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基因编辑技术及其在糖生物学研究中的应用 被引量:1
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作者 章恩华 邱宏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期433-452,共20页
基因功能的解析是现代生物学研究的基本问题,基因的精准、高效和靶向编辑是基因功能研究不可或缺的手段。在过去的30多年,基因编辑实现了从基于同源重组修复技术的基因打靶技术(gene targeting)到基于锌指核酸酶、转录激活样效应因子核... 基因功能的解析是现代生物学研究的基本问题,基因的精准、高效和靶向编辑是基因功能研究不可或缺的手段。在过去的30多年,基因编辑实现了从基于同源重组修复技术的基因打靶技术(gene targeting)到基于锌指核酸酶、转录激活样效应因子核酸酶和CRISPR相关核酸酶等可编程核酸酶的可控编辑技术的革命性转变。这些技术的发展极大地促进了基因功能的研究并促生了疾病治疗的颠覆性技术。本文综述了CRISPR-Cas的分类、组成及其在细菌中发挥免疫防御作用的工作原理,重点综述了基于CRISPR-Cas系统的最新基因编辑工具包括基因转录编辑器、表观遗传编辑器、碱基编辑器、先导编辑器以及靶向RNA的RCas编辑系统。随后综述了基因编辑器的细胞和器官靶向递送策略,主要讨论了腺相关病毒、脂质纳米颗粒和细胞外囊泡的优劣。最后,本文综述了基因编辑技术在糖生物学研究中的应用,包括糖类物质功能、生物合成与机制,糖蛋白质组学分析,细胞糖芯片的构建和应用以及蛋白质糖基化工程改造。精确基因编辑技术的发展促进了糖类物质的生物合成机制、结构与功能研究,也正在推进转化糖科学研究。 展开更多
关键词 基因编辑 糖生物学 细胞外囊泡 CRISPR-Cas系统
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基于Super-SILAC定量技术系统解析槲皮素调控巨噬细胞的组蛋白翻译后修饰图谱
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作者 刘志晴 翟琳辉 +2 位作者 吉敬 谭敏佳 刘萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1574-1584,共11页
槲皮素(quercetin,Que)是一种具有多种生物活性的黄酮类化合物,在自然界中分布广泛,具有抗炎和抗肿瘤等生物活性。研究发现,槲皮素的抗炎活性与其对组蛋白翻译后修饰的调控密切相关。然而,槲皮素调控组蛋白翻译后修饰发挥抗炎作用的精... 槲皮素(quercetin,Que)是一种具有多种生物活性的黄酮类化合物,在自然界中分布广泛,具有抗炎和抗肿瘤等生物活性。研究发现,槲皮素的抗炎活性与其对组蛋白翻译后修饰的调控密切相关。然而,槲皮素调控组蛋白翻译后修饰发挥抗炎作用的精细机制尚未有详细报道。为了探讨槲皮素调控组蛋白翻译后修饰发挥抗炎活性的作用机制,我们首先评估了槲皮素对M1型巨噬细胞极化的影响,结果发现,槲皮素可以明显下调M1型巨噬细胞的白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;其次,利用生物质谱的细胞稳定同位素标记(stable isotope labeling by amino acids in cell culture,SILAC)技术衍生的super-SILAC方法,进行了组蛋白翻译后修饰的解析,系统定量分析了槲皮素处理后的巨噬细胞中组蛋白修饰水平的全局性变化;最终,共定量到30个组蛋白修饰位点,其中包括12个发生下调的组蛋白乙酰化修饰位点和4个发生上调的甲基化修饰位点(fold change>1.2,P<0.05);进一步对部分差异变化位点进行了蛋白质免疫印迹(western blot,WB)验证,其差异变化与质谱结果一致性良好。综上,本研究系统解析了槲皮素调控巨噬细胞的组蛋白翻译后修饰图谱,为槲皮素抗炎作用机制的研究提供了可靠的数据参考和新的线索。 展开更多
关键词 槲皮素 表观遗传 组蛋白翻译后修饰 细胞稳定同位素标记 巨噬细胞
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中药干预非酒精性脂肪性肝炎的机制研究进展 被引量:15
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作者 梁欣宇 林素琴 +3 位作者 王一斌 徐静宜 刘雅萌 谢岑 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期384-392,共9页
非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)属于代谢综合征,已成为一个普遍关注的公共卫生问题。非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)是NAFLD的进展性病变,是由多种风险因素和多种组织器官平行相... 非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)属于代谢综合征,已成为一个普遍关注的公共卫生问题。非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)是NAFLD的进展性病变,是由多种风险因素和多种组织器官平行相互作用的结果。由于NASH的潜在病理生理机制十分复杂,目前还没有获批的药物来控制疾病的发生发展。中医将NAFLD归为“肝癖”范畴,并将NASH分为肝郁脾虚、痰湿内阻、湿热蕴结及痰瘀互结4个证型。中医以其独特的理论体系和治疗策略,可以对不同NASH症型进行有效干预和治疗。随着现代药理学和分子生物学的不断发展,越来越多的研究表明中药复方和单味中药活性成分通过多种机制改善NASH,从而推进了中医药的应用。为此该文分别从中药复方和单味中药活性成分这两方面重点论述了中药改善NASH的相关机制,以期为合理有效治疗NASH提供理论和实验研究依据。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪性肝炎 中药复方 中药活性成分 机制研究
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裸花紫珠化学成分、药理活性及临床应用研究进展 被引量:23
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作者 康兴东 叶阳 《特产研究》 2021年第4期95-101,共7页
裸花紫珠是一种常用的海南传统民族药材,并被录入《中国药典》2020年版。国内外2013-2020年文献报道显示,裸花紫珠中主要含有挥发油类、黄酮类、三萜类、二萜类、倍半萜类、环烯醚萜类、苯丙酸类、木脂素类和苯乙醇苷类等化学成分,具有... 裸花紫珠是一种常用的海南传统民族药材,并被录入《中国药典》2020年版。国内外2013-2020年文献报道显示,裸花紫珠中主要含有挥发油类、黄酮类、三萜类、二萜类、倍半萜类、环烯醚萜类、苯丙酸类、木脂素类和苯乙醇苷类等化学成分,具有抗菌、抗病毒、止血凝血、抗炎、促进伤口愈合及抗肿瘤等作用;临床应用主要为抗炎和止血。本文综述了裸花紫珠在化学成分、药理活性及临床应用等方面的研究进展,为其药材和产品进一步的临床应用与质量控制研究提供参考依据。 展开更多
关键词 裸花紫珠 化学成分 药理作用 临床应用
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基于精氨酸酶切的蛋白质C端肽段富集方法的优化及评估
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作者 赵晓晓 胡昊 +2 位作者 赵雯思 刘萍 谭敏佳 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期17-27,共11页
基于聚合物的蛋白质C端反向富集策略是用于研究蛋白质C端最为广泛的策略之一。目前,基于胰蛋白酶(trypsin)切割精氨酸残基C端(ArgC型酶切)的蛋白C端组学方法对蛋白质C端的鉴定深度仍有待提高。为解决这一问题,该研究对此方法进行了优化... 基于聚合物的蛋白质C端反向富集策略是用于研究蛋白质C端最为广泛的策略之一。目前,基于胰蛋白酶(trypsin)切割精氨酸残基C端(ArgC型酶切)的蛋白C端组学方法对蛋白质C端的鉴定深度仍有待提高。为解决这一问题,该研究对此方法进行了优化和评估:建立了基于“V型”过滤装置的“一锅法”富集流程,避免了副反应的干扰,缩短了样本的制备时间;优化了蛋白水平乙酰化反应条件,最大限度地降低了丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基上的副反应,提高了肽段鉴定的可信性;优化了基于固相萃取枪头膜片过滤柱(StageTip柱)的样品分离过程,使C端肽段的鉴定深度增加至原来的4倍。通过以上优化,按照肽段水平错误发现率(FDR)<0.01、离子分数(ion score)≥20,且C端带有乙醇胺修饰的数据筛选标准,从人HEK 293T细胞中共鉴定出696个蛋白质C端。若仅要求肽段水平FDR<0.01,鉴定数目进一步增加到933个,这是基于聚合物富集策略的蛋白质C端组学方法所得的最大数据集之一。探索了胰蛋白酶镜像酶(LysargiNase)切割精氨酸残基N端(ArgN型酶切)与不同肽段N端衍生化修饰组合对蛋白质C端鉴定数目和种类的影响,“LysargiNase酶切+肽段N端乙酰化”新策略在原有“胰蛋白酶酶切+肽段N端二甲基化”策略的基础上将鉴定蛋白质C端的种类提升了47%。综上,该研究通过对基于Arg型酶切的蛋白C端组学方法的优化,提升了C端肽段的鉴定深度,扩大了C端肽段鉴定的覆盖范围。该方法将有望成为系统性表征蛋白质C端的有力工具。 展开更多
关键词 化学乙酰化 蛋白质C端组学 反向富集 固相萃取枪头膜片过滤柱 生物质谱
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红细胞、血浆蛋白及溶酶体对汉防己甲素和汉防己乙素系统暴露的影响
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作者 廖培伟 王温馨 +5 位作者 田楠楠 曾雪珊 任玲玲 朱雅暄 贾伟伟 李川 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2022年第12期1414-1424,共11页
目的:汉防己为防己科植物粉防己(Stephania tetrandra S.Moore)的干燥根。汉防己甲素和汉防己乙素是其两个主要成分,具有抗肿瘤等多方面药效活性。为了帮助进一步考察汉防己甲素和汉防己乙素的药效作用,我们对两个双苄基异喹啉类生物碱... 目的:汉防己为防己科植物粉防己(Stephania tetrandra S.Moore)的干燥根。汉防己甲素和汉防己乙素是其两个主要成分,具有抗肿瘤等多方面药效活性。为了帮助进一步考察汉防己甲素和汉防己乙素的药效作用,我们对两个双苄基异喹啉类生物碱开展了大鼠和体外药代研究。方法:大鼠口服或静脉给药汉防己提取物、汉防己甲素或汉防己乙素单体化合物以阐明汉防己甲素和汉防己乙素的药代动力学特征;在体外检测汉防己甲素和汉防己乙素的血浆蛋白结合、全血-血浆分配、溶酶体捕获。以上实验产生的生物样品均采用液质联用技术进行分析。结果:研究发现汉防己甲素和汉防己乙素有两个药代特征,其一是这两个化合物的全血系统暴露水平均高于其各自血浆系统暴露水平,其二是在相同的给药剂量、动物实验条件及分析检测条件下,两个化合物在灌胃汉防己水提物后的系统暴露水平均高于其各自在灌胃单个化合物后的暴露水平。汉防己甲素和汉防己乙素的大鼠血浆游离药物分数约为2%~5%,其在大鼠红细胞浓度比在大鼠血浆浓度高5倍左右。溶酶体抑制剂阻碍溶酶体捕获这两个化合物并显著减少其在HEK-293细胞中浓度。结论:血浆蛋白结合、红细胞结合及组织细胞中溶酶体捕获三个因素极大地限制了游离的汉防己甲素和汉防己乙素的系统暴露水平,该药代特点应在围绕这两个中药化合物开展药效研究时关注。 展开更多
关键词 汉防己 汉防己甲素 汉防己乙素 红细胞 血浆蛋白 溶酶体 药代基质效应
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