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题名人氨肽酶N基因克隆和原核表达
被引量：3
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作者
涂向东
谢飞
吴玉水
兰风华
朱忠勇
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机构
南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科
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出处
《医学研究生学报》
CAS
2004年第8期691-693,共3页
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文摘
目的 :构建人氨肽酶N(APN) 谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合蛋白 (APN GST) ,并进行原核表达。 方法 :根据人APNmRNA序列设计合成特异性引物 ,从人肝组织中提取总RNA并反转录成cDNA第一链 ,RT PCR扩增人APN基因 ,并插入融合蛋白原核表达载体 pGEX 4T ,转化宿主菌BL2 1(DE3)细胞 ,异丙基锍基半乳糖(IPTG)诱导表达APN蛋白。包涵体经尿素变性、重折叠和亲和层析纯化。 结果 :重组质粒测序和酶切结果显示 :APN基因已正确插入 pGEX 4T ,重组蛋白及纯化产物SDS PAGE在 135 0 0 0处有一条明显的蛋白表达条带。 结论 :人APN基因已被成功地克隆、表达和纯化。
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关键词
氨肽酶N
基因克隆
原核表达
纯化
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Keywords
Human aminopeptidase N
Molecular clone
Prokaryotic expression
Purification
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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题名人膜联蛋白Ⅴ基因的克隆及原核表达
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作者
吴一波
兰风华
谢飞
郑德柱
程烽
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机构
南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科
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出处
《医学研究生学报》
CAS
2001年第z1期43-45,共3页
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文摘
目的 :构建人膜联蛋白 c DNA的原核表达载体并诱导其表达。 方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织总 RNA扩增膜联蛋白 基因的编码序列 ,将扩增产物克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T,以 IPTG诱导 GST融合人膜联蛋白 的表达。 结果 :凝胶电泳显示人胎盘组织 PCR扩增产物的分子质量大小与目的片段大小相符。对重组质粒分析表明 ,插入片段的序列与发表的人膜联蛋白 基因编码序列一致。在 IPTG的诱导下 ,BL 2 1重组菌高效表达出一个相对分子质量约为 6 0 0 0 0的产物。 结论 :人膜联蛋白 编码序列已被克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T。
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关键词
人膜联蛋白Ⅴ
克隆
原核表达
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Keywords
Human annexin Ⅴ
Cloning
Prokaryotic expression
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分类号
Q785
[生物学—分子生物学]
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