利用RAPD和ISSR分子标记分析地黄种质遗传多样性 被引量：71

1

作者 周延清 景建洲 +2 位作者 李振勇 张宝华 贾敬芬 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期922-928,共7页

用RAPD与ISSR技术对地黄的 8个品种和 2个脱毒品系进行了种质遗传多样性分析。分别从 80条RAPD引物和 4 4条ISSR引物中筛选出适合地黄种质分析的 17条RAPD引物和 10条ISSR引物用于RAPD和ISSR分析。 17条RAPD引物共扩增出 177条带 ,多态... 用RAPD与ISSR技术对地黄的 8个品种和 2个脱毒品系进行了种质遗传多样性分析。分别从 80条RAPD引物和 4 4条ISSR引物中筛选出适合地黄种质分析的 17条RAPD引物和 10条ISSR引物用于RAPD和ISSR分析。 17条RAPD引物共扩增出 177条带 ,多态性位点数为 10 9;多态性位点比率为 6 1 5 8% ;平均多样性指数 (I)为0 3135 ;每个位点的有效等位基因数 (Ne)是 1 36 4 1;10条ISSR引物共扩增出 110条带 .多态性位点数为 79;多态性位点比率为 71 5 8% ;平均多样性指数 (I)为 0 35 77;每个位点的有效等位基因数 (Ne)是 1 4 0 37。基于扩增条带数据库建立了各自的Jaccard遗传相关系数矩阵 ,构建了相似的分子树状图 ,将 10个供试材料分为 2类 :一类群含组培 85 5、大田 85 5、组培 930 2、大田 930 2、金状元和金白 6个材料 ;另一类群含北京 1号、大红袍、地黄 910 4和野生地黄 4个材料。两种分子标记的分析结果呈极显著正相关 (r=0 6 4 9)。结果表明 ,RAPD与ISSR标记适合于地黄种质遗传多样性分析 。 展开更多

关键词 地黄 RAPD ISSR 种质遗传多样性 DNA分子标记

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怀地黄85-5品种内遗传多样性的RAPD和ISSR分析 被引量：13

2

作者 周延清 牛敬媛 +11 位作者 田苗苗 李振勇 崔天星 邵大晓 李丙亮 冯艳铭 李智涛 李争 王天亮 范喜梅 李敏 申远 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期136-139,共4页

采用CTAB法提取了怀地黄85-5品种16个单株的基因组DNA,使用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和大小,利用RAPD及ISSR分析其品种内遗传多样性.从24个RAPD引物和43个ISSR引物中分别筛选出具有稳定多态性条带的RAPD引物3个和ISSR引物2个... 采用CTAB法提取了怀地黄85-5品种16个单株的基因组DNA,使用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和大小,利用RAPD及ISSR分析其品种内遗传多样性.从24个RAPD引物和43个ISSR引物中分别筛选出具有稳定多态性条带的RAPD引物3个和ISSR引物2个,分别对16个单株基因组DNA进行PCR扩增.3个RAPD引物共扩增出7条带,其中多态性条带为4个,多态性比率为57.14%.2个ISSR引物共扩增出17条带,其中多态性条带为11个,多态性比率为64.7%.结果表明,怀地黄85-5品种内存在遗传差异,但遗传多样性比地黄品种间的低. 展开更多

关键词 怀地黄 RAPD ISSR 遗传多样性

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怀地黄ISSR扩增条件优化的研究(英文) 被引量：34

3

作者 周延清 景建洲 +2 位作者 李振勇 浩健 贾敬芬 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第1期6-11,共6页

用CTAB法提取怀地黄嫩叶DNA,进行简单重复间序列标记 ISSR 分析.通过单因子实验分别研究了退火温度、Taq酶单位、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和模板DNA浓度对ISSR-PCR反应的影响,找出各自的合适条件,而且每一个合适条件确定以后都被... 用CTAB法提取怀地黄嫩叶DNA,进行简单重复间序列标记 ISSR 分析.通过单因子实验分别研究了退火温度、Taq酶单位、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和模板DNA浓度对ISSR-PCR反应的影响,找出各自的合适条件,而且每一个合适条件确定以后都被作为后续研究的一个条件.通过各个因子的组合研究建立了适宜于怀地黄ISSR分析的扩增体系:25μLPCR反应体积,1×TaqDNA酶缓冲液 10mmol/LTris-HCl,50mmol/LKCl,0.1%TrionX-100,pH9.0 ,2.5mmol/LMgCl2,1.5～1.0UTaq酶,60ng模板DNA,0.4μmmol/L引物,各0.4mmol/L的dATP、dGTP、dCTP和dTTP.合适的退火温度为53～55℃.为用ISSR技术分析鉴定怀地黄种质资源奠定了良好的基础. 展开更多

关键词 怀地黄 ISSR PCR 条件优化

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用mRNA差异显示技术分离盐胁迫下小麦耐盐相关cDNA 被引量：7

4

作者 刘永军 景建洲 +3 位作者 贾敬芬 李振勇 郝建国 陈刚 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期89-92,共4页

目的用mRNA差异显示技术分离小麦盐胁迫应答cDNA,为进一步研究小麦耐盐机理奠定基础。方法将小麦(Triticum aesticum L.)耐盐品系宝丰7228r种子分别置于含NaC l 0‰和12‰的Hoagland培养液中生长,7d后分别取叶片,提取总RNA并分离出其中... 目的用mRNA差异显示技术分离小麦盐胁迫应答cDNA,为进一步研究小麦耐盐机理奠定基础。方法将小麦(Triticum aesticum L.)耐盐品系宝丰7228r种子分别置于含NaC l 0‰和12‰的Hoagland培养液中生长,7d后分别取叶片,提取总RNA并分离出其中的mRNA,通过锚锭引物O ligo dT10GC反转录和9个10核苷酸随机引物进行PCR扩增。结果DDRT-PCR结果显示,有4个差异DNA片段只在盐胁迫的小麦耐盐品系基因组中表达,而在对照中没有出现。这4个差异cDNA片段分别命名为ts01(260 bp),ts02(330 bp),ts03(420 bp),ts04(600 bp)。4个差异cD-NA片段的RNA杂交结果显示,只有ts04存在明显差异,在盐胁迫条件下有杂交斑点而在对照中没有杂交斑点,其余3个cDNA片段在盐胁迫和对照中都没有杂交斑点。进一步将ts04克隆并进行DNA序列测定及同源性分析。结论ts04可能是耐盐相关cDNA片段,该片段核酸序列与麦属抗性相关的肌动蛋白基因有23%同源。 展开更多

关键词 小麦 MRNA差异显示 耐盐性

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p53基因突变与食管贲门多源癌的相关性 被引量：7

5

作者 陈虹 王立东 +7 位作者 高社干 李吉林 秦艳茹 范宗民 刘颖 郭梅 杨国翠 郭花芹 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期283-286,共4页

目的　探讨食管贲门双源癌组织 p5 3基因突变的特征及其与 p5 3蛋白表达的关系。 方法　采用显微切割、PCR、DNA测序和免疫组化ABC法 ,分析 4例食管贲门多源癌p5 3基因突变和蛋白表达状况。结果　 4例食管贲门双源癌中 ,1例食管鳞癌和... 目的　探讨食管贲门双源癌组织 p5 3基因突变的特征及其与 p5 3蛋白表达的关系。 方法　采用显微切割、PCR、DNA测序和免疫组化ABC法 ,分析 4例食管贲门多源癌p5 3基因突变和蛋白表达状况。结果　 4例食管贲门双源癌中 ,1例食管鳞癌和贲门腺癌同时发生 p5 3基因突变 ,并均发生第 7外显子 2 31、2 32密码子的点突变和 2 2 5、2 32～ 2 33、2 34密码子的缺失 /插入改变。食管鳞癌p5 3基因突变率为 5 0 %(2 /4 ) ,贲门腺癌为 75 %(3/4 )。所有检测到的突变均发生在第 7和 8外显子。食管癌和贲门癌分别有 1例 p5 3蛋白阴性表达的患者检测到p5 3基因突变 ,食管癌中 1例 p5 3蛋白阳性表达患者未检测到基因突变。结论　同一个体食管鳞癌和贲门腺癌组织同时发生相似位点的 p5 3基因突变 ,提示二者具有相似的发病因素和分子机制 ,为进一步揭示林州地区相似的食管 /贲门癌区域分布特征提供了重要的理论依据和线索。 展开更多

关键词 P53基因突变 食管贲门多源癌 相关性 序列分析

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基于互联网的产品数据管理系统设计与实现 被引量：1

6

作者 许惠丽 李玉妹 马源 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第5期30-33,共4页

在分析产品数据管理结构和功能特点的基础上,根据动态企业联盟、虚拟公司的兴起以及数字化制造技术的发展,分析了产品数据管理的发展方向。并且在分析传统Web化的产品数据管理系统集成中有关问题的基础上,建立了一个基于Web技术的四层... 在分析产品数据管理结构和功能特点的基础上,根据动态企业联盟、虚拟公司的兴起以及数字化制造技术的发展,分析了产品数据管理的发展方向。并且在分析传统Web化的产品数据管理系统集成中有关问题的基础上,建立了一个基于Web技术的四层分布式产品数据管理集成系统的网络架构,阐述了这种体系结构轻型、开放性强的优点和实施中的松耦合、联机事务处理等关键技术,测试结果表明系统功能完整、性能稳定、运行良好。 展开更多

关键词 产品数据管理系统 虚拟公司 技术 互联网 数字化制造 发展 动态企业联盟 联机事务处理 基于WEB 松耦合

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人血清P21蛋白的Western印迹测定 被引量：6

7

作者 贾定武 吴逸明 +1 位作者 陈琛 高亚胜 《河南医科大学学报》 1995年第1期17-20,共4页

建立了Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法测定人血清中ｒａｓ癌基因蛋白的方法，检测限值为３ｍｇ／Ｌ血清。丽春红Ｓ染色后裁掉非靶蛋白部分硝酸纤维素膜，可大量节约一抗的用量；微波炉促进免疫结合，加速显色过程；用国产碱性磷酸酶ＡＢＣ试剂，... 建立了Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法测定人血清中ｒａｓ癌基因蛋白的方法，检测限值为３ｍｇ／Ｌ血清。丽春红Ｓ染色后裁掉非靶蛋白部分硝酸纤维素膜，可大量节约一抗的用量；微波炉促进免疫结合，加速显色过程；用国产碱性磷酸酶ＡＢＣ试剂，可降低成本；实验结果可用５６０ｎｍ波长的色谱扫描或血清系列稀释法进行定量，并已用于职业肿瘤高危人群的筛检。 展开更多

关键词 蛋白 印迹 WESTERN印迹 血清 P21蛋白

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草木樨状黄芪变异系中甲硫氨酸代谢相关cDNA的分子克隆及其在大肠杆菌中的表达

8

作者 刘永军 景建洲 +1 位作者 贾敬芬 李振勇 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第1期1-5,共5页

利用mRNA差异显示技术 differentialdisplay 从草木樨状黄芪耐甲硫氨酸变异系中分离到一差异cDNA片段,命名为tm03 360bp .mRNA杂交结果显示,该片段只在变异苗中表达,初步确定其与甲硫氨酸代谢相关.测序后在Genebank搜寻,未发现有同源序... 利用mRNA差异显示技术 differentialdisplay 从草木樨状黄芪耐甲硫氨酸变异系中分离到一差异cDNA片段,命名为tm03 360bp .mRNA杂交结果显示,该片段只在变异苗中表达,初步确定其与甲硫氨酸代谢相关.测序后在Genebank搜寻,未发现有同源序列.进一步分析表明,该cDNA克隆可编码完整的蛋白.在该基因片段两端分别合成含Hind 和BamH 酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到pRSETA表达载体,转化宿主菌JM109 DE3 ,经IPTG诱导表达了N′端含6个组氨酸的蛋白质,分子量约为14kD,为进一步研究该蛋白的结构和生物学功能奠定基础. 展开更多

关键词 草木樨状黄芪变异系 甲硫氨酸代谢 克隆 表达

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用PCR法检测人巨细胞病毒DNA

9

作者 袁仕取 刘明霞 +1 位作者 李振勇 刘军建 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1996年第2期77-79,共3页

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测患者尿液中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ．结果表明，自行设计合成的引物位于ＨＣＭＶ基因组早期蛋白基因区，经ＰＣＲ仪扩增一段长４３０ｂｐ的特异序列片段，对正常人基因组ＤＮＡ或其它疱疹病毒... 用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测患者尿液中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ．结果表明，自行设计合成的引物位于ＨＣＭＶ基因组早期蛋白基因区，经ＰＣＲ仪扩增一段长４３０ｂｐ的特异序列片段，对正常人基因组ＤＮＡ或其它疱疹病毒ＤＮＡ无交叉反应．此法可检测出少至１０－１６ｇ（０．１ｆｇ）的病毒ＤＮＡ．通过对３５份尿液标本的检测。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 聚合酶链式反应 临床医学 DNA

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聚合酶链式反应(PCR)的原理和应用 被引量：3

10

作者 林炳辉 吕婷云 《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第5期1-5,共5页

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是最近几年在分子生物学领域中一项具有革命性的技术突破.这项新兴的生物技术非常迅速地形成常规的标准程序,为科学家提供了从微量的生物材料中快速得到大量特定遗传物质的实验手段,因而... 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是最近几年在分子生物学领域中一项具有革命性的技术突破.这项新兴的生物技术非常迅速地形成常规的标准程序,为科学家提供了从微量的生物材料中快速得到大量特定遗传物质的实验手段,因而PCR技术在基础研究、医学、生物工程学和法医学等许多领域都有着重要的实际应用价值,并对原先建立的分子杂交、序列分析、基因克隆等现代分子生物学技术的发展给以巨大的推动作用。 展开更多

关键词 聚合酶链式反应 PCR DNA POLYMERASE 生物工程学 基因分析 生物材料 基因克隆 实验手段 拷贝数

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贾第虫病的实验室诊断 被引量：5

11

作者 谢毅 郭兰英 +2 位作者 宋琳 喻方敏 李恒 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第6期101-103,共3页

关键词 鞭毛虫病 形态学 免疫学 基因检测 贾第虫病 实验室诊断

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金标免疫层析法测定前列腺抗原方法的应用 被引量：5

12

作者 郭兰英 万卷芳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期498-499,共2页

目的 :采用前列腺抗原 (PSA)单抗标记胶体金的方法 ,测定PSA抗原。方法 :采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金 ,金标免疫层析方法 (GSLIA)测定。结果 :将金标方法与ELISA方法进行比较灵敏度、特异性 ,其两者无显著性差异。金标方法可在室温... 目的 :采用前列腺抗原 (PSA)单抗标记胶体金的方法 ,测定PSA抗原。方法 :采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金 ,金标免疫层析方法 (GSLIA)测定。结果 :将金标方法与ELISA方法进行比较灵敏度、特异性 ,其两者无显著性差异。金标方法可在室温放置 1年以上。结论 :金标免疫层析法测定前列腺抗原 ,是一种快速、简便。 展开更多

关键词 前列腺抗原 胶体金免疫层析法 前列腺癌

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耐盐细菌中性蛋白酶菌株筛选与生化反应的初步研究

13

作者 马清和 李振勇 《中国酿造》 CAS 北大核心 1989年第6期19-22,共4页

本文从湖南省湘潭的龙牌酱油、浏阳豆豉、常德干豆豉中,分离出8种能产生中性蛋白酶的耐盐细菌。 并经重复筛选获一株中性蛋白酶较高的2429耐盐杆菌,其耐盐度为8％。经液体谷汁培养基37±1℃摇床培养(WPP型微生物多用培养箱),72小时... 本文从湖南省湘潭的龙牌酱油、浏阳豆豉、常德干豆豉中,分离出8种能产生中性蛋白酶的耐盐细菌。 并经重复筛选获一株中性蛋白酶较高的2429耐盐杆菌,其耐盐度为8％。经液体谷汁培养基37±1℃摇床培养(WPP型微生物多用培养箱),72小时测得中性蛋白酶活力66.40/ml;还原糖的含量471.5mg/100ml;氨基态氮的含量为43.1mg/100ml,同时还测得中性蛋白酶产酶最高的培养时间为56小时。 展开更多

关键词 酱油 耐盐菌 中性蛋白酶 菌株筛选

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对大肠杆菌、痢疾杆菌抗药基因转移的实验研究

14

作者 关玛丽 李泽芬 李振勇 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1989年第3期208-211,共4页

本文就肠道感染性疾病过程中对病人感染的致病性大肠杆菌、弗氏痢疾杆菌出现的耐药现象进行了研究。认为多数由抗药性质粒介导形成耐药性。这种耐药性可以传递,之所以能传递与质粒及其上面的耐药基因转移有关。这种耐药性传递是通过细... 本文就肠道感染性疾病过程中对病人感染的致病性大肠杆菌、弗氏痢疾杆菌出现的耐药现象进行了研究。认为多数由抗药性质粒介导形成耐药性。这种耐药性可以传递,之所以能传递与质粒及其上面的耐药基因转移有关。这种耐药性传递是通过细菌的转化、转导实验研究手段而确定。该研究为在临床上进一步研究控制耐药基因的转移或研究质粒消除剂,从而控制微生物引起的感染创造了一定的条件。 展开更多

关键词 大肠杆菌 痢疾杆菌 耐药机制

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类风湿因子对乙肝酶免试剂的干扰及处理方法 被引量：2

15

作者 郭兰英 万卷芳 《河南医科大学学报》 2000年第6期559-560,共2页

关键词 类风湿因子 抗体 乙型肝炎 乙肝酶免试剂

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核酸扩增-液相杂交法检测沙眼衣原体DNA

16

作者 李智涛 李振勇 +5 位作者 杨国翠 冯艳铭 邵大晓 赵大鹏 崔天星 朱德华 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2002年第1期38-40,共3页

目的:探讨用核酸扩增(PCR)－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA的效果。方法:用PCR－液相杂交法对616份临床标本进行了沙眼衣原体检测,并与培养法比较,对与培养法结果不相符合的标本及部分阴性标本进行连接酶链反应(LCR)复检。结果:PCR－液... 目的:探讨用核酸扩增(PCR)－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA的效果。方法:用PCR－液相杂交法对616份临床标本进行了沙眼衣原体检测,并与培养法比较,对与培养法结果不相符合的标本及部分阴性标本进行连接酶链反应(LCR)复检。结果:PCR－液相杂交相法检测沙眼衣原体特异性良好,灵敏度达到0．1fg,临床标本沙眼衣原体 DNA阳性检出率为 27．6%,显著高于培养法的 6．3%(P＜0．001)。以培养法为标准,此法的灵敏度为 100%。以LCR法为标准,此法的灵敏度为97．2%,特异度为80．7%,2者具有较好的相符性。结论:PCR－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA操作简便,特异性强,灵敏度高,适合临床应用。 展开更多

关键词 沙眼衣原体 聚合酶链反应 连接酶链反应 液相核酸杂交 PCR-液相杂交法 LCR

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制备12kb重组质粒载体的方法

17

作者 周晓强 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第z2期48-51,共4页

利用质粒载体ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）克隆了一个长达９２２４ｂｐ的ＤＮＡ片段，重组质粒大小达到１２００３ｂｐ．该重组质粒可以转化到ＪＭ１０９受体菌中，并且在随后的继代培养过程中具有较高的产量和相当高的稳定性．对于利用质粒... 利用质粒载体ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）克隆了一个长达９２２４ｂｐ的ＤＮＡ片段，重组质粒大小达到１２００３ｂｐ．该重组质粒可以转化到ＪＭ１０９受体菌中，并且在随后的继代培养过程中具有较高的产量和相当高的稳定性．对于利用质粒载体来克隆ＤＮＡ片段来说，设计的方法具有普遍的使用价值，对于较大的ＤＮＡ片段克隆，该方法具有简便、可靠的特点，不仅能够保证克隆成功，而且极大的减少了筛选或鉴定重组菌的工作量． 展开更多

关键词 质粒载体 克隆 9224pbDNA插入片段

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消痔瘘丸稳定性实验研究

18

作者 郜迎晨 周有恒 马月霞 《中成药》 CAS CSCD 2000年第4期261-262,共2页

目的 :以消痔瘘丸中大黄素含量为指标考察其稳定性。方法 :采用恒温加速实验测定稳定性 ;大黄素测定采用双波长薄层扫描法。结果 :实验数据经统计学处理 ,推算其室温下有效期为 3.19a。

关键词 有效期 消痔瘘丸 稳定性 实验 中药

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