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抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物对类风湿关节滑膜细胞功能影响的研究 被引量:11
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作者 高德玉 陈芳芳 +4 位作者 刘阳 王凯 虞伟 严孝岭 李晓军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期115-120,共6页
目的:研究类风湿关节炎(RA)患者血清抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物(ACPA-IC)对RA患者关节成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖和分泌细胞因子功能的影响。方法:用PEG沉淀法提取RA患者血清免疫复合物(IC),ELISA法检测IC中ACPA-IC水平。用G蛋白免... 目的:研究类风湿关节炎(RA)患者血清抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物(ACPA-IC)对RA患者关节成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖和分泌细胞因子功能的影响。方法:用PEG沉淀法提取RA患者血清免疫复合物(IC),ELISA法检测IC中ACPA-IC水平。用G蛋白免疫亲和层析法从6份ACPA-IC(+)RA血清、4份ACPA-IC(-)RA血清及10份正常人血清中提取IC。体外培养RA关节FLS;分别用RA ACPA-IC(+)提取物、ACPA-IC(-)提取物及健康人血清IC(C-IC)刺激FLS,用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂检测FLS增殖情况,液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响。结果:RA患者ACPA-IC(+)提取物能够显著促进FLS增殖,与对照组IC比较,在培养24小时时间里,四种浓度(25、50、75和100μg/ml)的ACPA-IC都能显著促进FLS增殖。RA患者血清ACPA-IC(+)和ACPA-IC(-)提取物刺激FLS 24小时后,可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF;其中ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8量均显著高于ACPA-IC(-)组和C-IC组,ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌IL-6水平显著高于C-IC组,但与ACPA-IC(-)组无显著性差异。三组间刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异。结论:RA患者血清ACPA-IC可促进FLS增殖,并诱导其分泌IL-6、IL-8和GM-CSF等炎性细胞因子,进而进一步诱发滑膜炎症反应及骨质破坏。 展开更多
关键词 类风湿关节炎(RA) 抗环瓜氨酸肽自身抗体(ACPA) 免疫复合物(IC) 细胞因子 细胞增殖
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白色念珠菌烯醇化酶免疫磁珠定量检测方法的建立 被引量:9
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作者 胡毓安 史利宁 +3 位作者 李芳秋 李伟 马春芳 年娜 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第6期568-572,共5页
目的侵袭性念珠菌病临床致死率较高,而白色念珠菌为最常见致病菌。建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的免疫磁珠方法,提高侵袭性念珠菌感染的实验室诊断水平。方法将白色念珠菌Eno单抗耦联至磁性微珠上,以辣根过氧化物酶... 目的侵袭性念珠菌病临床致死率较高,而白色念珠菌为最常见致病菌。建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的免疫磁珠方法,提高侵袭性念珠菌感染的实验室诊断水平。方法将白色念珠菌Eno单抗耦联至磁性微珠上,以辣根过氧化物酶标记羊抗Eno作为检测抗体,利用重组白色念珠菌Eno蛋白作为标准品评价该方法的精密度、特异性、线性范围、最低检测下限等性能指标。用建立的免疫磁珠方法检测不同真菌培养上清中Eno水平。结果 Eno浓度为25 ng/mL和5 ng/mL时,批内和批间精密度分别为4.54%、5.87%和5.26%、8.82%。最低检出下限为0.5 ng/mL,线性范围为0.5~50 ng/mL。白色念珠菌37℃培养24 h的上清中Eno含量为3.89 ng/mL,培养120 h的Eno水平上升至37.89 ng/mL,Eno水平与白色念珠菌菌丝含量呈正相关。该方法与近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新型隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。结论成功建立了定量检测白色念珠菌Eno的免疫磁珠法,与前期建立的定性ELISA相比,免疫磁珠法更为简便、准确、敏感,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 侵袭性念珠菌病 白色念珠菌 烯醇化酶 免疫磁珠 定量检测
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人Id3基因在肺腺癌A549细胞中的表达及其对细胞生长的抑制 被引量:6
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作者 朱传东 李晓军 +3 位作者 汪萍 贾丽 仲爱芳 陈龙邦 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第6期527-531,共5页
目的:研究外源性分化抑制因子3(Inhibitor of differentiation 3,Id3)基因表达对人肺腺癌细胞系A549细胞生长的抑制作用。方法:构建Id3和EGFP的融合基因表达载体pEGFP/Id3,采用脂质体转染技术将pEGFP/Id3导入A549细胞。FCM分析转染细胞E... 目的:研究外源性分化抑制因子3(Inhibitor of differentiation 3,Id3)基因表达对人肺腺癌细胞系A549细胞生长的抑制作用。方法:构建Id3和EGFP的融合基因表达载体pEGFP/Id3,采用脂质体转染技术将pEGFP/Id3导入A549细胞。FCM分析转染细胞EGFP表达效率,荧光显微镜观察EGFP表达情况;半定量RT-PCR、免疫细胞化学分析转染后A549细胞Id3 mRNA和蛋白的表达。MTT法检测转染后A549细胞生长抑制情况,FCM分析A549细胞周期进程,Annexin V/7-AAD和Hoechst33258染色检测转染后细胞的凋亡情况。结果:成功构建人Id3与EGFP融合基因表达载体pEGFP/Id3;荧光显微镜和FCM观察到EGFP的有效表达,转染48~72 h时EGFP表达率最高;Id3 mRNA及蛋白在转染后的A549细胞中能有效表达。转染后48 h和72 h,pEGFP/Id3转染组A549细胞生长受到明显抑制(P<0.01);细胞周期分析表明,pEGFP/Id3转染组G_0/G_1期细胞显著高于对照组(P<0.05);Annexin V/7-AAD双染结果显示,pEGFP/Id3转染组细胞的早期凋亡率[(10.67±2.60)%]显著高于pEGFP组[(3.39±2.21)%]和未转染组[(2.35±0.95)%](P<0.05);Hoechst33258染色结果也证实pEGFP/Id3组A549细胞出现明显凋亡形态特征。结论:外源性Id3基因在肺腺癌A549细胞中的表达能抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 分化抑制因子3基因(Id3) 肺癌细胞 增殖抑制 凋亡
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白色念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立 被引量:1
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作者 胡毓安 史利宁 +2 位作者 李芳秋 李伟 马春芳 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期826-830,共5页
目的:建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的双抗体夹心ELISA法,并应用于不同真菌培养上清液的检测,探讨其在侵袭性念珠菌感染中潜在的诊断价值。方法:将白色念珠菌Eno单抗作为包被抗体,HRP标记的羊抗Eno作为检测抗体,利... 目的:建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶(enolase,Eno)的双抗体夹心ELISA法,并应用于不同真菌培养上清液的检测,探讨其在侵袭性念珠菌感染中潜在的诊断价值。方法:将白色念珠菌Eno单抗作为包被抗体,HRP标记的羊抗Eno作为检测抗体,利用重组白色念珠菌Eno蛋白作为标准品评价该方法的精密度、线性范围、最低检测下限等性能指标。用建立的双抗体夹心ELISA法定量检测不同真菌培养上清和白色念珠菌在不同温度下培养上清中Eno水平。结果:Eno浓度为20 ng/ml和5 ng/ml时,批内和批间精密度分别为6.61%、9.19%和6.98%、13.81%,最低检出下限为1.25 ng/ml,线性范围为1.25-50.00ng/ml。白色念珠菌37℃培养24 h时的上清中Eno含量为3.06 ng/ml,培养120 h时Eno水平上升到33.43 ng/ml,Eno水平与白色念珠菌菌丝含量呈正相关。本方法与近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新型隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。结论:成功建立了定量检测白色念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA法,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 侵袭性念珠菌病 白色念珠菌 烯醇化酶 ELISA 定量检测
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