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外界因子调控类胡萝卜素生物合成研究进展 被引量:6
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作者 殷林 林俊芳 +2 位作者 叶志伟 郭丽琼 简锦辉 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2016年第5期214-219,共6页
由于类胡萝卜素良好的生物活性和生理功能,近年来被广泛应用在食品、医药、营养保健等行业,为满足人类对类胡萝卜素的需求,有关类胡萝卜素合成调控的研究也越来越多。文章综述了光照、温度和诱导子等外界因子对类胡萝卜素生物合成的影响... 由于类胡萝卜素良好的生物活性和生理功能,近年来被广泛应用在食品、医药、营养保健等行业,为满足人类对类胡萝卜素的需求,有关类胡萝卜素合成调控的研究也越来越多。文章综述了光照、温度和诱导子等外界因子对类胡萝卜素生物合成的影响,期望在生产过程中通过外界调控来提高类胡萝卜素的产量。 展开更多
关键词 类胡萝卜素 外界因子 光照 温度 诱导子
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杏鲍菇麦角硫因生物合成基因挖掘及在酵母中的组合表达 被引量:1
2
作者 郭心悦 潘涛 郭丽琼 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期841-849,共9页
【目的】麦角硫因(EGT)是一种组氨酸衍生而来的天然氨基酸,具有抗氧化、抗炎症、抗癌以及预防神经系统类疾病等多种生理功能。从杏鲍菇中挖掘出EGT合成酶基因并在酵母中进行表达及功能鉴定,阐明杏鲍菇EGT的合成途径,为高效合成EGT提供... 【目的】麦角硫因(EGT)是一种组氨酸衍生而来的天然氨基酸,具有抗氧化、抗炎症、抗癌以及预防神经系统类疾病等多种生理功能。从杏鲍菇中挖掘出EGT合成酶基因并在酵母中进行表达及功能鉴定,阐明杏鲍菇EGT的合成途径,为高效合成EGT提供基因资源及培育高产EGT的杏鲍菇新品种提供依据。【方法】运用生物信息学方法从杏鲍菇基因组中克隆了4个EGT合成酶基因PeEgt1、PeEgt2-1、PeEgt2-2、PeEgt2-3,并以酿酒酵母IMX581菌株为表达宿主对该基因进行异源表达,采用高效液相色谱法测定EGT产量,鉴定基因功能。【结果】分别构建了单基因、双基因和三基因的酿酒酵母IMX581工程菌株。整合了PeEgt1的单基因酿酒酵母工程菌株可合成EGT;与单基因工程菌株相比,整合了PeEgt1、PeEgt2-1或PeEgt1、PeEgt2-2的双基因酿酒酵母工程菌株的EGT产量均有显著提高,而整合了PeEgt1、PeEgt2-3的双基因酿酒酵母工程菌株的EGT产量没有提高。表明PeEgt1、PeEgt2-1、PeEgt2-2基因有功能,表达的酶有活性,而PeEgt2-3基因没有功能。整合了3个基因的PeEgt1-PeEgt2-1-PeEgt2-2酿酒酵母工程菌株的EGT产量较双基因工程菌株没有显著提高,推测可能是PeEgt1合成的组氨酸甜菜碱半胱氨酸亚砜底物不足以提供PeEgt2-1、PeEgt2-2两个酶的反应,限制了酿酒酵母EGT的进一步合成。【结论】在杏鲍菇中克隆的EGT合成酶基因PeEgt1、PeEgt2-1、PeEgt2-2有功能,表达的酶有活性,且PeEgt2-1、PeEgt2-2可能是同工酶;杏鲍菇EGT的生物合成途径由PeEgt1、PeEgt2两个基因组成。 展开更多
关键词 麦角硫因 杏鲍菇 基因表达 生物合成 酿酒酵母
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水产源乳酸菌的多样性及抑菌活性研究 被引量:10
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作者 刘君 林俊芳 +4 位作者 郭丽琼 叶志伟 方再光 郭心悦 李梓良 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期351-357,共7页
为探究常见水产品中乳酸菌的分布情况,以及筛选出抑制水产常见致病菌的乳酸菌,从市场采集不同水产品的肠道,用乳酸菌分离筛选培养基分离乳酸菌;用16SrDNA鉴定对所分离的乳酸菌分类鉴定;应用打孔法抑菌试验测试乳酸菌对嗜水气单胞菌、副... 为探究常见水产品中乳酸菌的分布情况,以及筛选出抑制水产常见致病菌的乳酸菌,从市场采集不同水产品的肠道,用乳酸菌分离筛选培养基分离乳酸菌;用16SrDNA鉴定对所分离的乳酸菌分类鉴定;应用打孔法抑菌试验测试乳酸菌对嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌等15种水产致病菌的抑菌活性。从市场采集不同南亚热带鱼类、虾、贝、蛤等30个样品的肠道,分离出156株乳酸菌,并研究了这些乳酸菌的种属分布和抑菌活性。结果显示:菌株的革兰氏染色下的菌体形态主要有杆状、短杆状、球状、链状4种。16SrDNA鉴定主要包括乳酸乳球菌、戊糖片球菌、格氏乳球菌等11个种属。其中抑菌谱广、效果好的菌属有:假肠膜明串珠菌、肠膜明串珠菌、戊糖片球菌、乳酸乳球菌、乳明串珠菌、沙克乳杆菌和融合魏斯氏菌。本研究结果为乳酸菌在水产养殖上的应用提供理论依据。 展开更多
关键词 乳酸菌 水产病原菌 抑菌活性 多样性
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蛹虫草新菌株ZA10-C4的培养体系优化及虫草素高效制备 被引量:2
4
作者 麦梦贤 郭丽琼 +4 位作者 魏韬 邹苑 郑倩望 叶志伟 林俊芳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期85-94,共10页
蛹虫草菌株ZA10-C4是经杂交育种得到的高产虫草素的新菌株,为了获得适合其生长的培养基,提高虫草素产量,作者通过响应面法优化培养基配方,并用大孔树脂NKA-Ⅱ吸附法提取纯化发酵液中的虫草素。ZA10-C4菌株的最佳发酵培养基配方为:麦芽糖... 蛹虫草菌株ZA10-C4是经杂交育种得到的高产虫草素的新菌株,为了获得适合其生长的培养基,提高虫草素产量,作者通过响应面法优化培养基配方,并用大孔树脂NKA-Ⅱ吸附法提取纯化发酵液中的虫草素。ZA10-C4菌株的最佳发酵培养基配方为:麦芽糖17.99g/L、酵母提取粉41.13g/L、L-丙氨酸11.83g/L、KH_(2)PO_(4)2.00 g/L、MgSO_(4)1.50 g/L、维生素B112 mg/L。在此优化条件下,虫草素产量达到(4503.14±15.54)mg/L,较优化前提高1.66倍。同时,得到最佳提取纯化工艺为:自然pH、上样体积600 mL、上样和洗脱流量240mL/h、乙醇(体积分数70%)洗脱体积800mL。在此条件下得到的虫草素纯度为94.89%,得率为89.57%。该研究为蛹虫草新菌株ZA10-C4的大规模生产及虫草素的高效制备提供了技术参考。 展开更多
关键词 蛹虫草 虫草素 菌株培养 纯化 高效制备
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基于CRISPR/Cas9系统的金针菇基因组编辑载体构建 被引量:11
5
作者 罗润 林俊芳 +3 位作者 郭丽琼 叶志伟 郭天芬 云帆 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第20期230-234,共5页
采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9,构建金针菇基因Mads-8敲除载体及转化体系。以转录组数据为依据,通过分析基因Mads-8序列信息,选择高效的靶位点序列,同时加入筛选标记基因hph构建过渡载体sgRNA-T,通过菌落PCR鉴定和测序来验证靶位点... 采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9,构建金针菇基因Mads-8敲除载体及转化体系。以转录组数据为依据,通过分析基因Mads-8序列信息,选择高效的靶位点序列,同时加入筛选标记基因hph构建过渡载体sgRNA-T,通过菌落PCR鉴定和测序来验证靶位点序列是否正确插入。以表达载体pg Fvs-cas9为框架,酶切连接后构建重组敲除载体pg Fvs-Cas9-gRNA,PCR和酶切鉴定敲除载体。再以PEG介导的金针菇原生质体转化表达载体,在潮霉素抗性平板上筛选拟转化子,以拟转化子基因组DNA为模板扩增Cas9基因。结果显示,靶位点序列成功插入敲除载体且序列正确,重组质粒成功转化进金针菇的基因组。对金针菇基因组敲除载体的构建,为后续金针菇相关基因的功能验证及育种研究提供载体材料及理论依据。 展开更多
关键词 金针菇 CRISPR/Cas9 转录组 MADS—box PEG转化
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金针菇耐高温新菌株的诱变选育 被引量:6
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作者 罗润 郭丽琼 +3 位作者 林俊芳 韩飞 李琼洁 康林芝 《中国食用菌》 2016年第4期18-23,共6页
以黄色金针菇(Flammulina velutipes)菌株FV7为材料,采用紫外线诱变、氯化锂诱变和甲基磺酸乙酯(EMS)诱变等多种诱变方法对金针菇的菌丝细胞进行诱变,诱变后的菌丝细胞经过菌丝体生长阶段33℃高温初筛和子实体发育阶段20℃中温复筛,并... 以黄色金针菇(Flammulina velutipes)菌株FV7为材料,采用紫外线诱变、氯化锂诱变和甲基磺酸乙酯(EMS)诱变等多种诱变方法对金针菇的菌丝细胞进行诱变,诱变后的菌丝细胞经过菌丝体生长阶段33℃高温初筛和子实体发育阶段20℃中温复筛,并经过多轮筛选获得耐高温突变菌株FV7EMS。研究结果表明,采用甲基磺酸乙酯对金针菇菌丝细胞的诱变效果明显,突变菌株FV7EMS能在20℃温度出菇,且生长速度快、菌柄较长,生物学效率比亲本FV7提高了28.82%,与亲本间存在较大的遗传差异。金针菇耐高温新品种的培育,对于降低工厂化栽培能耗、多季节栽培金针菇有重要的科学研究价值。 展开更多
关键词 金针菇 诱变育种 诱变剂 高温品种
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酿酒酵母转氨酶Ⅰ基因的克隆及序列分析 被引量:1
7
作者 刘晓蓉 郭丽琼 +5 位作者 林俊芳 康林芝 徐晓炜 文源华 陈宾 黎颖茵 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期180-183,共4页
利用酿酒酵母YT0801的总DNA为模板,采用PCR技术克隆出转氨酶I基因的DNA序列,利用生物信息学工具对其核酸序列和蛋白序列进行分析。测序结果表明DNA序列含有一个1503bp的开放阅读框,编码500个氨基酸,推测等电点为5.81,相对分子质量为56.... 利用酿酒酵母YT0801的总DNA为模板,采用PCR技术克隆出转氨酶I基因的DNA序列,利用生物信息学工具对其核酸序列和蛋白序列进行分析。测序结果表明DNA序列含有一个1503bp的开放阅读框,编码500个氨基酸,推测等电点为5.81,相对分子质量为56.2ku。同源性比对结果显示,该基因及推测的氨基酸序列与已报道的ARO8基因(Gen Bank Accession No:NM 001181067.1)的同源性均为100%。此外,对其理化性质、信号肽、疏水性、亲水性、二级结构和三级结构进行了分析。该基因的成功克隆,为其功能研究和生物合成2-苯乙醇提供了分子基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 转氨酶I 基因克隆 序列分析
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诱导物对猴头菇子实体生长发育及产量的影响 被引量:5
8
作者 VIMINHTHUAN 李雄 +2 位作者 郭丽琼 林俊芳 云帆 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期77-80,86,共5页
本文选用了7种诱导物(壳聚糖、茉莉酸甲酯、赤霉素、萘乙酸、三十烷醇、吲哚乙酸和2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))设定不同浓度,采用喷湿方法对猴头菇生长发育影响进行研究,结果表明0.5、1.0 mg/kg的茉莉酸甲酯和0.05、0.5 mg/kg的吲哚乙酸... 本文选用了7种诱导物(壳聚糖、茉莉酸甲酯、赤霉素、萘乙酸、三十烷醇、吲哚乙酸和2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))设定不同浓度,采用喷湿方法对猴头菇生长发育影响进行研究,结果表明0.5、1.0 mg/kg的茉莉酸甲酯和0.05、0.5 mg/kg的吲哚乙酸能显著缩短猴头菇的生长周期(p<0.05);1.5、2.0 mg/kg的赤霉素、1.0 mg/kg的萘乙酸及0.5、1.5、2.0 mg/kg的吲哚乙酸能显著提高猴头菇的产量(p<0.05)。其中,0.5 mg/kg吲哚乙酸既能缩短猴头菇生长周期(缩短4 d)又能提高产量(比对照组提高22.18%),有望进一步应用到生产中。 展开更多
关键词 猴头菇 诱导物 生长发育
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母乳源长双歧杆菌的筛选鉴定及耐氧驯化 被引量:2
9
作者 张凤 侯心悦 +2 位作者 郭丽琼 刘春花 林俊芳 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2023年第10期13-18,26,共7页
目的:从母乳中筛选双歧杆菌,并提高双歧杆菌在有氧条件下的耐受性。方法:采用稀释涂布法结合16S rDNA鉴定法从母乳中筛选出双歧杆菌,并采用逐渐增加氧分压和有氧厌氧交替的方法进行驯化。结果:筛选得一株MEFZ-2201菌株,通过16S rDNA测... 目的:从母乳中筛选双歧杆菌,并提高双歧杆菌在有氧条件下的耐受性。方法:采用稀释涂布法结合16S rDNA鉴定法从母乳中筛选出双歧杆菌,并采用逐渐增加氧分压和有氧厌氧交替的方法进行驯化。结果:筛选得一株MEFZ-2201菌株,通过16S rDNA测序比对,其与长双歧杆菌模式菌(NCBI登录号:ON631733.1)的同源性达到了100%,鉴定为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)。将长双歧杆菌MEFZ-2201进行驯化后,其有氧培养最高的活菌数为8.9×10^(9)CFU/mL,比未经驯化的菌株活菌数提高了一个数量级;此外,驯化前后菌株的生理生化及形态特征并未发生变异;在短链脂肪酸的产生量上,驯化后菌株在厌氧条件下产酸量也显著高于驯化前的菌株。结论:驯化后的长双歧杆菌MEFZ-2201在有氧条件下的活菌数明显提高,有望成为潜在的益生菌菌株进一步开发利用。 展开更多
关键词 母乳 长双歧杆菌 分离鉴定 活菌数 耐氧驯化 短链脂肪酸
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细菌素Lcn972A产生菌的鉴定及其基因的克隆与序列分析 被引量:1
10
作者 甘祥武 叶志伟 +4 位作者 郭心悦 郭丽琼 林俊芳 王艳婷 廖腾达 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第21期187-191,共5页
目的:从杏鲍菇子实体与海带中分离的63株乳酸菌中鉴定出产细菌素Lcn972A的菌株,并对细菌素编码基因进行克隆与基因序列分析。方法:采用生物信息学手段对已报道的细菌素Lcn972A编码基因进行分析比较,设计引物,分别以各乳酸菌基因组DNA为... 目的:从杏鲍菇子实体与海带中分离的63株乳酸菌中鉴定出产细菌素Lcn972A的菌株,并对细菌素编码基因进行克隆与基因序列分析。方法:采用生物信息学手段对已报道的细菌素Lcn972A编码基因进行分析比较,设计引物,分别以各乳酸菌基因组DNA为模板,利用PCR克隆技术克隆出细菌素Lcn972A的基因,利用生物信息学工具对其核酸序列和预测的蛋白序列进行分析。结果:在63株乳酸菌的基因组样品中有15组被克隆出目的条带,其中杏鲍菇乳酸菌A15与海带乳酸菌CX2样品PCR产物条带清晰稳定性好,经鉴定两样品的乳酸菌株为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。对克隆的细菌素Lcn972A基因测序结果表明该基因序列全长276 bp。生物信息学分析显示该基因编码91个氨基酸,分子量大小22843.3 u,等电点5.33,氨基酸序列为亲水性,二级结构主要由α-螺旋、无规卷曲和延伸链组成。结论:从分离自杏鲍菇子实体乳酸乳球菌A15与海带乳酸乳球菌株CX2的细菌素编码基因及氨基酸序列与报道的有所不同,可能是新的细菌素,该细菌素的抗菌特点有待进一步的研究。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 Lcn972A基因 分子鉴定 序列分析
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重组枯草芽孢杆菌素subtilosin A基因的合成及其在毕赤酵母中的表达
11
作者 陈柏雄 黄佳俊 +3 位作者 林俊芳 郭丽琼 陈俊飞 刘英丽 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期228-231,共4页
人工改造并合成subtilosin A的结构基因(rsbo A),并在毕赤酵母中诱导表达重组蛋白。结果表明:经阳性大肠杆菌转化子菌落PCR和测序鉴定,表明重组质粒p PIC9K-sbo构建正确;经阳性酵母转化子的菌落PCR产物电泳检测,可见清晰目的基因条带,... 人工改造并合成subtilosin A的结构基因(rsbo A),并在毕赤酵母中诱导表达重组蛋白。结果表明:经阳性大肠杆菌转化子菌落PCR和测序鉴定,表明重组质粒p PIC9K-sbo构建正确;经阳性酵母转化子的菌落PCR产物电泳检测,可见清晰目的基因条带,证明重组酵母GS115-p PIC9K-sbo构建正确;经枯草芽孢杆菌素蛋白电泳检测,可见明显蛋白条带,表明重组rsbo A基因在毕赤酵母GS115中获得了分泌表达。在抑菌效果检测中,重组酵母工程菌的发酵液对铜绿假单胞菌具有一定的抑菌活性。本研究开创了有望替代抗生素的小分子肽细菌素异源表达新思路,为枯草芽孢杆菌素subtilosin A的工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 subtilosinA 基因重组 毕赤酵母 抗菌活性
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