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人Survivin蛋白的表达、纯化及初步应用
被引量：
5
1
作者
李烜
梁文飚
+1 位作者
孙倍成
吴华
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期1267-1271,共5页
目的:克隆、表达肿瘤特异性凋亡抑制因子(Survivin),并对其在人肝癌诊断中的意义进行研究。方法:从人白血病细胞系HL60提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出Survivin基因片段。将Survivin基因片段插入载体pMD-18T中,测序正确后亚克隆到原核表...
目的:克隆、表达肿瘤特异性凋亡抑制因子(Survivin),并对其在人肝癌诊断中的意义进行研究。方法:从人白血病细胞系HL60提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出Survivin基因片段。将Survivin基因片段插入载体pMD-18T中,测序正确后亚克隆到原核表达载体pGEX-2TK中。IPTG诱导重组质粒pGEX-2TK-Survivin在大肠杆菌BL21中表达N端融合GST的目的蛋白,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,经SDS-PAGE分析后,将所得产物用Thrombin裂解后进行Westernblot鉴定。将获得的目的蛋白包板,用ELISA法初步检测了肝癌患者血清中抗Survivin蛋白的表达。结果:克隆了人Survivin基因、表达出相对分子质量约为16.2ku的蛋白并进行了肝癌患者血清的检测应用。结论:成功克隆、表达和纯化了Survivin基因和融合蛋白,为进一步探讨以Survivin为基础的肿瘤诊断和治疗奠定了实验基础。
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关键词
SURVIVIN
基因克隆
蛋白纯化
HCC
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职称材料
题名
人Survivin蛋白的表达、纯化及初步应用
被引量：
5
1
作者
李烜
梁文飚
孙倍成
吴华
机构
南京中医药大学
第一附属医院普外科
江苏省血液中心
南京
医科
大学
第一附属医院普外科
南京中医药大学中医临床系
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期1267-1271,共5页
文摘
目的:克隆、表达肿瘤特异性凋亡抑制因子(Survivin),并对其在人肝癌诊断中的意义进行研究。方法:从人白血病细胞系HL60提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出Survivin基因片段。将Survivin基因片段插入载体pMD-18T中,测序正确后亚克隆到原核表达载体pGEX-2TK中。IPTG诱导重组质粒pGEX-2TK-Survivin在大肠杆菌BL21中表达N端融合GST的目的蛋白,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,经SDS-PAGE分析后,将所得产物用Thrombin裂解后进行Westernblot鉴定。将获得的目的蛋白包板,用ELISA法初步检测了肝癌患者血清中抗Survivin蛋白的表达。结果:克隆了人Survivin基因、表达出相对分子质量约为16.2ku的蛋白并进行了肝癌患者血清的检测应用。结论:成功克隆、表达和纯化了Survivin基因和融合蛋白,为进一步探讨以Survivin为基础的肿瘤诊断和治疗奠定了实验基础。
关键词
SURVIVIN
基因克隆
蛋白纯化
HCC
Keywords
Survivin
cloning
protein purification
HCC
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人Survivin蛋白的表达、纯化及初步应用
李烜
梁文飚
孙倍成
吴华
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008
5
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