蛋白芯片法检测多肿瘤标志物的临床应用 被引量：9

1

作者 兰小鹏 赵猛 +1 位作者 马立强 薛昭卿 《医学研究生学报》 CAS 2004年第8期716-719,共4页

目的 :探讨多肿瘤标志物联合检测在肺癌、肝癌、胰 /结直肠癌及胃癌等四种肿瘤中的临床应用价值。　方法 :采用多肿瘤标志物蛋白芯片法 (C 12系统 )联合检测 30例肺癌、19例肝癌、2 4例胰 /结直肠癌和 2 2例胃癌及173例良性疾病患者 ,... 目的 :探讨多肿瘤标志物联合检测在肺癌、肝癌、胰 /结直肠癌及胃癌等四种肿瘤中的临床应用价值。　方法 :采用多肿瘤标志物蛋白芯片法 (C 12系统 )联合检测 30例肺癌、19例肝癌、2 4例胰 /结直肠癌和 2 2例胃癌及173例良性疾病患者 ,并对结果进行敏感度 /特异性 (ROC)分析。　结果 :C 12系统中单个标志物在四种肿瘤中的检出率与文献报道无显著差异 ;肿瘤组的阳性率明显高于非肿瘤组 (分别为 85 .3%和 18.5 % ;P <0 .0 0 1) ,而且肿瘤组阳性平均值明显高于非肿瘤组 (P <0 .0 1) ;系统整体ROC曲线下面积明显大于任何单项标志物。　结论 :C 12系统在肿瘤标志物检测上有较高的灵敏度和较好的特异性 ,其临床应用价值较高。 展开更多

关键词 肿瘤标志物 蛋白芯片 ROC

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人干燥综合征B抗原在巴斯德毕赤酵母菌中的高效分泌表达研究 被引量：5

2

作者 杨湘越 兰小鹏 +3 位作者 吴文冰 冯福英 廖剑 朱忠勇 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期976-979,共4页

目的：通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B（SS—B）抗原。方法：PCR扩增SS—B基因，与酵母菌表达载体pPIC9k重组，构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168，在MD平板上筛选重组克隆，用G418快速筛选... 目的：通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B（SS—B）抗原。方法：PCR扩增SS—B基因，与酵母菌表达载体pPIC9k重组，构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168，在MD平板上筛选重组克隆，用G418快速筛选高拷贝转化子，阳性克隆经甲醇诱导表达后，培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和免疫酶斑点法鉴定。结果：PCR产物约为1200bp，与预期1224bp接近；pPIC9k—SS-B重组阳性克隆测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致，双酶切鉴定正确。表达产物SS-B的相对分子质量约48000，高拷贝毕赤酵母菌转化菌显著高于低拷贝的表达水平，表达量占分泌总蛋白的60％以上，产物浓度为800～900mg／L。免疫酶斑点法证实表达产物具有天然SS—B分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。结论：SS—B存巴斯德毕赤酵母菌中获得高效分泌表达，为下一步研究打下了基础。 展开更多

关键词 人干燥综合征B抗原 克隆表达 巴斯德毕赤酵母菌

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人氨肽酶N基因克隆和原核表达 被引量：3

3

作者 涂向东 谢飞 +2 位作者 吴玉水 兰风华 朱忠勇 《医学研究生学报》 CAS 2004年第8期691-693,共3页

目的 :构建人氨肽酶N(APN) 谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合蛋白 (APN GST) ,并进行原核表达。　方法 :根据人APNmRNA序列设计合成特异性引物 ,从人肝组织中提取总RNA并反转录成cDNA第一链 ,RT PCR扩增人APN基因 ,并插入融合蛋白原核表... 目的 :构建人氨肽酶N(APN) 谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合蛋白 (APN GST) ,并进行原核表达。　方法 :根据人APNmRNA序列设计合成特异性引物 ,从人肝组织中提取总RNA并反转录成cDNA第一链 ,RT PCR扩增人APN基因 ,并插入融合蛋白原核表达载体 pGEX 4T ,转化宿主菌BL2 1(DE3)细胞 ,异丙基锍基半乳糖(IPTG)诱导表达APN蛋白。包涵体经尿素变性、重折叠和亲和层析纯化。　结果 :重组质粒测序和酶切结果显示 :APN基因已正确插入 pGEX 4T ,重组蛋白及纯化产物SDS PAGE在 135 0 0 0处有一条明显的蛋白表达条带。　结论 :人APN基因已被成功地克隆、表达和纯化。 展开更多

关键词 氨肽酶N 基因克隆 原核表达 纯化

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人干燥综合征B抗原的基因克隆及融合表达 被引量：4

4

作者 杨湘越 兰小鹏 +1 位作者 钟智强 朱忠勇 《医学研究生学报》 CAS 2006年第3期202-204,209,共4页

目的:建立新的检测方法,克隆并表达人干燥综合征B抗原(SS-B)。方法:应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆SS-B全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在IPTG... 目的:建立新的检测方法,克隆并表达人干燥综合征B抗原(SS-B)。方法:应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆SS-B全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在IPTG诱导下表达,产物行十二烷基硫酸钠-多丙烯酰胺冻胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(W estern b lot)试验。结果:PCR产物约为1 200 bp,与预期1 224 bp接近,测序结果与Gen-Bank报道的完全一致。pGEX-5T-SS-B重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和W estern b lot结果显示融合蛋白相对分子质量为71 000,具有天然SS-B的免疫原性。结论:成功克隆表达SS-B,为下一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人干燥综合征B抗原 基因克隆 融合表达

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中国人遗传性高铁血红蛋白血症患者中一个新的突变基因型的鉴定 被引量：2

5

作者 郑德柱 兰风华 +3 位作者 黄梁浒 谢飞 吴玉水 朱忠勇 《医学研究生学报》 CAS 2007年第8期830-832,共3页

目的:报道一例遗传性高铁血红蛋白血症患者还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸-细胞色素b5还原酶(b5R)基因突变情况。方法:采用逆转录-聚合酶链反应产物直接测序法,分析遗传性高铁血红蛋白血症患者b5R基因的cDNA全部编码序列;PCR结合限制性内切... 目的:报道一例遗传性高铁血红蛋白血症患者还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸-细胞色素b5还原酶(b5R)基因突变情况。方法:采用逆转录-聚合酶链反应产物直接测序法,分析遗传性高铁血红蛋白血症患者b5R基因的cDNA全部编码序列;PCR结合限制性内切酶(PvuⅠ和AfaⅠ)酶切,分析患者和她的家庭成员b5R基因组DNA扩增片段。结果:两个b5R等位基因中,一个存在M176T(ATG→ACG)突变,另一个存在C203Y(TGC→TAC)突变,其中M176T(ATG→ACG)为新发现的b5R基因突变。结论:本研究鉴定的M176T/C203Y复合杂合子突变是该遗传性高铁血红蛋白血症患者的致病基础。 展开更多

关键词 高铁血红蛋白血症 细胞色素b5还原酶 突变 杂合子

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ELISA检测颅脑损伤患者血清S100B蛋白变化及其意义 被引量：3

6

作者 徐卫平 谢飞 余招銮 《医学研究生学报》 CAS 2001年第6期510-512,共3页

目的 :探讨颅脑损伤患者血清S10 0B蛋白动态变化及其临床意义。　方法 :用双抗体夹心ELISA法检测10 0名健康人和 12例颅脑损伤患者血清S10 0B蛋白水平 ,同时观察血清S10 0B蛋白动态变化。　结果 :12例颅脑损伤并发脑挫裂伤患者在伤后 12... 目的 :探讨颅脑损伤患者血清S10 0B蛋白动态变化及其临床意义。　方法 :用双抗体夹心ELISA法检测10 0名健康人和 12例颅脑损伤患者血清S10 0B蛋白水平 ,同时观察血清S10 0B蛋白动态变化。　结果 :12例颅脑损伤并发脑挫裂伤患者在伤后 12h血清S10 0B水平开始升高 (P <0 .0 0 1) ,2 4h即达高峰。轻、中型患者治疗后S10 0B蛋白可降至正常水平 ,而重型患者仍维持高水平 ,而且病程迁延。　结论 :血清S10 展开更多

关键词 S100B蛋白 酶联免疫吸附测定 颅脑损伤 脑挫裂伤

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ADVIA-120血液分析仪在白血病初诊中的应用 被引量：2

7

作者 林宝顺 兰小鹏 +1 位作者 黄胜 高丽钦 《医学研究生学报》 CAS 2005年第3期277-278,共2页

关键词 全自动血液分析仪 白血病 诊断

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诱骗受体3的研究进展 被引量：3

8

作者 钟智强 兰小鹏 《医学研究生学报》 CAS 2006年第9期833-837,共5页

诱骗受体3(D cR3)又称肿瘤坏死因子受体-6B(TNFR-6B或TR6),也有人称之为TR6,是新近发现的TNFR超家族成员,它具有调节细胞凋亡和免疫细胞活性及分化的生物学特性,D cR3在肿瘤免疫、自身免疫、移植免疫及抗感染免疫中发挥着重要作用。该... 诱骗受体3(D cR3)又称肿瘤坏死因子受体-6B(TNFR-6B或TR6),也有人称之为TR6,是新近发现的TNFR超家族成员,它具有调节细胞凋亡和免疫细胞活性及分化的生物学特性,D cR3在肿瘤免疫、自身免疫、移植免疫及抗感染免疫中发挥着重要作用。该文作者就D cR3在分子免疫学方面的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 诱骗受体3 受体 肿瘤坏死因子 凋亡

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ADVIA-120血细胞分析仪测定血小板性能的探讨

9

作者 王德春 林宝顺 +1 位作者 郑合勇 叶凡 《医学研究生学报》 CAS 2001年第z1期88-89,共2页

关键词 血细胞分析仪 血小板 大血小板 小红细胞

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Smith抗原的性质特征及临床意义

10

作者 吴文冰 兰小鹏 《医学研究生学报》 CAS 2007年第1期90-93,共4页

系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病,患者血清中可检出多种自身抗体,但抗Sm ith(Sm)抗体是SLE的标记性抗体。作者就Sm抗原的理化特性、生物学作用和抗Sm抗体的检测作一综述。

关键词 系统性红斑狼疮 Smith抗原 理化特性 生物学作用

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人膜联蛋白Ⅴ基因的克隆及原核表达

11

作者 吴一波 兰风华 +2 位作者 谢飞 郑德柱 程烽 《医学研究生学报》 CAS 2001年第z1期43-45,共3页

目的 :构建人膜联蛋白 c DNA的原核表达载体并诱导其表达。　方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织总 RNA扩增膜联蛋白 基因的编码序列 ,将扩增产物克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T,以 IPTG诱导 GST融合人膜联蛋白 的表达。　结果 ... 目的 :构建人膜联蛋白 c DNA的原核表达载体并诱导其表达。　方法 :利用 RT- PCR技术从人胎盘组织总 RNA扩增膜联蛋白 基因的编码序列 ,将扩增产物克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T,以 IPTG诱导 GST融合人膜联蛋白 的表达。　结果 :凝胶电泳显示人胎盘组织 PCR扩增产物的分子质量大小与目的片段大小相符。对重组质粒分析表明 ,插入片段的序列与发表的人膜联蛋白 基因编码序列一致。在 IPTG的诱导下 ,BL 2 1重组菌高效表达出一个相对分子质量约为 6 0 0 0 0的产物。　结论 :人膜联蛋白 编码序列已被克隆至 GST融合表达载体 p GEX- 2 T。 展开更多

关键词 人膜联蛋白Ⅴ 克隆 原核表达

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