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不同诱导条件下的VBNC状态副溶血弧菌的PMA-qPCR定量检测及其呼吸活性分析 被引量:3
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作者 刘羽霏 方祥 +2 位作者 廖振林 王丽 钟青萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第20期215-221,共7页
定量检测不同诱导条件下的活的非可培养(viable but non-culturable,VBNC)状态副溶血弧菌的变化情况,并对VBNC菌的呼吸活性进行分析。采用叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与荧光定量聚合酶链式反应(fluorescence quantitative po... 定量检测不同诱导条件下的活的非可培养(viable but non-culturable,VBNC)状态副溶血弧菌的变化情况,并对VBNC菌的呼吸活性进行分析。采用叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)与荧光定量聚合酶链式反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,q PCR)结合的技术(PMA-q PCR)定量检测副溶血弧菌活菌数。结合激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪优化传统CTC(5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride)呼吸检测法对VBNC状态的副溶血弧菌进行分析。结果表明PMA-q PCR检测技术结合平板计数的方法,可用于定量检测副溶血弧菌诱导过程中活菌数和可培养菌数的变化情况,并利用差值测定出VBNC细胞的浓度。在不同的温度、Na Cl含量和氯霉素含量的诱导条件下,副溶血弧菌在其中的7种条件下在60 d内进入了VBNC状态。VBNC细胞终浓度最低为5.75×10~2 CFU/m L,最高为1.70×10~5 CFU/m L。在细胞呼吸实验中,采用CTC与4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)双染法能在激光扫描共聚焦显微镜下清晰地观察到VBNC细胞表面的红色荧光,有效区分死活细胞。同时利用流式细胞仪能够根据荧光强度快速区分呼吸活性呈阴性和阳性的细胞。本研究为VBNC细菌的检测和生理特性的研究提供了新的思路和依据。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 活的非可培养(VBNC)状态 PMA-qPCR 流式细胞仪 激光扫描共聚焦显微镜
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三重real-time PCR检测副溶血弧菌主要毒力基因 被引量:4
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作者 陈松 雷舒文 +2 位作者 上官文丹 刘丹 钟青萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第22期298-304,共7页
针对编码副溶血弧菌的特异性基因和主要毒力基因tlh、tdh、ureR进行引物及探针设计,通过优化反应条件,建立基于Taqman探针快速检测副溶血弧菌毒力基因的三重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方... 针对编码副溶血弧菌的特异性基因和主要毒力基因tlh、tdh、ureR进行引物及探针设计,通过优化反应条件,建立基于Taqman探针快速检测副溶血弧菌毒力基因的三重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法。利用10株副溶血弧菌和22株非副溶血弧菌对设计的引物及探针进行特异性验证,结果表明设计的引物及探针具有很高的特异性;优化后的引物浓度分别为tdh 0.15μmol/L、tlh 0.15μmol/L、ureR 0.80μmol/L,探针浓度分别为HEX 0.50μmol/L、FAM 0.50μmol/L;该方法即使在高浓度的背景细菌存在下,DNA浓度与Ct值均呈良好的线性关系,检出限为1.8×10^(2)拷贝/mL;以完整菌细胞的悬液为模板时,预变性时间为30 min,扩增检测效果与以基因组DNA(gDNA)为模板相当(ΔCt<1)。本研究建立的三重real-time PCR方法能实现快速定量检测副溶血弧菌,并能有效区分致病性及非致病性副溶血弧菌,为副溶血弧菌的快速定量检测和风险评估提供快速、灵敏、准确的方法。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 多重实时聚合酶链式反应 快速检测 毒力基因
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广州市售海产品中副溶血弧菌分离菌株的鉴定及其耐药性分析 被引量:4
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作者 刘欢 谢婷 +2 位作者 何美珊 丁楠 钟青萍 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期28-34,共7页
对8株分离自广州市售海产品中的副溶血弧菌菌株进行鉴定,并分析了其耐药性。于2017年4~5月采集市售海产品,按照国标法对其中的副溶血弧菌进行分离鉴定,并进行16S r DNA同源性比较。采用K-B纸片法和结晶紫染色法分别评估了副溶血弧菌菌... 对8株分离自广州市售海产品中的副溶血弧菌菌株进行鉴定,并分析了其耐药性。于2017年4~5月采集市售海产品,按照国标法对其中的副溶血弧菌进行分离鉴定,并进行16S r DNA同源性比较。采用K-B纸片法和结晶紫染色法分别评估了副溶血弧菌菌株对20种常见抗生素的药物敏感性及其生物膜形成能力。结果表明,8株分离菌株对多粘菌素B、头孢他啶、庆大霉素、强力霉素、氯霉素、红霉素、环丙沙星、萘啶酸这8种抗生素均为敏感,对青霉素、万古霉素2种抗生素均显示耐药,对其他10种抗生素有不同程度的耐药性。相比ATCC17802菌株,分离菌株多重耐药性更为显著,耐抗生素数量为3~10种。分析菌株的生物膜形成能力,发现其耐药性与生物膜形成能力呈正相关。海产品中副溶血弧菌耐药性普遍且多重耐药性显著的现象,应该予以广泛关注和重视。 展开更多
关键词 海产品 副溶血弧菌 鉴定 耐药性 生物膜
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体外模拟胃肠消化中山楂多酚及抗氧化活性的变化 被引量:25
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作者 陈希苗 李美英 +2 位作者 许秋莉 熊楚欣 孙远明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第5期31-37,共7页
本实验研究了山楂多酚、黄酮及抗氧化活性在体外模拟胃肠道环境下的变化规律,并利用高效液相色谱法测定了胃肠消化对山楂中5 种主要单体酚类化合物的影响。结果表明:山楂多酚在模拟胃液消化中稳定性较好,总多酚、黄酮含量及抗氧化能力... 本实验研究了山楂多酚、黄酮及抗氧化活性在体外模拟胃肠道环境下的变化规律,并利用高效液相色谱法测定了胃肠消化对山楂中5 种主要单体酚类化合物的影响。结果表明:山楂多酚在模拟胃液消化中稳定性较好,总多酚、黄酮含量及抗氧化能力均无显著性变化(P>0.05);而在模拟肠液消化中山楂多酚易发生降解,总多酚、黄酮含量在0.5 h内分别降低16.26%和7.46%,抗氧化能力也随之降低10.25%。高效液相色谱测定结果显示,5 种单体酚类化合物含量在胃液消化中无显著性变化(P>0.05);而在肠液消化中变化情况不相一致,其中金丝桃苷和异槲皮苷含量无显著性变化(P>0.05),表儿茶素在0.5 h内完全降解,绿原酸和原花青素B_2在0.5 h内分别显著下降40.78%和28.99%(P<0.05)。 展开更多
关键词 山楂 模拟胃肠消化 多酚 抗氧化活性
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壳寡糖通便功能的研究 被引量:4
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作者 梁宇轩 欧阳冬梅 +7 位作者 王达 陈咏春 刘焕 贺永健 庄新栋 黄日明 孙远明 王弘 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2018年第17期173-178,共6页
研究壳寡糖对小鼠通便功能。将昆明雄性小鼠按体重随机分成空白对照组、模型对照组和3个剂量组。剂量组分别经口给予低、中、高剂量(99.2、198.4、396.8 mg/(kg·d))壳寡糖溶液;空白对照组和模型对照组给予蒸馏水,干预时间为7 d。... 研究壳寡糖对小鼠通便功能。将昆明雄性小鼠按体重随机分成空白对照组、模型对照组和3个剂量组。剂量组分别经口给予低、中、高剂量(99.2、198.4、396.8 mg/(kg·d))壳寡糖溶液;空白对照组和模型对照组给予蒸馏水,干预时间为7 d。用盐酸洛哌丁胺造小鼠便秘模型。观察各组小鼠的小肠墨汁推进率、首粒排黑便时间、6 h黑便粒数和6 h黑便重量以及粪便含水量。结果表明:与模型对照组比,壳寡糖中剂量组小肠墨汁推进率和6 h黑便重量显著增加(p<0.05);壳寡糖高剂量组小肠墨汁推进率极显著增加(p<0.01)、首粒排黑便时间极显著缩短(p<0.01)、6 h黑便重量与6 h黑便粒数显著增加(p<0.05);在粪便含水量上,各剂量组同空白对照组、模型对照组比无显著性差异。壳寡糖能有效增强小鼠肠道蠕动并促进排便,具有通便功能。 展开更多
关键词 壳寡糖 低聚糖 通便 小鼠 便秘
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香蕉皮原花色素的酶解辅助提取及稳定性研究 被引量:5
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作者 贾宝珠 卢胜洪 +4 位作者 方穗恋 鲍金勇 陈子键 杨公明 罗林 《广东农业科学》 CAS 2018年第11期95-103,共9页
采用酶解辅助提取法对香蕉皮中原花色素的提取工艺进行优化,并对其稳定性进行研究。结果表明,酶解试验的最佳工艺为:酶添加量0.8%,酶解温度50℃,酶解时间45 min;提取试验的最佳工艺为:料液比1∶23(W/V,g/mL),提取温度65℃,提取时间75 mi... 采用酶解辅助提取法对香蕉皮中原花色素的提取工艺进行优化,并对其稳定性进行研究。结果表明,酶解试验的最佳工艺为:酶添加量0.8%,酶解温度50℃,酶解时间45 min;提取试验的最佳工艺为:料液比1∶23(W/V,g/mL),提取温度65℃,提取时间75 min。在最佳的工艺条件下,原花色素的提取得率为1.702%。随着温度的升高和时间的延长,香蕉皮原花色素稳定性逐渐降低。抗坏血酸、柠檬酸和苹果酸对香蕉皮原花色素具有保护作用。Na+、Ca2+、K+、Cu2+和Fe3+等金属离子会对香蕉皮原花色素起破坏作用,其中Cu2+和Fe3+的影响最为显著。苯甲酸钠和山梨酸钾会降低香蕉皮原花色素的稳定性,但影响相对较小。 展开更多
关键词 酶处理 香蕉皮 原花色素 提取工艺 稳定性
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病毒性动物疫病诊断技术研究进展 被引量:3
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作者 杨旭琼 杨金易 王弘 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期294-306,共13页
动物疫病的大暴发不仅严重影响畜牧业的生产与发展,造成巨大经济损失,而且会严重危害人类健康。病毒性疫病的增加使得动物疫病更加复杂,流行趋势更加严峻。灵敏、特异、快速地诊断动物疫病是实施疫病防控措施的关键环节。基于PCR技术及... 动物疫病的大暴发不仅严重影响畜牧业的生产与发展,造成巨大经济损失,而且会严重危害人类健康。病毒性疫病的增加使得动物疫病更加复杂,流行趋势更加严峻。灵敏、特异、快速地诊断动物疫病是实施疫病防控措施的关键环节。基于PCR技术及等温扩增技术的分子生物学诊断解决了传统病原学诊断费时费力、免疫血清学存在的窗口期等问题并摆脱了对高精度温控设备的依赖,成为目前常用的病原体筛查方法。但大多数检测方法一次只能检测到一个或几个病原体,且复杂的试验流程及对设施的高要求降低了立即干预突发疫情的能力,同时无法满足某些检测分析需求。近年来,学科间相互渗透融合的高通量诊断技术发展迅速,具有同时监测、检测和表征成百上千个靶点的能力,能满足在多种环境下的病原体快速检测的需求,是生命科学发展过程中一种重要的生物学检测手段。笔者从病原学、免疫血清学、分子生物学及高通量诊断等方面对主要的病毒性动物疫病检测技术进行了综述,展望未来动物疫病诊断检测技术的发展,以期为动物疫病快速诊断提供更多的方案思路,提升动物疫病的防控能力。 展开更多
关键词 病毒 动物疫病 诊断技术
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抗克百威单链抗体的可溶性表达、纯化与鉴定 被引量:1
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作者 詹屋强 黄宇婷 +4 位作者 张瑾如 李家冬 刘姚 沈兴 王弘 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第20期77-82,89,共7页
在前期获得了抗克百威单链抗体基因的基础上,为进一步研究克百威单链抗体的性质,本文构建了两种抗克百威单链抗体可溶表达载体,p ET22b(+)-C-6His-CBF-sc Fv和p ET22b(+)-N-6His-CBF-sc Fv。比较His标签处于不同位置时,目的蛋白与Ni结... 在前期获得了抗克百威单链抗体基因的基础上,为进一步研究克百威单链抗体的性质,本文构建了两种抗克百威单链抗体可溶表达载体,p ET22b(+)-C-6His-CBF-sc Fv和p ET22b(+)-N-6His-CBF-sc Fv。比较His标签处于不同位置时,目的蛋白与Ni结合作用,发现His标签处于N端的目的蛋白与Ni结合作用比His标签处于C端时要强。对影响N-6His-CBF-sc Fv可溶性表达的条件进行优化,进而对其进行纯化。结果表明,当选用LB培养基,表达温度18℃,表达时间为16 h,IPTG浓度为1 mmol/L时可溶表达效果最好,可溶表达的目的蛋白量占总目的蛋白量从优化前的10%增加到50%。优化表达后的N-6His-CBF-sc Fv破壁上清经Ni Sepharose HP金属螯合亲和层析及阳离子交换层析两步纯化,纯化后纯度达90%。经ic ELISA鉴定,抗克百威单链抗体保持抗原结合活性,IC_(50)值为63.80 ng/m L。获得的抗克百威单链抗体可用于后续特性研究。 展开更多
关键词 克百威 单链抗体 分泌表达 纯化 鉴定
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果蔬发酵制品的功效及应用研究进展 被引量:14
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作者 丁楠 何美珊 +2 位作者 戈子龙 卢承蓉 钟青萍 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第7期332-336,共5页
近年来以新鲜果蔬、食用真菌等为原料,经过酵母菌、乳酸菌等多种有益菌发酵而成的功能性发酵制品在我国发展迅速,其营养价值高,富含多酚类、黄酮类、有机酸类、益生菌、益生元、维生素、矿物质、生物酶等功效成分,具有抗氧化、消炎抑菌... 近年来以新鲜果蔬、食用真菌等为原料,经过酵母菌、乳酸菌等多种有益菌发酵而成的功能性发酵制品在我国发展迅速,其营养价值高,富含多酚类、黄酮类、有机酸类、益生菌、益生元、维生素、矿物质、生物酶等功效成分,具有抗氧化、消炎抑菌、改善肠道功能、提高免疫力、解酒护肝等功效。随着人们生活水平的提升,绿色健康保健型产品越来越受到消费者的青睐,因此,研究和开发功能性果蔬类发酵产品意义重大。本文综述了果蔬发酵制品的功效及其在食品行业、种植业、畜牧业和水产养殖业中的应用,展望了我国果蔬发酵产品应用的广阔前景,以期促进果蔬的综合加工利用及其发酵产业的发展,为高效开发功能性果蔬发酵产品,并实现其工业化生产提供参考资料。 展开更多
关键词 果蔬发酵 功效 应用
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