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题名原核和真核细胞表达HBeAg的应用研究
被引量：2
- 1
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作者
何亮
邓小昭
刁振宇
周宗安
郑纪山
高健
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机构
南京军区联勤部军事医学研究所分子生物学研究室
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出处
《医学研究生学报》
CAS
2001年第3期204-206,共3页
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文摘
目的 :将原核细胞和真核细胞分别克隆表达生产的 HBe Ag,经适当纯化后进行检测分析 ,并在乙型肝炎抗HBe检测中进行应用和比较。 方法 :分别用大肠杆菌和家蚕细胞表达生产 HBe Ag,并用 Saphacryl S- 2 0 0柱层析进行纯化 ;紫外分光光度法测定表达产物的蛋白含量 ;EIA法测定 HBe Ag和 HBc Ag效价及评估 HBe Ag的应用效果。 结果 :原核细胞 HBe Ag:比活性为 10 0 0 0 / m g,HBe Ag/ HBc Ag=5 0 ,用于抗 HBe的检测时特异性为 96 % ,灵敏度符合国家卫生部 panel要求。真核细胞 HBe Ag:比活性为 16 0 0 0 0 / m g,HBe Ag / HBc Ag =5 0 0 0 ,用于抗 HBe的检测时特异性为 10 0 % ,灵敏度高于国家卫生部 panel要求的 1～ 2个滴度。 结论 :真核细胞表达的 HBe Ag比活性高而 HBc Ag含量低 ,在抗
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关键词
乙肝病毒E抗原
大肠杆菌
家蚕细胞
抗HBE
EIA检测法
比活性
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Keywords
HBeAg
E.coli cells
Silk worm cells
Anti HBe
EIA activation ratio
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分类号
R446.62
[医药卫生—诊断学]
R512.6
[医药卫生—内科学]
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题名杆状病毒早期启动子载体的构建及报道基因的表达
被引量：3
- 2
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作者
邓小昭
朱反修
刁振宇
高健
齐义鹏
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机构
南京军区联勤部军事医学研究所分子生物学研究室
武汉大学病毒研究所
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出处
《医学研究生学报》
CAS
2001年第3期200-203,,206,,共5页
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文摘
目的 :用苜蓿尺蠖核多角体病毒 (Ac NPV)的 IE1基因启动子构建杆状病毒早期基因启动子载体。 方法 :以 Ac NPV p10基因为侧翼序列 ,并将新霉素抗性基因 (neo)插入 IE1基因启动子下游 ,得到转移载体 p Ac PIneo。将它和野生型 Ac NPV DNA共转染昆虫细胞 Sf9,由于 neo基因的表达 ,通过 G418的选择和富集作用 ,得到重组病毒 v Ac PIneo的纯培养。 结果 :用酶切和 Southern印迹杂交证明 ,neo基因整合于 Ac NPV基因组的 p10基因位相。 结论 :成功地构建了杆状病毒早期启动子载体 。
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关键词
昆虫杆状病毒
IE1基因
p10基因
转移载体
新霉素抗性基因
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Keywords
Baculovirus
IE 1 gene
p10 gene
Transfer vector
Neomycin resistance gene
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分类号
R373
[医药卫生—病原生物学]
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题名用连续长片段RT-PCR扩增HCV结构基因
被引量：1
- 3
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作者
高健
邓小昭
王永山
刁振宇
周宗安
何亮
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机构
南京军区联勤部军事医学研究所分子生物学研究室
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出处
《医学研究生学报》
CAS
2001年第z1期51-53,共3页
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基金
江苏省自然科学基金!资助项目 ( BK9915 6)
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文摘
目的与方法 :使用连续长片段 RT- PCR,扩增 HCV的结构基因。 结果 :利用连续长片段 RT- PCR技术 ,结合热启动和两段 PCR一次扩增出长 2 .3kb的 HCV结构基因和部分调控序列 ,并用测量分子质量和限制性酶切的方法进行了鉴定。 结论 :利用长片段 RT- PCR可一次扩增出 C、E1、E2基因和部分 5 - N TR。
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关键词
丙肝病毒
结构基因
长RT-PCR
限制性内切酶
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Keywords
HCV
Structure gene
Long RT PCR
Restriction enzyme
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分类号
R373.2
[医药卫生—病原生物学]
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题名甲型肝炎病毒在3株细胞中的增殖和连续传代
被引量：1
- 4
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作者
郑纪山
何亮
王宏
周宗安
邓小昭
乔仁良
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机构
南京军区联勤部军事医学研究所分子生物学研究室
东南大学分子与生物分子电子学实验室
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出处
《医学研究生学报》
CAS
2001年第4期294-296,299,共4页
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文摘
目的 :观察甲型肝炎病毒 (HAV )在 3个不同的细胞株中连续传代时的增殖特点。 方法 :将 HAV NJ- 3株先以常规传代方式适应不同的细胞株 :FRh K4细胞、PL C/ PRF/ 5细胞、2 BS,然后将适应病毒接种于细胞 ,并随细胞传代。用 EIA、IFA和激光扫描共聚焦显微镜观察带毒细胞连续传代中的病毒增殖。 结果 :1NJ- 3株 / K4细胞于第 5代 HAAg出现阳性 ,第 17、18代时达到高峰 ,2 4代直至 35代均为阴性。 2 NJ- 3株 / 2 BS细胞仅在第 6代出现一次弱阳性 ,传至 35代均呈阴性。 3NJ- 3株 / PL C则在第 3代即可测得 HAAg,第 7代 A值达 0 .80 2 ,P/ N值13.9,并保持此水平至少 70代以上。病毒产量稳定 ,细胞形态良好。冻存 10年的 HAV/ PL C株复苏后 ,仍保持良好的产毒性能。HAV/ PL C传代或收获的最佳周期为 5天。 结论 :HAV NJ- 3株能适应三种不同的传代细胞株 ,但只能在 PL C/ PRF/ 5细胞中长期随细胞传代 。
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关键词
甲型肝炎病毒
细胞培养
连续传代
激光扫描共聚焦显微术
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Keywords
HAV
Cell culture
Continuous passage
Propagation LSCM
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分类号
R512.6
[医药卫生—内科学]
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