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人睾丸前列腺素D合成酶的原核表达
被引量：
5
1
作者
陆金春
张锡然
黄宇烽
《医学研究生学报》
CAS
2001年第5期397-400,共4页
目的：将获得纯化的重组人睾丸前列腺素D合成酶(L-PGDS)用于基础和临床研究. 方法：在原核表达系统中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-2T/htL-PGDS的表达,用谷胱甘肽琼脂糖珠亲和并纯化重组融合蛋白GST/htL-PGDS,再...
目的：将获得纯化的重组人睾丸前列腺素D合成酶(L-PGDS)用于基础和临床研究. 方法：在原核表达系统中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-2T/htL-PGDS的表达,用谷胱甘肽琼脂糖珠亲和并纯化重组融合蛋白GST/htL-PGDS,再用凝血酶裂解融合蛋白,从而获得纯化的重组L-PGDS.对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序,并对重组蛋白进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,鉴定其是否为所需目的蛋白. 结果：用IPTG诱导重组质粒pGEX-2T/htL-PGDS表达的最佳浓度为1 mmol/L,最佳时间为4 h.在此基础上获得的融合蛋白用凝血酶裂解后获得单一纯化的重组蛋白L-PGDS,最佳裂解时间为2 h.SDS-PAGE和DNA测序证实,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白. 结论：用上述方法可获得纯化的人睾丸L-PGDS.
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关键词
pGEX-2T
原核表达
人
睾丸
前列腺素D合成酶
纯化重组
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职称材料
抗人前列腺素D合成酶嵌合抗体基因的构建
2
作者
朱国华
陈德宇
+1 位作者
许晓风
黄宇烽
《南京师大学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期98-102,共5页
采用RT PCR技术,从 1株稳定分泌抗人L-PGDS单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞中扩增抗体的可变区基因,得 2个Vκ和 1个VH.序列经Igblast比对分析,其中 1个Vκ为鼠骨髓瘤细胞系内固有的无功能基因;另一Vκ和VH具备鼠抗体可变区特征,为抗体功能...
采用RT PCR技术,从 1株稳定分泌抗人L-PGDS单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞中扩增抗体的可变区基因,得 2个Vκ和 1个VH.序列经Igblast比对分析,其中 1个Vκ为鼠骨髓瘤细胞系内固有的无功能基因;另一Vκ和VH具备鼠抗体可变区特征,为抗体功能基因.经双酶切,将抗体可变区功能基因分别与表达载体pAG4622、pAH4604中的人IgG相应恒定区相连,构建成抗人L-PGDS的人 鼠嵌合抗体基因.
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关键词
人L-PGDS
RT-PCR技术
单克隆抗体
可变区基因
杂交瘤细胞
老鼠
前列腺素D合成酶
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职称材料
题名
人睾丸前列腺素D合成酶的原核表达
被引量：
5
1
作者
陆金春
张锡然
黄宇烽
机构
南京军区南京总医院生殖遗传室
南京
师范大学生命科学学院
出处
《医学研究生学报》
CAS
2001年第5期397-400,共4页
文摘
目的：将获得纯化的重组人睾丸前列腺素D合成酶(L-PGDS)用于基础和临床研究. 方法：在原核表达系统中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-2T/htL-PGDS的表达,用谷胱甘肽琼脂糖珠亲和并纯化重组融合蛋白GST/htL-PGDS,再用凝血酶裂解融合蛋白,从而获得纯化的重组L-PGDS.对表达纯化重组蛋白的质粒进行DNA测序,并对重组蛋白进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,鉴定其是否为所需目的蛋白. 结果：用IPTG诱导重组质粒pGEX-2T/htL-PGDS表达的最佳浓度为1 mmol/L,最佳时间为4 h.在此基础上获得的融合蛋白用凝血酶裂解后获得单一纯化的重组蛋白L-PGDS,最佳裂解时间为2 h.SDS-PAGE和DNA测序证实,所获的重组蛋白确系所需目的蛋白. 结论：用上述方法可获得纯化的人睾丸L-PGDS.
关键词
pGEX-2T
原核表达
人
睾丸
前列腺素D合成酶
纯化重组
Keywords
pGEX-2T
Prokaryotic expression system
Hum an,testis
Prostaglandin D synthase
分类号
Q558 [生物学—生物化学]
R697 [医药卫生—泌尿科学]
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职称材料
题名
抗人前列腺素D合成酶嵌合抗体基因的构建
2
作者
朱国华
陈德宇
许晓风
黄宇烽
机构
南京
师范大学生命科学学院
南京军区南京总医院生殖遗传室
出处
《南京师大学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期98-102,共5页
基金
中国人民解放军九五计划生育基金资助项目(军计生 98-04).
文摘
采用RT PCR技术,从 1株稳定分泌抗人L-PGDS单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞中扩增抗体的可变区基因,得 2个Vκ和 1个VH.序列经Igblast比对分析,其中 1个Vκ为鼠骨髓瘤细胞系内固有的无功能基因;另一Vκ和VH具备鼠抗体可变区特征,为抗体功能基因.经双酶切,将抗体可变区功能基因分别与表达载体pAG4622、pAH4604中的人IgG相应恒定区相连,构建成抗人L-PGDS的人 鼠嵌合抗体基因.
关键词
人L-PGDS
RT-PCR技术
单克隆抗体
可变区基因
杂交瘤细胞
老鼠
前列腺素D合成酶
Keywords
human Lipocalin-type prostaglandin D synthase, monoclonal antibody, variable region genes, human-mouse chimeric antibody
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人睾丸前列腺素D合成酶的原核表达
陆金春
张锡然
黄宇烽
《医学研究生学报》
CAS
2001
5
在线阅读
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职称材料
2
抗人前列腺素D合成酶嵌合抗体基因的构建
朱国华
陈德宇
许晓风
黄宇烽
《南京师大学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
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