纤维素酶活力测定研究进展 被引量：13

1

作者 程抒劼 郑兰娟 +3 位作者 林俊芳 娄囡囡 赵力超 郭丽琼 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期334-336,342,共4页

纤维素酶是一种多酶复合体系,其作用的底物比较复杂,活力测定方法也存在差异。如何准确测定纤维素酶活力的大小,对于研究该酶的特性及应用具有重要的意义。本文对纤维素酶测定的常用方法进行了综述和评价。

关键词 纤维素酶 活力测定 方法

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紫杉烯合酶基因遗传转化金针菇的研究 被引量：7

2

作者 康林芝 林俊芳 +2 位作者 黄秀琴 郭丽琼 梁科 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期190-193,共4页

利用紫杉烯合酶基因(ts)和潮霉素抗性基因(hph),采用PEG转化法共转化金针菇的原生质体。研究结果表明,18个拟转化子中有8个转化子同时整合了ts基因和hph基因,两个基因的共转化率为44.44%;RT-PCR鉴定结果表明,7个金针菇转化子实现了外源t... 利用紫杉烯合酶基因(ts)和潮霉素抗性基因(hph),采用PEG转化法共转化金针菇的原生质体。研究结果表明,18个拟转化子中有8个转化子同时整合了ts基因和hph基因,两个基因的共转化率为44.44%;RT-PCR鉴定结果表明,7个金针菇转化子实现了外源ts基因的转录。金针菇转化子在不含潮霉素(HmB)的PDA平板上经5次继代培养后仍检测到有HmB抗性,说明外源基因在金针菇转化子的无性繁殖(即有丝分裂)过程中是稳定的。本研究为通过基因工程手段定向、快速改良金针菇品种以及利用金针菇作为生物反应器生产一些具有重大经济价值的外源基因产物奠定了基础。 展开更多

关键词 金针菇 遗传转化 紫衫烯合酶 紫杉醇前体

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猴头菌固体发酵基质的抗氧化活性成分研究 被引量：3

3

作者 张新超 郭丽琼 +1 位作者 林俊芳 雷韵祺 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2011年第4期43-47,共5页

选用燕麦、大豆、玉米、麸皮、大米、荞麦6种培养基质,对猴头菌进行固体发酵及抗氧化活性研究。结果表明:猴头菌最佳抗氧化发酵基质为荞麦大豆培养基(荞麦79.13%,大豆20.87%),最佳发酵条件为温度30℃,培养料粒度40目,培养基含水量70%,初... 选用燕麦、大豆、玉米、麸皮、大米、荞麦6种培养基质,对猴头菌进行固体发酵及抗氧化活性研究。结果表明:猴头菌最佳抗氧化发酵基质为荞麦大豆培养基(荞麦79.13%,大豆20.87%),最佳发酵条件为温度30℃,培养料粒度40目,培养基含水量70%,初始pH值4,接种量4.5%,发酵时间12d。猴头菌荞麦发酵基质抗氧化活性成分种类丰富,含量高,其中总黄酮物质87.13μg/g,总三萜2.58mg/g,多酚4.51mg/g,还原糖21.53mg/g,花色苷68.96μg/g,VC14.07mg/g,VE205.85μg/g,GSH 853.65mg/g,SOD酶活性293.57U/g。 展开更多

关键词 猴头菌 固体发酵 发酵基质 抗氧化成分

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亚/超临界乙醇中玉米秸秆水提取物的反应机理研究 被引量：1

4

作者 刘华敏 解新安 +2 位作者 丁年平 郑璐丝 刘焕彬 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第6期193-199,共7页

【目的】建立玉米秸秆水提取物在亚/超临界乙醇中反应后各集总组分之间的主要反应路径图,并考查反应过程中乙醇对产物的影响机理。【方法】用容量为1 L的间歇式反应试验装置,取玉米秸秆水溶性提取物在乙醇中进行反应,利用集总的方法将... 【目的】建立玉米秸秆水提取物在亚/超临界乙醇中反应后各集总组分之间的主要反应路径图,并考查反应过程中乙醇对产物的影响机理。【方法】用容量为1 L的间歇式反应试验装置,取玉米秸秆水溶性提取物在乙醇中进行反应,利用集总的方法将玉米秸秆水溶性有机物和产物归总为气体、易挥发物、轻油、重油、固体物(不溶于水和丙酮)5个集总组分,研究反应温度从140℃上升至300℃,及在300℃条件下反应过程中各集总组分的分布规律。【结果】玉米秸秆水溶性提取物在亚/超临界乙醇条件下,主要生成了挥发物、气体、固体物和重油,其中挥发物与固体物之间存在着可逆反应,固体物在亚/超临界乙醇的作用下又可进一步反应转化成挥发物,重油在液化过程中生成较少,在整个反应过程中最高收率为9.46%。【结论】乙醇在液化过程中除起到传热作用和充当反应溶剂的作用外,还为反应过程提供自由基,对产物具有重整作用。 展开更多

关键词 玉米秸秆水提取物 反应路径 集总分析 反应机理

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蛹虫草发酵苦荞菌质的成分分析及抗氧化活性的研究 被引量：7

5

作者 陈雪巧 林俊芳 +1 位作者 彭志妮 郭丽琼 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期166-169,174,共5页

以苦荞为培养基质,对蛹虫草固体发酵前后的营养和功能成分及抗氧化活性进行测定,分析各种物质含量及抗氧化活性变化。结果表明,发酵苦荞菌质总氮、总糖、可溶性总糖、还原糖含量显著[总氮、总糖(p<0.01),可溶性总糖、还原糖(p<0.0... 以苦荞为培养基质,对蛹虫草固体发酵前后的营养和功能成分及抗氧化活性进行测定,分析各种物质含量及抗氧化活性变化。结果表明,发酵苦荞菌质总氮、总糖、可溶性总糖、还原糖含量显著[总氮、总糖(p<0.01),可溶性总糖、还原糖(p<0.05)]低于未发酵基质,游离氨基酸含量有极显著性增加(p<0.01),粗多糖、总黄酮、总酚、花色苷、维生素C、GSH(谷胱甘肽)、SOD(超氧化歧化酶)等功能成分均显著(粗多糖p<0.05,其余均p<0.01)高于未发酵基质。苦荞ABTS[2,2′-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)]体外抗氧化实验表明各萃取(石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取部及水部)均具有一定的抗氧化作用,当浓度为10mg/mL时,乙酸乙酯萃取部和水部与TBHQ(叔丁基对苯二酚)、BHT(2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚)及VC(维生素C)清除率相当,达100%。对抗氧化活性最高的水部和乙酸乙酯萃取部进行HPLCMS/MS分析,结果显示乙酸乙酯萃取部含有芦丁、槲皮素及含有槲皮素结构碎片、儿茶素结构碎片的物质;水部含有槲皮素、芦丁、山奈酚-3-芸香糖苷及含有槲皮素结构碎片、山奈酚结构碎片的物质。 展开更多

关键词 蛹虫草 苦荞发酵菌质 营养成分 抗氧化 HPLC—MS MS

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pCAAFP66表达载体的构建及其大豆遗传转化的研究 被引量：1

6

作者 赵印华 陈颖珊 +2 位作者 郭丽琼 覃凤云 林俊芳 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期541-545,共5页

以pCAMBIA3301为载体骨架,afp为目的基因,构建了大小为9 868 bp的大豆表达载体pCAAFP66,该载体带有抗冷冻蛋白基因afp和筛选标记基因bar。以大豆品种华春3号和华春6号的胚尖和子叶节为外植体,应用农杆菌介导法进行遗传转化,以草甘膦(PPT... 以pCAMBIA3301为载体骨架,afp为目的基因,构建了大小为9 868 bp的大豆表达载体pCAAFP66,该载体带有抗冷冻蛋白基因afp和筛选标记基因bar。以大豆品种华春3号和华春6号的胚尖和子叶节为外植体,应用农杆菌介导法进行遗传转化,以草甘膦(PPT)为筛选底物。结果表明:在胚尖转化体系中,华春3号和华春6号初转化频率分别为7.0%和4.0%,在子叶节转化体系中,2个品种都未获得转化植株。 展开更多

关键词 抗冷冻蛋白 载体构建 农杆菌介导 大豆遗传转化

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灰树花固体发酵茶青的研究

7

作者 马立青 郭丽琼 +1 位作者 林俊芳 邹毓琳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期228-230,246,共4页

以茶青为发酵培养基质,对灰树花固体发酵过程中的各种内含物含量的变化及其品质进行了研究。结果表明,灰树花的最佳发酵培养基成分及培养条件:中叶茶,2%大豆粉,接种量1%,培养温度25℃,培养时间9d。发酵后其菌质的有效成分为:茶多酚1.78%... 以茶青为发酵培养基质,对灰树花固体发酵过程中的各种内含物含量的变化及其品质进行了研究。结果表明,灰树花的最佳发酵培养基成分及培养条件:中叶茶,2%大豆粉,接种量1%,培养温度25℃,培养时间9d。发酵后其菌质的有效成分为:茶多酚1.78%,游离氨基酸0.77%,酚氨比2.3,多糖4.69%。与发酵前比较其多糖含量增加了31.7%,茶多酚降解了77.8%,游离氨基酸降低了26.7%,酚氨比降低了69.9%,茶叶品质得到很大改善。 展开更多

关键词 多糖 茶多酚 氨基酸 茶青

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亚/超临界乙醇液化玉米秸秆反应路径与机理 被引量：14

8

作者 刘华敏 解新安 +2 位作者 丁年平 刘焕彬 黄璐怡 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第6期277-282,共6页

为了建立玉米秸秆在亚/超临界乙醇中进行液化各集总组分之间的主要反应路径图,考查反应过程中乙醇对产物的影响机理。该文利用集总的方法,根据产物和原料的性质将产物与原料分为气体、易挥发物、轻油、重油、固体物5个集总,考查了液化过... 为了建立玉米秸秆在亚/超临界乙醇中进行液化各集总组分之间的主要反应路径图,考查反应过程中乙醇对产物的影响机理。该文利用集总的方法,根据产物和原料的性质将产物与原料分为气体、易挥发物、轻油、重油、固体物5个集总,考查了液化过程(升温过程和反应过程)和乙醇量对各集总产物的分布规律的影响,建立了5集总组分之间的主要液化反应路径图。结果表明,玉米秸秆在反应温度到达180℃之前主要是水溶性有机物参加反应,主要生成了挥发物、气体与少量的重油;当反应温度达到180℃之后玉米秸秆3种主要成分(纤维素、半纤维素、木质素)开始液化,主要产物是挥发物、轻油、重油和气体;液化过程中挥发物与重油之间存在着可逆反应,轻油在液化过程中发生二次反应主要生成气体。乙醇在液化过程中除了起到了传热作用和充当反应溶剂外还为反应过程提供自由基,对产物起到了重整作用。 展开更多

关键词 乙醇 液化 集总参数网络 机理 玉米秸秆

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木聚糖酶酶活性测定方法及酶活性单位定义 被引量：22

9

作者 王晓丹 郭丽琼 +1 位作者 赵力超 林俊芳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期128-131,共4页

为统一木聚糖酶酶活性的单位定义及测定方法进行了实验。通过对现有酶活性的单位定义及测定方法的比较分析,得出木聚糖酶的酶活性单位定义为:在特定条件下,每分钟水解木聚糖形成1μmol木糖(还原糖)所需酶量为1个酶活力单位(U),并且采用... 为统一木聚糖酶酶活性的单位定义及测定方法进行了实验。通过对现有酶活性的单位定义及测定方法的比较分析,得出木聚糖酶的酶活性单位定义为:在特定条件下,每分钟水解木聚糖形成1μmol木糖(还原糖)所需酶量为1个酶活力单位(U),并且采用还原糖法中的DNS法作为测定木聚糖酶酶活性的方法,该法具有合理性和科学性,建议以此作为木聚糖酶酶活性测定及酶活性单位定义的统一方法。 展开更多

关键词 木聚糖酶 酶活性测定 酶活性单位定义

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产油微生物的筛选 被引量：10

10

作者 叶思特 郭丽琼 +2 位作者 刘晓蓉 陈晓阳 林俊芳 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期384-387,397,共5页

采用苏丹黑B染色法、甲醇-氯仿法,从30份土壤样品中筛选到9株产油霉菌和4株产油酵母.经5.8S rDNA序列分析,9株产油霉菌分别为蓝状菌Talaromyces trachyspermus、嗜松青霉Penicillium pinophillum、青霉Pe.sp.、微紫青霉Pe.janthinellum... 采用苏丹黑B染色法、甲醇-氯仿法,从30份土壤样品中筛选到9株产油霉菌和4株产油酵母.经5.8S rDNA序列分析,9株产油霉菌分别为蓝状菌Talaromyces trachyspermus、嗜松青霉Penicillium pinophillum、青霉Pe.sp.、微紫青霉Pe.janthinellum、淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus、简青霉Pe.simplicissimum.、棘孢曲霉Aspergillus aculea-tus、木霉Trichoderma sp.、拟康宁木霉Tr.koningiopsis,4株产油酵母分别是毕赤酵母Pichia caribbica、假丝孢酵母Candida sp.、季也蒙酵母Meyerozyma guilliermondii和季也蒙毕赤酵母Pi.guilliermondii.通过摇瓶培养,测定了各菌株的产油量,结果表明:霉菌产油量最高的是嗜松青霉,产油量为26.4%;酵母产油量最高的是假丝孢酵母,产油量为44.3%.提取毕赤酵母的油脂,采用气相色谱-质谱联用分析,测得其油脂成分主要是14～20碳的短链脂肪酸. 展开更多

关键词 产油微生物 筛选 微生物油脂

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南方红豆杉GGPP合酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量：8

11

作者 韩飞 康林芝 +2 位作者 郭丽琼 陈晓阳 林俊芳 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期728-733,共6页

根据GeneBank中公布的GGPPS基因保守区设计特异引物,克隆南方红豆杉GGPPS基因的DNA和cDNA序列,并通过生物信息学方法对其核苷酸序列和蛋白质结构进行分析预测。结果表明,GGPPS基因DNA和cDNA序列都为1 182 bp,DNA序列中无内含子,cDNA序... 根据GeneBank中公布的GGPPS基因保守区设计特异引物,克隆南方红豆杉GGPPS基因的DNA和cDNA序列,并通过生物信息学方法对其核苷酸序列和蛋白质结构进行分析预测。结果表明,GGPPS基因DNA和cDNA序列都为1 182 bp,DNA序列中无内含子,cDNA序列为一个编码393个氨基酸残基的开放式阅读框;GGPPS的理论相对分子质量为42 590,等电点为5.68。核苷酸同源性分析显示,它与Taxus canadensis(AF081514)同源性为98.8%;推导出的氨基酸序列与Taxus canadensis(AAD16018)同源性达99.0%。利用Protparam、SignalP、ProtScale、SOPMA、Swiss-Modeling、Scan Prosite和MEGA4.0等生物信息学工具分别对其理化性质、信号肽、疏水性、亲水性、二级结构、三级结构和进化树进行分析,为其功能研究和生物合成紫杉醇研究提供分子基础。 展开更多

关键词 南方红豆杉 GGPPS 克隆 序列分析

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宏基因组漆酶基因片段的克隆与分析 被引量：7

12

作者 黄循柳 黄仕杰 +1 位作者 郭丽琼 林俊芳 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期746-751,共6页

关键词 宏基因组 DNA提取方法 简并引物 漆酶基因克隆

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银耳芽孢内源gpd启动子的克隆与功能鉴定 被引量：8

13

作者 聂燕华 林俊芳 +2 位作者 王杰 尤琳烽 郭丽琼 《食用菌学报》 北大核心 2012年第2期1-7,共7页

利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremellafuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验。... 利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremellafuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验。结果表明:4轮反向长距离PCR克隆得到了1761bp的上游序列,经预测启动子落在上游1000bp左右区域内,包含两个高分值的起始转录位点,将gpd启动子分成gpd-Tre1(885bp)、gpd-Tre2(708bp)、gpd-Tre3(466bp)3段区域,分别与多功能纤维素基因(mfc)构建表达载体pgTre1-mfc、pgTre2-mfc和pgTre3-mfc。拟共转化子酶活发酵试验结果发现3个表达载体的转化子均能检测到多功能纤维素酶活,转化子T1-2包含gpd-Tre1启动子大片段,整体酶活最高,CMC酶活为14.12U/mL,比出发菌株Tr01提高34.3%,比工程菌株yLes3提高25.7%,木聚糖酶活为34.8U/mL,比Tr01酶活提高26.3%,略低于yLes3。3个启动子片段均具有表达活性,相比之下885bp的大片段gpd启动子表达活性更高。 展开更多

关键词 银耳 芽孢 gpd启动子 反向长距离PCR 多功能纤维素酶

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不同草菇栽培菌株的比较 被引量：8

14

作者 王玮 林俊芳 +2 位作者 聂斐 郭丽琼 孙萍 《食用菌学报》 北大核心 2012年第2期59-62,共4页

对中国不同地区的24个草菇栽培菌株的子实体颜色、菌膜厚度、菌柄形态及着生方式、菌托形态和生物转化率进行比较,结果表明:不同的草菇栽培菌株子实体形态存在差异,子实体的蛋型期颜色呈现深灰色、灰色和灰白色,以灰色居多;成熟期呈现... 对中国不同地区的24个草菇栽培菌株的子实体颜色、菌膜厚度、菌柄形态及着生方式、菌托形态和生物转化率进行比较,结果表明:不同的草菇栽培菌株子实体形态存在差异,子实体的蛋型期颜色呈现深灰色、灰色和灰白色,以灰色居多;成熟期呈现灰色和灰白色,同样以灰色居多。V365菌膜最厚,为2.75mm;单生草菇菌膜最薄,仅为0.95mm。菌柄有2种形态:上细下粗和基本等粗,菌托有3种形态:圆筒形、两瓣形和三瓣形;菌柄着生方式包括菌柄中生和菌柄偏生。不同菌株的生物转化率也存在差异,其中V365生物转化率最高,达48.6%;A8最低,仅有3.1%。 展开更多

关键词 草菇 子实体 形态特征 生物转化率

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南方红豆杉10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量：4

15

作者 程抒劼 黄仕杰 +2 位作者 郭丽琼 韩飞 林俊芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期107-112,共6页

对中国重要药用植物南方红豆杉中的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因进行分离、测序以及生物信息学分析。根据GenBank中已登录的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从南方红豆杉叶片... 对中国重要药用植物南方红豆杉中的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因进行分离、测序以及生物信息学分析。根据GenBank中已登录的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从南方红豆杉叶片中克隆了1个DBAT基因Tc-DBAT的全长cDNA。结果显示,Tc-DBAT cDNA含有1个1 323 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码440个氨基酸,对应基因组序列含有1个内含子。Tc-DBAT蛋白N端含有5个N-酰基化作用位点和2个保守的N-糖基化作用位点,具有1个保守的B ig-1结构域,多个重要的磷酸化位点以及1个类似钙结合蛋白重复结构。序列同源性比较、系统发生分析以及蛋白质高级结构预测均表明,Tc-DBAT属于转移酶超家族(transferase superfamily),是一个具有乙酰转移酶活性的功能蛋白,能够催化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)10位的乙酰化,从而生成抗癌新药紫杉醇生物合成途径中的最后一个双萜中间体——巴卡亭Ⅲ。有望通过成功克隆和鉴定紫杉醇生物合成途径中的关键酶基因达到提高其半合成前体巴卡亭Ⅲ产量的目的,并且为进一步利用组合表达系统商业化生产紫杉醇奠定基础。 展开更多

关键词 南方红豆杉 紫杉醇 10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶 基因克隆 生物信息学分析

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基于TG-FTIR棉秆热解过程木醋液成分分析 被引量：7

16

作者 周岭 李凤娟 蒋恩臣 《可再生能源》 CAS 北大核心 2012年第11期74-77,共4页

以新疆中棉35棉秆为原料,采用热红联用手段,对棉秆热解及木醋生成机理进行了研究。结果表明,棉秆在25～600℃的热解过程可分为4个阶段:失水、预热、主热解及炭化。其中,主热解阶段发生复杂的反应,失重率最大,此阶段对应吸光率最大处的... 以新疆中棉35棉秆为原料,采用热红联用手段,对棉秆热解及木醋生成机理进行了研究。结果表明,棉秆在25～600℃的热解过程可分为4个阶段:失水、预热、主热解及炭化。其中,主热解阶段发生复杂的反应,失重率最大,此阶段对应吸光率最大处的红外图谱出现复杂的叠加带,分子间及分子内易形成氢键的羟基脱落,同时发生脱羧基、糖苷键断裂、环内C-O基团断裂、C-C键断裂,该阶段是木醋成分生成的主要阶段。 展开更多

关键词 棉秆 木醋 热解 红外联用

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蔓地亚红豆杉3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶基因的克隆与序列分析 被引量：2

17

作者 黄仕杰 程抒劼 +2 位作者 郭心悦 郭丽琼 林俊芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期191-195,共5页

3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶(DBTNBT)是催化紫杉醇生物合成最后一步反应所需要的酶,负责将带有不完全侧链的紫杉醇前体催化形成紫杉醇。利用蔓地亚红豆杉的总DNA和总RNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术克隆出DBTNBT基因的DNA... 3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶(DBTNBT)是催化紫杉醇生物合成最后一步反应所需要的酶,负责将带有不完全侧链的紫杉醇前体催化形成紫杉醇。利用蔓地亚红豆杉的总DNA和总RNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术克隆出DBTNBT基因的DNA序列和cDNA序列,测序结果显示长度分别为1465bp和1362bp,编码438个氨基酸的多肽。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的蔓地亚红豆杉的DBTNBT基因的一致性为99%,其氨基酸序列与已经报道的蔓地亚红豆杉的DBTNBT氨基酸序列的一致性为96%。DNA序列和cDNA序列比对发现该基因含有1个内含子。利用SWISS-PROT、DNAMAN等生物信息学工具对其蛋白序列进行了分析,为利用基因工程的方法生产紫杉醇或其前体物质提供了分子基础。 展开更多

关键词 蔓地亚红豆杉 紫杉醇 3′-N-去苯甲酰-2-脱氧紫杉醇苯甲酰转移酶 基因克隆 序列分析

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草菇高产新菌种的选育 被引量：2

18

作者 赵风云 林俊芳 +3 位作者 叶泽波 王艺红 杨博 郭丽琼 《食用菌学报》 北大核心 2009年第4期23-26,共4页

草菇V23原生质体再生菌丝经过0℃低温胁迫处理108 h后,筛选出菌丝较耐低温的菌株V23a,获得V23a的孢子分离菌株（Spore Isolation Strains,SIS）,经栽培后,筛选生物学效率高的菌株进行组织分离,获得组织分离菌株（Tissue Isolation Strai... 草菇V23原生质体再生菌丝经过0℃低温胁迫处理108 h后,筛选出菌丝较耐低温的菌株V23a,获得V23a的孢子分离菌株（Spore Isolation Strains,SIS）,经栽培后,筛选生物学效率高的菌株进行组织分离,获得组织分离菌株（Tissue Isolation Strains,TIS）,选出其中生物学效率最高的Va2作为草菇高产新菌种,其生物学效率比对照V23高14.27%。选育过程中分析了SIS菌株的气生菌丝密度、厚垣孢子数量和出菇率,比较了SIS和TIS菌株的菌丝生长速度、原基数、生产周期、单菇平均质量和生物学效率等主要性状。结果表明,可出菇的SIS菌株其子实体产量差异较大,但均低于对照菌株V23。TIS菌株的产量比SIS的提高了0-87.18%。 展开更多

关键词 草菇 孢子分离 组织分离 生物学效率

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外显子拼接法克隆紫杉烷2α-羟基化酶基因与生物信息学分析 被引量：1

19

作者 黄仕杰 陈平 +3 位作者 陈晓阳 辛燕花 郭丽琼 林俊芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期186-192,共7页

紫杉烷2α-羟基化酶是形成紫杉醇核心骨架的羟基化反应关键酶之一,以taxusin作为底物进行氧化生成2α,7β-dihydroxytaxusin。利用蔓地亚红豆杉的总DNA为模板,采用PCR技术克隆出紫杉烷2α-羟基化酶的DNA序列,利用在线比对和生物学软件... 紫杉烷2α-羟基化酶是形成紫杉醇核心骨架的羟基化反应关键酶之一,以taxusin作为底物进行氧化生成2α,7β-dihydroxytaxusin。利用蔓地亚红豆杉的总DNA为模板,采用PCR技术克隆出紫杉烷2α-羟基化酶的DNA序列,利用在线比对和生物学软件分析其内含子,采用外显子拼接法克隆出紫杉烷2α-羟基化酶基因的cDNA序列。测序结果表明该基因含有1个1 488 bp的开放阅读框,编码495个氨基酸的多肽;同源性比较分析结果表明,其碱基序列及氨基酸序列与已经报道的加拿大红豆杉的紫杉烷2α-羟基化酶基因的一致性为分别为98%和89%。利用SWISS-PROT、DNAMAN等生物信息学工具对其列进行了序列分析,为利用代谢工程的方法生产紫杉醇或其前体物质提供了分子基础。 展开更多

关键词 蔓地亚红豆杉 紫杉醇 紫杉烷2α-羟基化酶 基因克隆 生物信息学

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花生白藜芦醇合酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量：1

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作者 黄秀琴 郭丽琼 +3 位作者 李小明 林俊芳 袁致浩 谭铭琛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期69-74,共6页

利用Protparam、iPSORT prediction、ProtScale、SOPMA、Swiss-Modeling和Scan Prosite等生物信息学工具分别对其理化性质、信号肽、疏水性、亲水性、二级结构和三级结构进行分析。以花生粤油45总DNA和总RNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术... 利用Protparam、iPSORT prediction、ProtScale、SOPMA、Swiss-Modeling和Scan Prosite等生物信息学工具分别对其理化性质、信号肽、疏水性、亲水性、二级结构和三级结构进行分析。以花生粤油45总DNA和总RNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术克隆花生白藜芦醇合酶基因的DNA和cDNA序列,并利用SWISS-PROT、DNAMAN等生物信息学工具对其基因和蛋白质序列进行了分析。测序结果显示,该基因的DNA和cDNA序列长度分别为1 498 bp和1 251 bp,cDNA序列具有完整的开放性阅读框,编码389个氨基酸的多肽。该白藜芦醇合酶氨基酸368-378位点上存在芪合酶家族的特征位点GVLFGFGPGLT。同源性分析表明,其碱基序列与已报道的花生白藜芦醇合酶基因的一致性为99%,其氨基酸序列与已报道的花生白藜芦醇合酶氨基酸序列的一致性为100%。 展开更多

关键词 花生 白藜芦醇合酶 基因克隆 序列分析

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