信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)在乳腺发育、免疫应答、细胞代谢、造血及肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但对胰岛细胞功能影响研究甚少。本研究旨在探讨STAT5对小鼠胰岛肿瘤MIN6...信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)在乳腺发育、免疫应答、细胞代谢、造血及肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但对胰岛细胞功能影响研究甚少。本研究旨在探讨STAT5对小鼠胰岛肿瘤MIN6细胞胰岛素分泌的影响及作用机制。电穿孔法转染小干扰RNA(siRNA)敲减STAT5基因表达后,实时定量PCR和蛋白质印迹法显示,与对照干扰RNA转染的细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞的mRNA及蛋白质表达水平分别约70%和67%(P<0.01),提示成功构建了Stat5基因沉默模型。酶联免疫吸附法结合蛋白质印迹法显示,与对照组细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞在不同浓度葡萄糖刺激下,胰岛素分泌能力提高大约1倍(P<0.05);同时,钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)的磷酸化水平亦随之加强。加入Ca MKⅡ抑制剂AIPⅡ(auto camtide-2 related inhibitory peptideⅡ)可明显抑制Stat5 siRNA转染导致的细胞胰岛素分泌水平增加(P<0.01)。上述结果表明,沉默Stat5基因后可通过增强Ca MKⅡ的磷酸化促进MIN6细胞胰岛素的分泌。展开更多
文摘信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)在乳腺发育、免疫应答、细胞代谢、造血及肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但对胰岛细胞功能影响研究甚少。本研究旨在探讨STAT5对小鼠胰岛肿瘤MIN6细胞胰岛素分泌的影响及作用机制。电穿孔法转染小干扰RNA(siRNA)敲减STAT5基因表达后,实时定量PCR和蛋白质印迹法显示,与对照干扰RNA转染的细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞的mRNA及蛋白质表达水平分别约70%和67%(P<0.01),提示成功构建了Stat5基因沉默模型。酶联免疫吸附法结合蛋白质印迹法显示,与对照组细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞在不同浓度葡萄糖刺激下,胰岛素分泌能力提高大约1倍(P<0.05);同时,钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)的磷酸化水平亦随之加强。加入Ca MKⅡ抑制剂AIPⅡ(auto camtide-2 related inhibitory peptideⅡ)可明显抑制Stat5 siRNA转染导致的细胞胰岛素分泌水平增加(P<0.01)。上述结果表明,沉默Stat5基因后可通过增强Ca MKⅡ的磷酸化促进MIN6细胞胰岛素的分泌。
