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液态芯片技术在临床实验室诊断中的应用
被引量：
1
1
作者
张惠菊
兰小鹏
《医学研究生学报》
CAS
2009年第4期422-426,共5页
液态芯片(liquid chip)是近年来新出现的一种临床应用型生物芯片,是以分类编码微球作为反应及信号检测载体,在液相反应体系中实现蛋白质、核酸等多种生物大分子的同步检测。既保持了生物芯片高通量的特性,又具有高灵敏度、高准确度、高...
液态芯片(liquid chip)是近年来新出现的一种临床应用型生物芯片,是以分类编码微球作为反应及信号检测载体,在液相反应体系中实现蛋白质、核酸等多种生物大分子的同步检测。既保持了生物芯片高通量的特性,又具有高灵敏度、高准确度、高精密度和线性测定范围宽及易操作等特点,在临床实验诊断领域具有广阔的应用前景。现就其基本原理、检测、特点在各临床诊断方面的应用作一综述。
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关键词
液态芯片
微球
同步检测
实验室诊断
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职称材料
人自身抗原U1RNP 70K的酵母重组分泌表达及斑点免疫金渗滤检测法的建立
被引量：
1
2
作者
杨湘越
张惠菊
+2 位作者
徐秀云
兰小鹏
朱忠勇
《医学研究生学报》
CAS
2011年第9期908-912,共5页
目的人自身抗原U1RNP 70K通常采用组织提取法或原核表达获得。文中用基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人U1RNP 70K自身抗原,并建立斑点免疫金渗滤检测法。方法 PCR扩增U1RNP 70K基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-U1RNP ...
目的人自身抗原U1RNP 70K通常采用组织提取法或原核表达获得。文中用基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人U1RNP 70K自身抗原,并建立斑点免疫金渗滤检测法。方法 PCR扩增U1RNP 70K基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-U1RNP 70K。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western b lot)鉴定。用所表达的蛋白包被硝酸纤维素膜,建立检测U1RNP抗体的斑点免疫金渗滤法(dot immuogold filtrationassay,D IGFA)。结果 PCR产物约为1300 bp,接近于预期的1314 bp,pPIC9k-U1RNP 70K重组阳性克隆测序结果与Gen-Bank中的U1RNP 70K序列完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物U1RNP 70K的相对分子质量约70 000。W estern b lot证实表达产物具有天然U1RNP 70K分子的免疫原性,阴性对照菌无目的条带表达。D IGFA的检测结果与欧蒙酶免疫斑点法的阳性符合率为94.74%(54/57),阴性符合率为98.00%(49/50),总符合率为96.26%(103/107)。2种方法检测结果无统计学显著差异(P=0.617)。结论在毕赤酵母中成功地高分泌表达了U1RNP 70K蛋白,并建立了简便、快速、准确检测U1RNP抗体的DIGFA方法。
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关键词
自身抗原
U1RNP70K
克隆
表达
巴斯德毕赤酵母
斑点免疫金渗滤法
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职称材料
人自身抗原SSA52的酵母重组分泌表达及其斑点免疫金渗滤法的建立
被引量：
1
3
作者
杨湘越
宋涛
兰小鹏
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期176-180,共5页
人自身抗原SSA52通常采用组织提取法或原核表达获得,存在诸多问题。通过基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人自身抗原SSA52,并建立斑点免疫金渗滤法。采用RT-PCR扩增SSA52基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-SSA52。用电穿...
人自身抗原SSA52通常采用组织提取法或原核表达获得,存在诸多问题。通过基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人自身抗原SSA52,并建立斑点免疫金渗滤法。采用RT-PCR扩增SSA52基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-SSA52。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定,并建立斑点免疫金渗滤法(dot immuogold filtration assay,DIGFA),进行初步临床应用对比研究。结果显示,RT-PCR产物约为1 400 bp,与预期1 428 bp接近,pPIC9k-SSA52重组阳性克隆测序结果与基因库核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物SSA52的相对分子质量约52 kD。Western blot法证实表达产物具有天然SSA52分子的免疫原性,阴性对照菌未见目的表达条带。DIGFA与欧蒙酶免疫斑点法的阳性符合率为95.2%(120/126),阴性符合率为94.0%(47/50),总符合率为94.9%(167/176);两种方法检测结果无统计学显著差异(P>0.05)。说明SSA52在毕赤酵母中分泌表达成功,建立的DIGFA简便、快速、准确。
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关键词
自身抗原
SSA52
克隆
表达
巴斯德毕赤酵母
斑点免疫金渗滤法
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职称材料
题名
液态芯片技术在临床实验室诊断中的应用
被引量：
1
1
作者
张惠菊
兰小鹏
机构
南京军区福州总医院解放军临床检验医学研究所
出处
《医学研究生学报》
CAS
2009年第4期422-426,共5页
基金
福建省青年人才科技创新基金资助项目(批准号:2002J060)
文摘
液态芯片(liquid chip)是近年来新出现的一种临床应用型生物芯片,是以分类编码微球作为反应及信号检测载体,在液相反应体系中实现蛋白质、核酸等多种生物大分子的同步检测。既保持了生物芯片高通量的特性,又具有高灵敏度、高准确度、高精密度和线性测定范围宽及易操作等特点,在临床实验诊断领域具有广阔的应用前景。现就其基本原理、检测、特点在各临床诊断方面的应用作一综述。
关键词
液态芯片
微球
同步检测
实验室诊断
Keywords
Liquid chip
Bead
Simultaneous determination
Laboratory diagnosis
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人自身抗原U1RNP 70K的酵母重组分泌表达及斑点免疫金渗滤检测法的建立
被引量：
1
2
作者
杨湘越
张惠菊
徐秀云
兰小鹏
朱忠勇
机构
南京军区福州总医院解放军临床检验医学研究所
出处
《医学研究生学报》
CAS
2011年第9期908-912,共5页
基金
福建省青年人才科技创新基金(2002J060)
文摘
目的人自身抗原U1RNP 70K通常采用组织提取法或原核表达获得。文中用基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人U1RNP 70K自身抗原,并建立斑点免疫金渗滤检测法。方法 PCR扩增U1RNP 70K基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-U1RNP 70K。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western b lot)鉴定。用所表达的蛋白包被硝酸纤维素膜,建立检测U1RNP抗体的斑点免疫金渗滤法(dot immuogold filtrationassay,D IGFA)。结果 PCR产物约为1300 bp,接近于预期的1314 bp,pPIC9k-U1RNP 70K重组阳性克隆测序结果与Gen-Bank中的U1RNP 70K序列完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物U1RNP 70K的相对分子质量约70 000。W estern b lot证实表达产物具有天然U1RNP 70K分子的免疫原性,阴性对照菌无目的条带表达。D IGFA的检测结果与欧蒙酶免疫斑点法的阳性符合率为94.74%(54/57),阴性符合率为98.00%(49/50),总符合率为96.26%(103/107)。2种方法检测结果无统计学显著差异(P=0.617)。结论在毕赤酵母中成功地高分泌表达了U1RNP 70K蛋白,并建立了简便、快速、准确检测U1RNP抗体的DIGFA方法。
关键词
自身抗原
U1RNP70K
克隆
表达
巴斯德毕赤酵母
斑点免疫金渗滤法
Keywords
Autoantigen
U1RNP 70K
Cloning
Expression
Pichia Pastoris
Dot immunogold filtration assay
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人自身抗原SSA52的酵母重组分泌表达及其斑点免疫金渗滤法的建立
被引量：
1
3
作者
杨湘越
宋涛
兰小鹏
机构
南京军区福州总医院解放军临床检验医学研究所
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期176-180,共5页
基金
福建省青年人才科技创新基金资助项目(2002J060)
文摘
人自身抗原SSA52通常采用组织提取法或原核表达获得,存在诸多问题。通过基因克隆技术,在毕赤酵母中表达人自身抗原SSA52,并建立斑点免疫金渗滤法。采用RT-PCR扩增SSA52基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-SSA52。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定,并建立斑点免疫金渗滤法(dot immuogold filtration assay,DIGFA),进行初步临床应用对比研究。结果显示,RT-PCR产物约为1 400 bp,与预期1 428 bp接近,pPIC9k-SSA52重组阳性克隆测序结果与基因库核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物SSA52的相对分子质量约52 kD。Western blot法证实表达产物具有天然SSA52分子的免疫原性,阴性对照菌未见目的表达条带。DIGFA与欧蒙酶免疫斑点法的阳性符合率为95.2%(120/126),阴性符合率为94.0%(47/50),总符合率为94.9%(167/176);两种方法检测结果无统计学显著差异(P>0.05)。说明SSA52在毕赤酵母中分泌表达成功,建立的DIGFA简便、快速、准确。
关键词
自身抗原
SSA52
克隆
表达
巴斯德毕赤酵母
斑点免疫金渗滤法
Keywords
Autoantigen SSA52 Cloning Expression Pichia pastoris DIGFA
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
液态芯片技术在临床实验室诊断中的应用
张惠菊
兰小鹏
《医学研究生学报》
CAS
2009
1
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职称材料
2
人自身抗原U1RNP 70K的酵母重组分泌表达及斑点免疫金渗滤检测法的建立
杨湘越
张惠菊
徐秀云
兰小鹏
朱忠勇
《医学研究生学报》
CAS
2011
1
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职称材料
3
人自身抗原SSA52的酵母重组分泌表达及其斑点免疫金渗滤法的建立
杨湘越
宋涛
兰小鹏
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
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