免疫功能的影响与接种的剂量、途径及时间有关。 展开更多
关键词 免疫功能 法氏囊提取物 剂量 接种途径 接种时间 免疫力
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传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白基因及其表达产物免疫学试验 被引量：6
14
作者 姜平 陈溥言 +1 位作者 蔡宝祥 黄兵 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期100-103,共4页
用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡，免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价，并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示... 用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡，免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价，并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示：（１）ＶＰ２基因重组质粒ＤＮＡ除可诱导产生较高的ＥＬＩＳＡ抗体外，还可明显降低仔鸡ＩＢＤＶ攻击所引起的急性发病率和死亡率；（２）ＶＰ３－ＧＳＴ融合蛋白表达产物全菌裂解液可较早地诱导产生ＥＬＩＳＡ抗体，但对ＩＢＤＶ野毒株攻击只提供部分保护；（３）ＶＰ２和ＶＰ３表达产物无明显协同作用。 展开更多
关键词 结构蛋白基因 表达产物 免疫学试验 鸡病 IBD
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大肠杆菌DNA作佐剂的鸡新城疫灭活疫苗的免疫效果 被引量：5
15
作者 唐泰山 郭爱珍 陆承平 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期76-78,共3页
用大肠杆菌DNA作为鸡新城疫灭活苗的佐剂接种 15日龄雏鸡 ,以鸡新城疫油乳剂灭活苗为对照 ,用血凝抑制实验检测病毒特异性血凝抑制抗体。结果表明 ,大肠杆菌DNA及油乳剂两种佐剂均能增强特异性血凝抑制抗体的效价 ,二者组间抗体滴度差... 用大肠杆菌DNA作为鸡新城疫灭活苗的佐剂接种 15日龄雏鸡 ,以鸡新城疫油乳剂灭活苗为对照 ,用血凝抑制实验检测病毒特异性血凝抑制抗体。结果表明 ,大肠杆菌DNA及油乳剂两种佐剂均能增强特异性血凝抑制抗体的效价 ,二者组间抗体滴度差异不显著 ,但大肠杆菌DNA佐剂组雏鸡的体重明显高于油乳佐剂组 (P <0 0 1)。 展开更多
关键词 大肠杆菌DNA 鸡 新城疫 灭活疫苗 佐剂 免疫效果 抗体效价
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细菌DNA可显著增强豚鼠接种猪链球菌溶血素的免疫效果 被引量：5
16
作者 唐泰山 郭爱珍 +1 位作者 陆承平 许冬青 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期477-479,497,共4页
目的 :研究大肠杆菌DNA的免疫增强效果。方法 :用提取的大肠杆菌DNA、合成CpG ODN、弗氏佐剂、蜂胶等不同佐剂分别与猪链球菌溶血素配合 ,免疫 10日龄豚鼠 ,用溶血抑制实验、MTT法和细胞流式技术分别检测豚鼠体液免疫和细胞免疫状态。结... 目的 :研究大肠杆菌DNA的免疫增强效果。方法 :用提取的大肠杆菌DNA、合成CpG ODN、弗氏佐剂、蜂胶等不同佐剂分别与猪链球菌溶血素配合 ,免疫 10日龄豚鼠 ,用溶血抑制实验、MTT法和细胞流式技术分别检测豚鼠体液免疫和细胞免疫状态。结果 :经组间单因素相关性分析 ,大肠杆菌DNA、合成CpG ODN和弗氏佐剂均能明显地增强豚鼠特异的体液免疫与细胞免疫 ,其中 ,所用大肠杆菌DNA的刺激溶血抑制抗体的活性与合成CpG ODN相当 (P >0 0 5 ) ,脾淋巴细胞刺激活性与弗氏佐剂相当 (P >0 0 5 )。结论 :所提取的大肠杆菌DNA具有强烈的免疫刺激作用 。 展开更多
关键词 细菌DNA 免疫增强 猪链球菌溶血素 豚鼠
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性单克隆抗体的制备与免疫学特性测定 被引量：3
17
作者 马苏 戴建君 +2 位作者 李玉峰 段舒怡 姜平 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期72-76,共5页
利用重组真核质粒pcDNA3-GP5免疫BALB／c小鼠，取脾细胞和骨髓瘤细胞SP2／0融合，经间接ELISA筛选和3次有限稀释法克隆，得到3株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的单克隆抗体（McAb）杂交瘤细胞株，分别命名为4C9、... 利用重组真核质粒pcDNA3-GP5免疫BALB／c小鼠，取脾细胞和骨髓瘤细胞SP2／0融合，经间接ELISA筛选和3次有限稀释法克隆，得到3株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的单克隆抗体（McAb）杂交瘤细胞株，分别命名为4C9、5D10、5F12，其中5D10的Ig亚类为IgM。ELISA检测杂交瘤细胞培养上清液抗体的效价为1：64～1：1024，腹水的效价为1：3200～1：10240，IFA和IPMA的检测结果均为阳性。Western-blot检测证明，这3株McAb均针对PRRSV的GP5蛋白。中和试验表明，5D10和5F12具有病毒中和活性，中和效价分别为1：40和1：80。5D10相对亲和力大于5F12，3株细胞连续培养20代后仍能稳定分泌抗体，表明抗GP5蛋白中和性McAb制备成功。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5蛋白 单克隆抗体 中和抗体
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DNA免疫法研制抗猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白中和性单克隆抗体 被引量：3
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作者 马苏 姜平 +1 位作者 李玉峰 段舒怡 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期929-932,共4页
目的：研制抗PRRSVM蛋白的单克隆抗体（McAb），以期获得中和性单克隆抗体。方法：将PRRSVM蛋白的基因克隆入真核表达载体pcDNA3．1，利用构建成的重组真核质粒免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗PRRSVM蛋白的单抗，建立间接ELISA... 目的：研制抗PRRSVM蛋白的单克隆抗体（McAb），以期获得中和性单克隆抗体。方法：将PRRSVM蛋白的基因克隆入真核表达载体pcDNA3．1，利用构建成的重组真核质粒免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗PRRSVM蛋白的单抗，建立间接ELISA方法筛选阳性克隆。利用试剂盒检测Ig亚类。通过免疫印迹（Western blot）、间接免疫荧光试验（IFA）鉴定McAb的特异性。间接ELISA和病毒中和试验检测杂交瘤细胞上清McAb效价和腹水McAb效价。结果：获得3株可分泌特异性抗PRRSVM蛋白抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1A7、4G3、51：3。1A7和4G3的Ig亚类为IgM。ELISA检测杂交瘤细胞培养上清效价为1：54～1：1024，腹水效价为1：3200～1：10240。同时用Western blot、IFA检测，结果均是阳性。4G3和1AT相对亲和力不同，证明其识别不同抗原位点。1AT和4G3具有病毒中和活性，中和效价达到1：96。结论：获得2株特异性抗PRRSVM蛋白的中和性单抗，为PRRSV诊断和免疫预防研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 单克隆抗体 M蛋白 质粒 中和抗体
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FMDV抗原表位与hsp_(70)的融合表达及表达产物对小鼠的免疫应答 被引量：1
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作者 苏春霞 段相国 +2 位作者 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期97-100,共4页
将人工合成的O型口蹄疫病毒主要表位基因与结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔法转化酵母菌X-33,用Zeocin平板筛选重组子,PCR鉴定后甲醇诱导表达。SDS-PAGE显示,其相对分子质量为89 000,表达量约为1... 将人工合成的O型口蹄疫病毒主要表位基因与结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔法转化酵母菌X-33,用Zeocin平板筛选重组子,PCR鉴定后甲醇诱导表达。SDS-PAGE显示,其相对分子质量为89 000,表达量约为190 mg.L-1;免疫印迹分析证实表达产物具有免疫反应性。融合蛋白以皮下接种的方式对8只小鼠进行3次免疫,然后通过ELISA和MTT分别检测抗体水平和淋巴细胞增殖反应。结果表明,融合蛋白既能诱导细胞免疫应答,又能诱导体液免疫应答,其产生的抗体水平接近于常规灭活疫苗。MTT试验结果显示,融合蛋白的A570为0.381±0.072,灭活疫苗的A570为0.340±0.050,表明融合蛋白的细胞免疫应答水平高于后者。提示,hsp70作为分子佐剂在口蹄疫基因工程疫苗研究中具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 0型口蹄疫病毒 表位基因 HSP70 毕赤酵母 融合表达
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佐剂对嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫效果的作用 被引量：19
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作者 张吉红 陆承平 《中国兽药杂志》 2003年第4期26-27,共2页
　制备嗜水气单胞菌J1株福尔马林灭活疫苗,用浸浴法免疫银鲫。设疫苗加IMS1312佐剂免疫组、不加佐剂疫苗免疫组及未免疫对照组,每组20尾。18～20℃水温饲养35d,检测银鲫血清嗜水气单胞菌凝集抗体。佐剂组抗体效价达1∶64,相对保护率为67... 　制备嗜水气单胞菌J1株福尔马林灭活疫苗,用浸浴法免疫银鲫。设疫苗加IMS1312佐剂免疫组、不加佐剂疫苗免疫组及未免疫对照组,每组20尾。18～20℃水温饲养35d,检测银鲫血清嗜水气单胞菌凝集抗体。佐剂组抗体效价达1∶64,相对保护率为67%。不加佐剂免疫组抗体效价为1∶32,相对保护率达56%。对照组抗体效价为1∶4,相对保护率为10%。试验结果表明浸浴免疫对银鲫具有较好的保护力,佐剂IMS1312可增强鱼体的免疫应答。 展开更多
关键词 水生动物 病原菌 嗜水气单胞菌 灭活疫苗 佐剂 免疫效果
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