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人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量：
2
1
作者
徐江英
许琳
+3 位作者
戴荣
华超
卢是月
彭光勇
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期109-111,共3页
目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取...
目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99％;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36％,其分子质量为55 ku。TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF208018。结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础。
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关键词
硫氧还蛋白还原酶
序列分析
原核表达
大肠杆菌
克隆
CDNA
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职称材料
题名
人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达
被引量：
2
1
作者
徐江英
许琳
戴荣
华超
卢是月
彭光勇
机构
南京军医学院生物基因工程研究中心
南京
医科大学微
生物
与免疫学教研室
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期109-111,共3页
基金
中国人民解放军海军后勤部资助项目 (98-3302)
文摘
目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白。方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白。结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99％;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36％,其分子质量为55 ku。TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF208018。结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础。
关键词
硫氧还蛋白还原酶
序列分析
原核表达
大肠杆菌
克隆
CDNA
Keywords
thioredoxin reductase
sequence analysis
prokaryotic expression
human
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达
徐江英
许琳
戴荣
华超
卢是月
彭光勇
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003
2
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