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基于环介导等温扩增技术快速鉴定脉血康胶囊中水蛭成分
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作者 邓小丽 李叶 +7 位作者 卢梦瑶 葛重宇 郑晗雪 沈玉萍 杨春宾 孙小祥 夏国华 杨欢 《中成药》 北大核心 2025年第7期2441-2445,共5页
目的基于环介导等温扩增(LAMP)技术鉴定脉血康胶囊中水蛭成分。方法根据水蛭基原动物蚂蟥、水蛭及其伪品菲牛蛭、森林山蛭的COI基因序列差异,设计特异性引物,通过观察正伪品特异性引物的相应扩增产物是否产生荧光进行鉴定。结果水蛭及... 目的基于环介导等温扩增(LAMP)技术鉴定脉血康胶囊中水蛭成分。方法根据水蛭基原动物蚂蟥、水蛭及其伪品菲牛蛭、森林山蛭的COI基因序列差异,设计特异性引物,通过观察正伪品特异性引物的相应扩增产物是否产生荧光进行鉴定。结果水蛭及其伪品DNA仅与相应的特异性引物结合并扩增,显示出较高特异性。方法检出限达1×10^(-3)ng/μL,具有较高的灵敏度。4批市售脉血康胶囊中,MXK1和MXK3检出含蚂蟥、水蛭DNA,鉴定为正品;MXK2和MXK4检出含蚂蟥、菲牛蛭DNA,鉴定为掺伪品。结论该方法可快速、准确地对脉血康胶囊中水蛭成分真伪进行可视化鉴别,有助于保障其临床用药的安全性与有效性。 展开更多
关键词 脉血康胶囊 水蛭 化学成分 环介导等温扩增
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大补阴丸中醋龟甲的真伪鉴定研究
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作者 陈香 韩婧 +5 位作者 王佳祺 彭江松 曹邵阳 宁艺柯 夏国华 杨欢 《中成药》 北大核心 2025年第3期1031-1035,共5页
目的建立大补阴丸中醋龟甲的真伪鉴定方法。方法根据龟甲(乌龟)及其伪品(花龟、巴西龟和鳄龟)的线粒体基因序列差异设计了引物WG、HG、BX和EG,采用荧光定量PCR扩增DNA并进行方法学考察,对8批大补阴丸中醋龟甲进行鉴定。结果含有乌龟、... 目的建立大补阴丸中醋龟甲的真伪鉴定方法。方法根据龟甲(乌龟)及其伪品(花龟、巴西龟和鳄龟)的线粒体基因序列差异设计了引物WG、HG、BX和EG,采用荧光定量PCR扩增DNA并进行方法学考察,对8批大补阴丸中醋龟甲进行鉴定。结果含有乌龟、花龟、巴西龟和鳄龟的DNA供试品在与上述引物经扩增后,分别检测到了荧光信号,并具备特定温度单一峰,T_(m)分别为75.40、79.12、80.16、78.82℃;最低检出限为1×10^(2)copies/μL,重复性实验中CV<1%;分别有2批、1批和5批大补阴丸中所含醋龟甲被鉴定为正品、掺伪品和伪品。结论该方法可用于含醋龟甲制剂的质量控制;大补阴丸中醋龟甲伪品较多,其质量管理亟待加强。 展开更多
关键词 大补阴丸 中成药 醋龟甲 特异性引物 荧光定量PCR
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荧光定量PCR法鉴别蛤蚧定喘丸中醋鳖甲 被引量:1
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作者 韩婧 陈香 +4 位作者 李叶 沈玉萍 孙小祥 夏国华 杨欢 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1209-1213,共5页
目的建立蛤蚧定喘丸中醋鳖甲的DNA分子鉴定方法。方法根据鳖、佛罗里达鳖线粒体基因序列的差异设计特异性引物TS和AF,进行荧光定量PCR和方法学考察,然后对市售蛤蚧定喘丸中醋鳖甲进行鉴定。结果含有鳖、佛罗里达鳖的DNA样品仅与相应引... 目的建立蛤蚧定喘丸中醋鳖甲的DNA分子鉴定方法。方法根据鳖、佛罗里达鳖线粒体基因序列的差异设计特异性引物TS和AF,进行荧光定量PCR和方法学考察,然后对市售蛤蚧定喘丸中醋鳖甲进行鉴定。结果含有鳖、佛罗里达鳖的DNA样品仅与相应引物扩增后可检测到荧光信号,有特定温度单一峰,T_(m)分别为77.45、79.72℃。该方法的检测限为10 copies/μL,重复性较高(CV<1%)。10批蛤蚧定喘丸中有9批仅检出鳖DNA,被鉴定为正品;1批同时检出鳖DNA和佛罗里达鳖DNA,被鉴定为掺伪品。结论本研究所建立的方法可快速、可靠地鉴定蛤蚧定喘丸中醋鳖甲炮制品成分,有助于监管含醋鳖甲成方制剂的质量,并为成方制剂中动物药成分的专属性鉴定研究提供新途径。 展开更多
关键词 蛤蚧定喘丸 醋鳖甲 特异性引物 荧光定量PCR
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基于特征多肽抗原的阿胶基原鉴定 被引量:1
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作者 袁陈婷 杨容 +6 位作者 王立玮 景凌洁 陈璐阳 加羊卓玛 孙小祥 孙锦秀 杨欢 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1214-1219,共6页
目的 以特征多肽为半抗原并制备多克隆抗体,鉴定阿胶原材料基原。方法 经文献调研及数据库比对筛选特征多肽,将多肽抗原与血蓝蛋白偶联并免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过ELISA、dot blot和Western blot分析与验证多克隆抗体的产生、... 目的 以特征多肽为半抗原并制备多克隆抗体,鉴定阿胶原材料基原。方法 经文献调研及数据库比对筛选特征多肽,将多肽抗原与血蓝蛋白偶联并免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过ELISA、dot blot和Western blot分析与验证多克隆抗体的产生、效价及特异性。结果 筛选所得5个特征多肽序列均具有T细胞表位和B细胞表位,亲水性-1~0,二级结构大多为无规则卷曲。多肽抗原ECS1、ECS3~ECS5在二次加强免疫后,效价分别为1∶6 400、1∶400、1∶12 800和1∶800。制备所得的多克隆抗体之间不产生交叉反应,而且多克隆抗体Ab-ECS3与驴皮及其伪品蛋白的结合显现出较大差异。结论 以特征多肽为半抗原制备所得的多克隆抗体可通过Western blot对驴皮进行真伪鉴别,为胶类中药的基原鉴定提供了参考。 展开更多
关键词 阿胶 特征多肽 多肽抗原 多克隆抗体 Western blot 基原鉴定
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